免疫濁度技術(shù)-文檔資料

1、實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫反應(yīng)進(jìn)展1897年 Kraus 就發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液（毒素）與相應(yīng) 抗血清混合出現(xiàn)沉淀1905年 Bechhold 把抗體放在明膠中，將抗原加于 其中，發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)可在凝膠中進(jìn)行1946年 Oudin 報告了試管免疫擴(kuò)散技術(shù)1965年 Mancini 提出單向免疫擴(kuò)散技術(shù)，使定性 免疫試驗(yàn)向定量化發(fā)展1966年 免疫濁度法的出現(xiàn)，使沉淀反應(yīng)達(dá)到快速、微 量、自動化的新階段。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫測定原理免疫測定原理利用抗原抗體反應(yīng)檢測標(biāo)本中微

2、量物質(zhì)利用抗原抗體反應(yīng)檢測標(biāo)本中微量物質(zhì) 抗原抗原 + + 抗體抗體 抗原抗體復(fù)合物抗原抗體復(fù)合物 Ag + Ab Ag Ag + Ab Ag * * Ab Ab實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫測定特點(diǎn)免疫測定特點(diǎn)特異性特異性 抗原性不同的物質(zhì)不干擾敏感性敏感性 g-ng-pg可測物可測物 蛋白質(zhì)，酶，激素，藥物 ， 毒品實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS免疫檢測的基礎(chǔ)免疫檢測的基礎(chǔ)抗原抗體間的特異性反應(yīng)抗原抗體間的特異性反應(yīng) 手工操作手工操作 自動化分析自動化分析免疫比濁分析技術(shù)發(fā)展

3、免疫比濁分析技術(shù)發(fā)展實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)兩兩個個階階段段Edited by E. Dalla Dea ESTS免免疫疫比比濁濁法法分分類類當(dāng)一束光當(dāng)一束光線通過溶線通過溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收兩個吸收兩個因素的影因素的影響而使光響而使光的強(qiáng)度減的強(qiáng)度減弱弱實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS透射比濁 / 散射比濁光源濾光片反應(yīng)杯透射光檢測散射光檢測實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS一、散射免疫比濁分析原理一、散射免疫比濁分析原理散射比濁法：散射比濁法：在液相中可溶性抗

4、原、抗體特異性結(jié)合，形成一定大小的復(fù)合物粒子，當(dāng)入射光沿水平軸照射在粒子顆粒上時，光線被顆粒吸收或折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，其偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長和復(fù)合物顆粒大小和多少有關(guān)。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比，即待測抗原越多，形成的復(fù)合物越多，散射光就越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 是將沉淀反應(yīng)與散射比濁分析相結(jié)合，是將沉淀反應(yīng)與散射比濁分析相

5、結(jié)合，“在抗原抗體反在抗原抗體反 應(yīng)幾秒鐘后開始測定峰值信號應(yīng)幾秒鐘后開始測定峰值信號”。 目的是排除抗原抗體反應(yīng)的目的是排除抗原抗體反應(yīng)的不穩(wěn)定性，降低檢測誤差不穩(wěn)定性，降低檢測誤差。時間時間檢測分兩個檢測分兩個在預(yù)反應(yīng)時段，在預(yù)反應(yīng)時段，加小量樣本與加小量樣本與抗原抗體反應(yīng)，抗原抗體反應(yīng)，測定第一次散測定第一次散射光信號值射光信號值加全量樣本，加全量樣本，約反應(yīng)約反應(yīng) 2 2分分鐘后，第二鐘后，第二次測定散射次測定散射光信號光信號信號峰值信號峰值計算機(jī)處理計算機(jī)處理轉(zhuǎn)換為樣轉(zhuǎn)換為樣品濃度品濃度實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（二）（二）

6、抗原過量檢測抗原過量檢測抗體過量抗體過量 在檢測中抗體結(jié)合抗原的能力可達(dá)到相當(dāng)于正常在檢測中抗體結(jié)合抗原的能力可達(dá)到相當(dāng)于正常 血清的血清的5050倍以上，以保證高濃度樣本中的抗原與倍以上，以保證高濃度樣本中的抗原與 抗體的結(jié)合?？贵w的結(jié)合。對抗原過量進(jìn)行閾值限定對抗原過量進(jìn)行閾值限定 先測定預(yù)反應(yīng)時段抗原先測定預(yù)反應(yīng)時段抗原- -抗體復(fù)合物的散射光信抗體復(fù)合物的散射光信 號，若未超過閾值，可進(jìn)行全量樣本測定。若超號，若未超過閾值，可進(jìn)行全量樣本測定。若超 過閾值，提示樣品濃度過高，需稀釋后測定。過閾值，提示樣品濃度過高，需稀釋后測定。采用兩項保證措施：采用兩項保證措施：實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免

7、疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。 所謂速率，是在所謂速率，是在單位時間內(nèi)單位時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成抗原抗體結(jié)合形成 復(fù)合物的速度。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的復(fù)合物的速度。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的 速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài) 的速率比濁分析。的速率比濁分析。 當(dāng)儀器測定到某一時當(dāng)儀器測定到某一時 間內(nèi)形成速率下降時，間內(nèi)形成速率下降時， 即出現(xiàn)即出現(xiàn)速率峰速率峰，該峰，該峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所

