臍血淋巴細胞亞群水平及其臨床意義

1、臍血淋巴細胞亞群水平及其臨床意義作者：王軍，何艷芳，陳群娥，張紹美，趙光，高莉莉【摘?！磕康臋z測新生兒臍血淋巴細胞亞群水平，探討新生兒 臍血的免疫功能。方法24例止常足月口然分娩新生兒臍血作為研究 對象，26例健康成年獻血員(男女不分)的血液作為對照，采用流式 細胞術(shù)(fcm)檢測臍血和成人血液中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、 cd19 ( + )、cd16+56 ( + )、cd4 ( + ) /cd8 ( + )的水平，對結(jié)果進行統(tǒng) 計學分析。結(jié)果臍血中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )的量明顯低于 對照組(p<0. 01或v0.

2、 05)； cd4 ( + ) /cd8 ( + )的水平明顯高于對 照組(pv0.01)； cd19 ( + )、cd16+56 ( + )的水平與對照組相比差異 無顯著性(p>0. 05)o結(jié)論 臍血的淋巴細胞免疫功能低于健康成人?！娟P(guān)鍵詞】臍血；免疫功能；淋巴細胞亞群；流式細胞術(shù)abstract: objective to study the levels of lymphocyte subsets in cord blood and learn the immune function of cord blood. methods flow cytometry was used t

3、o show the levels of lymphocyte subsets (cd3 (+) , cd4 (+) , cd8 (+) , cd19 (+) and cd16+56 (+ ) ) and to calculate the ratio of cd4 ( + ) /cd8 ( + ) in the cord blood from normal full-term neonates (cord blood group) and in the peripheral blood taken from healthy adult blood donors (control group)

4、the results were analyzed statistically.results the levels of cd3 ( + ) , cd4 ( + ) and cd8 ( + ) were significantly lower than that in control group (p<0.01 or < 0. 05). the value of cd4 ( + ) / cd8 ( + ) was significantly higher in the cord blood than that in the control (p < 0.01) no sig

5、nificant differences in the levels of cd19 ( + ) and cd16+56 (+ ) were found be twee n the cord blood and the con trol (p&gt;0.05) . conclusion the lymphocyte immune function of neonates' cord blood is lower than that of the peripheral blood from healthy adultskey words : cord blood ； immune

6、 function; lymphocyte subsets; flow cytometry臍血中具有高質(zhì)量的未成熟造血干/祖細胞，比骨髓和外周血更 有利丁造血功能的重建，臍血在基礎研究和臨床應用中不受道德倫理 的限制，臍血細胞的收集不會對新生兒造成傷害，臍血造血干/祖細胞 可以低溫保存，解凍后并不丟失增生能力。臍血屮含有豐富的免疫活 性物質(zhì)和功能不成熟的免疫細胞，這些活性物質(zhì)和免疫細胞在臍血造 血干/祖細胞的成功移植及腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用。本研究利用流式 細胞術(shù)(fcm)檢測臍血中 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 (+)、cd19 ( + )、 cd16+56 ( + )、c

7、d4 ( + ) /cd8 ( + )的水平,探討臍血淋巴細胞免疫功 能特點，為臍血在臨床的應用提供實驗依據(jù)。1資料和方法1. 1研究對象24例臍血是我院2004年9月一2006年4月采集 的，均為足月自然分娩健康新生兒臍血，胎齡3742周，平均(38. 4 ±2. 5)周；出生體重為 25004000 g,平均(3293±386) g, apgar 評分均為810分。26例對照組血清來自社會健康成年獻血員，無男 女區(qū)分。1.2方法 取臍血和對照組血液各4 ml,當日測定。采用fcm測 定臍血中 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、cd19 ( +

8、)、cd 16+56 ( + )、cd4( + )/cd8( + ),實驗所需的單克隆抗體(單抗)fitc-cd3(+)、fitc-cd4 (+)、 fitc-cd8 (+)、 fitc-cd19 (+)、 fitc-cd16+56 (+)、 fitc-cd4 (+ ) /cd8 ( + )購自美國becton-dickinson公司,流式細胞儀為美國 becton-dickinson 公司產(chǎn)品。1.3統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)以土s,采用spss13. 0軟件包處理結(jié)果。 所有數(shù)據(jù)進行t檢驗，p<0. 05為差異有顯著性。2結(jié)果臍血清cd19 ( + )、cd16+56 ( + )水平與對照組比

