復方丹參片檢驗方法確認方案

1、復方丹參片檢驗方法確認方案文件編號:文件審定部門簽名日期起草人審核人批準人浙江優(yōu)康制藥1. 概述：復方丹參片質量標準為已驗證的法定標準，含量測定方法為HPLC法，其它項目為實驗室日常測試步驟。根據(jù) 2021 年版?藥品質量管理標準?的要求，需 要對含量測定檢驗方法進行確認，包括專屬性、精密度、準確度三個方面。2. 目的：確認復方丹參片含量測定檢驗方法在我公司質量控制實驗室的適用性。3. 適用范圍：復方丹參片含量測定檢驗方法4. 條件：4.1. 檢驗操作規(guī)程齊全4.2. 設備相關標準操作規(guī)程齊全4.3. 檢驗、檢測儀器均已校驗5. 確認時間方案：從 年 月 日開始至 年 月 日完成。6. 含量測

2、定含丹參以丹參酮 IIA 計檢測方法確認6.1 確認要求及標準6.1.1. 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗 在專屬性試驗時一并進行 ：用十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-73 : 27為流動相；檢測波長為270nm。理論 板數(shù)以丹參酮 IIA 峰計算應不低于 2000，別離度大于 1.5。6.1.2. 專屬性 空白樣品溶液在與丹參酮 IIA 對照品溶液相同的保存時間處色 譜峰峰面積小于對照品峰面積的 3%。6.1.3. 精密度RSD應不得超過2.0%6.14準確度 丹參酮IIA的加樣回收率98.0%102%回收率的RSD、于2.0%。6.2. 材料和分析方法6.2.1. 試劑：對照品 ：丹參

3、酮 IIA批號 ：來源：樣品：復方丹參片批號 ：來源：試劑名稱：甲醇批號 ：來源：空白對照物：按復方丹參片質量標準制法自制缺丹參6.2.2. 儀器：高效液相色譜儀型號： 分析天平型號 ： 超聲處理器型號： 溶液配置：編號： 色譜柱編號：編號：編號：6.2.3.1. 對照品溶液配置 取丹參酮 IIA 對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶 中，加甲醇制成每 1ml 含 40 微克的溶液即得。供試品溶液取復方丹參片 20 片，除去糖衣片，精密稱定，研細，取約1g,精密稱定后置具塞棕色瓶中，精密參加甲醇25ml，密塞稱定重量，超聲處理 15 分鐘，放冷，再稱定重量并補足，搖勻濾過取續(xù)濾液置棕色 瓶中即得。

4、6.2.3.3. 空白物溶液 取空白物 20 片，除去糖衣片，精密稱定，研細， 取約1g，精密稱定后置具塞棕色瓶中，精密參加甲醇 25ml，密塞稱定重量, 超聲處理 15 分鐘，放冷，再稱定重量并補足，搖勻濾過取續(xù)濾液置棕色 瓶中即得。6234儲藏液A精密稱取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中, 加甲醇制成每 1ml 含 120 微克的溶液即得。6.2.4 分析方法：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-(73 : 27)為流動相；檢測波 長為270nm；進樣量為10 ul。6.3. 檢驗方法確實認6.3.1 專屬性6.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合

5、硅膠為填充劑； 以 甲醇-水-(73 : 27)為流動相；檢測波長為270nm。理論丹參酮IIA峰計算應不 低于 2000，別離度大于 1.5。6.3.1.2. 測定 分別精密吸取對照品溶液與空白樣品溶液各10,1注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖6313確認合格標準 空白樣品溶液在與丹參酮IIA對照品溶液相同的保存時間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%。6.32精密度重復性6.3.2.1.1. 取同一濃度的對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進樣6針10ul，記錄色譜圖。6.3.2.1.2. 確認合格標準 6針對照品溶液、供試品溶液峰面積的RSD應不得超過2.0%。6.322中間精密度6.3.2.

6、2.1. 在不同的日期和不同的儀器，不同檢驗員3人按的方 法重新制備樣液，分別計算含量。確認合格標準 每人RSD應不得超過2.0%，3人RSD應不得超過2.0%。準確度表1溶液編號參加儲藏液Aml參加空白對照物g容量瓶ml進樣濃度ug/ ml16.012528.827.012533.636.00.8203648.012538.457.00.8204269.012543.2710.012548811.012552.899.00.82054溶液19:將表2中規(guī)定量的儲藏液A和空白對照物置于規(guī)定量的具塞棕色容量瓶中，用甲醇補足至25ml,密塞稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷,再稱定重量并補足，搖勻濾

7、過取續(xù)濾液置棕色瓶中即得6.332精密吸取9份樣液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算回收率計算公式：測得值X100%回收率%=參加的對照品量.確認合格標準的 RSD小于 2.0%。丹參酮IIA的加樣回收率收率98.0%102%回收率7. 含量測定含丹參以丹酚酸B計檢測方法確認7.1. 確認要求及標準7.1.1. 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗在專屬性試驗時一并進行：用十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一甲醇一甲酸一水10: 30: 1: 59為流動相；檢 測波長為286nm。理論板數(shù)以丹酚酸B峰計算應不低于4000。7.1.2. 專屬性 空白樣品溶液在與丹酚酸 B對照品溶液相同的保存時間處色譜

8、 峰峰面積小于對照品峰面積的 3%。7.1.3. 精密度RSD應不得超過2.0%7.1.4. 準確度丹參酮IIA的加樣回收率大于收率 98.0%102%回收率的RSD 小于2.0%。7.2. 材料和分析方法7.2.1 .試劑：對照品：丹參酮IIA批號：來源:樣品：復方丹參片批號：來源:試劑名稱：乙腈批號：來源:試劑名稱：甲酸批號 ：來源：試劑名稱：甲醇批號 ：來源：空白對照物：按復方丹參片質量標準制法自制缺丹參7.2.2. 儀器：高效液相色譜儀型號：編號：色譜柱編號：編號：編號：分析天平型號 超聲處理器型號：溶液配置：7.2.3.1. 對照品溶液配置取丹酚酸 B 對照品適量，精密稱定，加水制成

9、每 1ml含 60 微克的溶液即得。供試品溶液 取復方丹參片 20 片，除去糖衣片，精密稱定，研細， 取約0.15g,精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加水適量，超聲處理 30分鐘，放 冷，加水至刻度，搖勻離心取上清夜即得。7.2.3.3. 空白物溶液 取空白對照物 20 片，除去糖衣片， 精密稱定， 研細， 取約0.15g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加水適量，超聲處理 30分鐘，放 冷，加水至刻度，搖勻離心取上清夜即得。7.2.4 分析方法：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈甲醇甲酸水10：30：1：59為流動相；檢測波長為286nm ;進樣量為10 ul。7.3.檢驗方法確實認7.

10、3.1 專屬性7.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以 乙腈甲醇甲酸水10: 30: 1: 59為流動相；檢測波長為286nm。理論 板數(shù)以丹酚酸 B 峰計算應不低于 4000。7312測定 分別精密吸取對照品溶液與空白樣品溶液各10卩,，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。確認合格標準 空白樣品溶液在與丹酚酸 B對照品溶液相同的保存間 處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的 3%。7.3.2. 精密度7.321重復性7.321.1. 取同一濃度的對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進樣6針10ul,記錄色譜圖7.3.2.1.2. 確認合格標準6針對照品溶液、供試品溶液

11、峰面積的RSD應不得超過2.0%。7.322中間精密度7.3.2.2.1. 在不同的日期和不同的儀器，不同檢驗員3人按的方 法重新制備樣液，分別計算含量。確認合格標準每人RSD應不得超過2.0%，3人RSD應不得超過2.0%。準確度取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含60微克的溶液。取上述研細的復方丹參片樣品0.09g，精密稱定10 份，分別置于50ml具塞量瓶中，并分別參加對照品溶液 0、10、10、10、20、 20、20、30、30、30ml，參加適量水超聲處理30分鐘，放冷后用水補足至刻度， 搖勻離心取上清夜即得。精密吸取10份樣液各10ul，注入液相色譜儀