9、較差異無顯著 性(p>0. 05)；臍血中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )水平顯著低于對 照組(p<0. 01或<0. 05), cd4 ( + ) /cd8 (+)水平顯著高于對照組 (p<0.01)o見表1。表1臍血和成人血液中淋巴細胞亞群測定結(jié)果 比較3討論t淋巴細胞在宿主抗移植物免疫反應屮發(fā)揮重要作用，因此，從 亞群變化來觀察t淋巴細胞顯得尤為必要。外周成熟的t細胞無論在 表型還是在功能上都是異質(zhì)性群體，根據(jù)其表面標志細胞黏附分子 (cd)的不同，淋巴細胞可分為cd4 ( + )和cd8 ( + )細胞兩大亞群。cd3 ( + )為全細

10、胞標準，代表著t淋巴細胞總數(shù)，一般為cd4 ( + )和 cd8 ( + )細胞之和，cd4 ( + ) / cd8 ( + )比值恒定維持細胞免疫反應 的平衡。通常用檢測t淋巴細胞亞群的方法來間接反映細胞免疫功能 的狀況。cd4 ( + )能識別抗原，分泌多種淋巴因子，能輔助b細胞、t 細胞活化，從多方面調(diào)節(jié)和增強免疫力。cd8 ( + )細胞常在免疫應答 后期增多，能識別可溶性抗原，分泌抑制因子，減弱或抑制免疫應答。 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、cd4 ( + ) /cd8 ( + )表達水平高低代表 細胞免疫建立與否或免疫表達強弱，cd4 ( + ) /c

11、d8 ( + )比例關(guān)系是 機體免疫功能網(wǎng)絡調(diào)控的重要樞紐，調(diào)控免疫進行的方向。本實驗屮 臍血清cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )水平顯著低于對照組(pv0.01 或v0.05 ), cd4 ( + ) /cd8 ( + )水平顯著高于對照組(pv0.01),表 明臍血中t淋巴細胞免疫功能比健康成人低，因所采用的臍血均為止 常足月健康新生兒臍血。分析其原因可能是臍血中的免疫細胞發(fā)育不 成熟，抗原表達和功能活性低下所致。賈廷珍等1等研究認為新生 兒臍血t淋巴細胞發(fā)育不成熟，多為幼稚細胞或處于“抑制”狀態(tài)。 通常胎兒循環(huán)血中的t淋巴細胞數(shù)量在妊娠中期逐漸增加，其cd4( +

12、 ) /cd8 ( + )比例在出生時相對高于成人2o本研究結(jié)果顯示，與健康 成人相比，新生兒臍血t淋巴細胞亞群cd4 ( + ) /cd8 ( + )明顯升高, 此結(jié)果與既往部分研究結(jié)果一致，而與劉敬等3研究屮發(fā)現(xiàn)的cd4(+ ) /cd8 ( + )倒置，新生兒臍血t淋巴細胞亞群分布與正常人無顯 著性差異結(jié)果不同。究其原因，主要是由于眾多因素(包括種族、母體、 胎齡等)可影響新生兒t淋巴細胞亞群分布有關(guān)4o其中有可能影響 實驗結(jié)果的因素包括：實驗設計的差異(包括檢測方法、樣木量大 小)；影響t細胞亞群的因素較多，如藥物、心理活動變化等，t細 胞亞群的變化有晝夜節(jié)律，抽取血樣的時間對結(jié)果會有

13、影響。今后當 進一步擴大樣本數(shù)量進行研究。cd19 ( + )分布于除漿細胞外的b 細胞譜系發(fā)育的各個階段，是b細胞的重要標記，其功能類似于t細 胞表面的cd4 ( + )、cd8 ( + ),在b細胞活化及信號傳導中起協(xié)同受體 的作用，它調(diào)節(jié)b細胞的活化和增殖，為cr2復合體包括cd21 ( + )、 cd19 ( + )、cd81 ( + )的成員，參與b細胞的信號傳導。b細胞一方 面可作為apc加工處理變應原而活化th細胞，另一方面可接受其他 apc提呈的抗原的刺激而活化?；罨腷細胞特異性表面分子mhc、b7(cd80 ( + )和cd86 ( + )等表達上調(diào)，mhc與b7分別和t淋

14、巴細胞 表面受體分子tcr/cd3 ( + )及cd28 ( + )相結(jié)合，共同構(gòu)成一對共刺 激分子，產(chǎn)生胞內(nèi)共刺激信號，使t細胞活化。b細胞的主要功能是 產(chǎn)生抗體、提呈抗原及分泌細胞因子參與免疫調(diào)節(jié)等。cd10 ( + )分子 主要分布b細胞膜上，是不成熟b細胞的協(xié)同刺激分子，恒定表達于 b細胞，屬于tnf受體家族。cd40 ( + )的配體cd40 ( + ) -l與b細胞 上的cd40 ( + )結(jié)合，誘導b細胞再次免疫應答及形成生發(fā)中心。cd23(+ )在靜止期的b細胞上不表達，在成熟b細胞上低表達，主要在活 化的b細胞上表達，是激活b細胞亞群的表面標志。b細胞受到抗原 刺激后分裂增殖

15、，分化為漿母細胞，進而成熟為具有抗體生成能力的 漿細胞，合成并分泌免疫球蛋白發(fā)揮體液免疫功能作用。本研究結(jié)果 cd19 ( + )的表達與健康成人相比無顯著性差異，許利民等5研究 認為臍血中b細胞主要以不成熟b細胞亞群(cd19 ( + )、cd10 ( + ) 為主。因此認為臍血中b細胞數(shù)量雖然與健康成人相比無顯著性差異, 但是b細胞不成熟或未活化，是臍血移植早期體液免疫功能低下的主 要原因。cd 16+56 ( + )是自然殺傷細胞(nk細胞)的標志物，表達的量 可能與nk細胞的數(shù)量或功能有關(guān)。nk細胞是機體防御體系的第一道 屏障，是機體抗腫瘤、抗感染的重耍免疫因素。nk細胞起源于cd34

16、(+ )造血細胞6,在骨髓微環(huán)境內(nèi)發(fā)育成熟,幼稚型nk細胞在il-2、 il-15和c-kit配基等早期造血生長因子的作用下分化成熟，形成具 有免疫活性的成熟型nk細胞。成熟型nk細胞分泌y干擾素(ifn- y )、 腫瘤壞死因了 a (tnf-a )及粒細胞-巨噬細胞集落刺激因了(gm-csf) 等先天性免疫調(diào)節(jié)因子，參與機體早期抗感染免疫反應，通過自然細 胞毒性殺傷病毒感染細胞，通過fcrr iii受體與抗體fc部分結(jié)合介導 抗體依賴性細胞毒性作用。本研究結(jié)果顯示，臍血屮cd16+56 ( + )的 量和健康成人相比差異無顯著性。臍血移植后抗感染、抗腫瘤作用弱, 可能是因為臍血中的nk細胞

17、以幼稚型為主，nk細胞耒分化成熟從而 不能發(fā)揮正常的免疫功能。綜上所述，我們認為臍血淋巴細胞免疫功能較健康成人低，部分 原因是淋巴細胞發(fā)育尚不完全成熟或沒有受到抗原刺激而活化，至于 其他的因素尚需要進一步探討。【參考文獻】1 賈廷珍，劉長安，楊光臍血基礎與臨床研究j 中華放射醫(yī)學與防護雜志，2006, 26 (1)： 10-14.2 lapolla a, dalfra mg, sanzari m, et a 1. lymphocyte subsets and cytokines in women with gestational diabetes mel 1 itus and their ne

18、wborn j cytokine, 2005, 31 (4) :280-287.3 劉 敬，趙莉，李華，等臍血免疫功能初步研究j 中華兒童保健雜志，1997, 5 (1)： 6-74 cairo ms , wagner el , fraser j , et al. characterization of banked umbilical cord blood hematopoietic progenitor cells and lymphocyte subsets and correlation with ethnicity, birth weight, sex, and type of delivery: a cord blood transplantation (coblt) study report