12、，測定，計算回收率。計算公式:回收率%測得值-樣品中的量參加的對照品量x 100%7.333. 確認合格標準丹酚酸B的加樣回收率收率98.0%102%回收率的RSD小于 2.0%。8. 含量測定含三七以人參皂苷 Rg、人參皂苷Rb1、人參皂苷R1、人參皂苷Re 計檢測方法確認8.1. 確認要求及標準8.1.1. 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗在專屬性試驗時一并進行：用十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相 A,以水為流動相B,按表1的規(guī)定進行梯 度洗脫檢測波長為203nm。理論板數(shù)以人參皂苷 Rg峰計算應不低于6000,人 參皂苷Rg與人參皂苷Re的別離度應大于1.8.表2時間分鐘流動相A %

13、流動相B %035198135 5519 2981 7155 70297170 10029 4071 608.1.2. 專屬性 空白樣品溶液在與對照品溶液相同的保存時間處色譜峰峰面積 小于對照品峰面積的3%。8.1.3. 精密度RSD應不得超過2.0%8.1.4. 準確度參皂苷Rgi、人參皂苷 Rbi、人參皂苷R1、人參皂苷Re的加樣 回收率大于收率98.0%102% 回收率的RSD、于2.0%。8.2.材料和分析方法8.2.1. 試劑：8.2.2. 儀器：高效液相色譜儀型號:分析天平型號：超聲處理器型號：編號：色譜柱編號:編號:編號:對照品：丹參酮IIA批號：來源:樣品：復方丹參片批號：來源

14、:試劑名稱：乙腈批號：來源:試劑名稱：甲醇批號：來源:空白對照物：按復方丹參片質量標準制法自制缺三七溶液配置：8.231對照品溶液配置 精密稱取人參皂苷 Rg對照品、人參皂苷 Rb對照 品、人參皂苷Ri對照品、人參皂苷Re對照品適量，加70%甲醇制成每1ml含參 皂苷Rg及人參皂苷Rbi各0.2mg、人參皂苷Ri及人參皂苷Re各0.05mg的混合 溶液即得。供試品溶液取復方丹參片 10片，除去糖衣片，精密稱定，研細，取約1g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加70%甲醇50ml并稱定重量，超聲 處理 30 分鐘，放冷，稱定重量，用 70%甲醇補足減失的重量，搖勻濾過，取續(xù) 濾液即得。8.2.3

15、.3. 空白物溶液 取空白物 10片，除去糖衣片，精密稱定，研細， 取約1g，精密稱定后置50ml具塞量瓶中，加70%甲醇50ml并稱定重量，超聲 處理 30 分鐘，放冷，稱定重量，用 70%甲醇補足減失的重量，搖勻濾過，取續(xù) 濾液即得。8.2.4 分析方法：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以乙腈 為流動項A,以水為流動項B,按表1的規(guī)定進行梯度洗脫，進樣量為20 ul o8.3. 檢驗方法確實認8.3.1 專屬性8.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以 乙腈為流動相 A，以水為流動相 B，按表2的規(guī)定進行梯度洗脫檢測波長為

16、 203nm。理論板數(shù)以人參皂苷 Rgi峰計算應不低于6000,人參皂苷Rgi與人參皂 苷Re的別離度應大于1.8.8.3.1.2. 測定 分別精密吸取對照品溶液與空白樣品溶液各20,1注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。8.3.1.3. 確認合格標準 空白樣品溶液在與對照品溶液相同的保存間處色譜峰峰面積小于對照品峰面積的3%o8.3.2. 精密度8.321重復性8.321.1. 取同一濃度的對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進樣6針，記錄 色譜圖。8.3.2.1.2. 確認合格標準 6針對照品溶液、供試品溶液峰面積的RSD應不得超過2.0%。8.322中間精密度8.3.2.2.1. 在不同的日期和不同的儀器，不同檢驗員3人按的方 法重新制備樣液，分別計算含量。確認合格標準 每人RSD應不得超過2.0%，3人RSD應不得超過2.0%。準確度精密稱取人參皂苷Rg對照品、人參皂苷Rb對照品、人參皂苷Ri對 照品、人參皂苷Re對照品適量，加70%甲醇制成每1ml含參皂苷Rgi及人參皂 苷Rbi各0.2mg、人參皂苷R1及人參皂苷Re各0.05mg的