8、測抗原的量。測抗原的量。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 （二）（二）抗原過量檢測抗原過量檢測 設(shè)計原理設(shè)計原理 速率峰值一般在速率峰值一般在2525秒時出現(xiàn)。秒時出現(xiàn)。 在反應(yīng)介質(zhì)中加入一定量的促凝劑，可加速抗在反應(yīng)介質(zhì)中加入一定量的促凝劑，可加速抗 原抗體復(fù)合物的形成，以減少反應(yīng)時間。原抗體復(fù)合物的形成，以減少反應(yīng)時間。 速率法的優(yōu)點(diǎn)：是快速率法的優(yōu)點(diǎn)：是快 速、不需要減去樣本速、不需要減去樣本 和試劑本底讀數(shù)，校和試劑本底讀數(shù)，校 正結(jié)果也較穩(wěn)定。正結(jié)果也較穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited

9、 by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理當(dāng)光源的光路（角度與正前方夾角為當(dāng)光源的光路（角度與正前方夾角為0 00 0時），通時），通 過一定體積的溶液，由于溶液中抗原抗體結(jié)合復(fù)過一定體積的溶液，由于溶液中抗原抗體結(jié)合復(fù) 合物粒子對入射光因反射、吸收或散射而衰減。合物粒子對入射光因反射、吸收或散射而衰減。 透射光的強(qiáng)度和形成的復(fù)合物的量呈反比。透射光的強(qiáng)度和形成的復(fù)合物的量呈反比。檢測器檢測器檢測器檢測器光源光源 透鏡透鏡 濾光片濾光片平光線平光線散散射射光光透射光透射光 散射比濁、透射比濁光路圖散射比濁、透射比濁光路圖實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited

10、by E. Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理v 是個極其簡單的方法。在抗原過量情況下，與待測是個極其簡單的方法。在抗原過量情況下，與待測樣品中相應(yīng)的樣品中相應(yīng)的IgIg發(fā)生抗原發(fā)生抗原- -抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。v 測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。讀數(shù)以測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。讀數(shù)以吸收單位（吸收單位（A A）或）或ODOD值表示，值表示，A A值反映了入射光和透射值反映了入射光和透射光的比率。待測物中光的比率。待測物中IgIg含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出。含量可通過

11、標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出。v 待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比。光呈反比。v 反應(yīng)在反應(yīng)在PEGPEG的作用下，加速復(fù)合物的形成。的作用下，加速復(fù)合物的形成。 實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS（二）（二）實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS 檢檢范范圍圍測測如免疫球蛋白如免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM 、 ；補(bǔ)體；補(bǔ)體C3C3、C4C4；血漿蛋白血漿蛋白AATAAT、TRFTRF、A1MA1M、CER

12、CER；尿蛋白系列尿蛋白系列尿微量白蛋白尿微量白蛋白 視黃醇結(jié)合蛋白視黃醇結(jié)合蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 2 2 微球蛋白微球蛋白( ( 2 2 M) M) 1 1 微球蛋白微球蛋白( ( 1 1 M)M)小分子治療藥物小分子治療藥物檢檢范范圍圍測測血漿、體液中特種蛋白血漿、體液中特種蛋白實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS乳膠2 種反應(yīng)模式:+實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS反應(yīng)過程圖緩沖液緩沖液試劑試劑1攪拌器攪拌器樣品樣品混混勻勻膠乳膠乳試劑試劑2混混勻勻第一次讀數(shù)第一次讀數(shù)第二次讀數(shù)第二

13、次讀數(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS吸光度/時間0 02 24 46 68 81010121214140 01 12 23 34 45 56 67 78 89 9 1010 1111 1212 1313 1414時間時間OD (吸光度吸光度)空白空白標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS檢測模式圖最終點(diǎn)最終點(diǎn) D最終點(diǎn)最終點(diǎn) - 樣品空白樣品空白 D - A最終點(diǎn)最終點(diǎn) 初始點(diǎn)初始點(diǎn) D - B動力學(xué)動力學(xué) (C - B)/ 時間時間試劑試劑2（膠乳或抗血清）（膠乳或抗血清）樣品和試

14、樣品和試劑劑1（緩（緩沖液）沖液）時間D.O.OD 變化變化實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS鉤狀效應(yīng)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS鉤狀現(xiàn)象抗體過剩區(qū) 沉淀隨抗原量的加入而增多 上清液中仍然有游離的抗體平衡區(qū) 產(chǎn)生最大量的沉淀 沒有游離的抗原和抗體抗原過剩區(qū) 由于抗原量過多，造成小的免疫復(fù)合 物出現(xiàn), 上清液中有游離的抗原實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTS各組份的作用緩沖體系緩沖體系: : 提供最適合反應(yīng)條件,提高反應(yīng)靈敏度。避免非特異

15、性反應(yīng)?？s短反應(yīng)時間。主要反應(yīng)物主要反應(yīng)物: : 完成抗原抗體反應(yīng)所需的成份。校準(zhǔn)校準(zhǔn): : 建立測定吸光度和物質(zhì)含量之間的計算關(guān)系。質(zhì)控質(zhì)控: : 驗(yàn)證校準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)實(shí)驗(yàn)免疫濁度技術(shù)Edited by E. Dalla Dea ESTSEdited by E. Dalla Dea ESTSEdited by E. Dalla Dea ESTS IMMAGE Immunochemistry SystemEdited by E. Dalla Dea ESTS IMMAGE IMMAGE 雙光徑速雙光徑速率濁度分析系統(tǒng)率濁度分析系統(tǒng)高效蛋白分析儀高效蛋白分析儀隨機(jī)隨機(jī)TDMTDM分析儀分析

16、儀兩種技術(shù)兩種技術(shù)( (透射法透射法+ +散射法散射法) )，四種方法，四種方法速率散射比濁法速率散射比濁法 ( ( 蛋白檢測蛋白檢測) )速率抑制散射比濁法速率抑制散射比濁法 ( ( TDM)TDM)近紅外顆粒速率法免疫分析近紅外顆粒速率法免疫分析( (Rate NIPIA)Rate NIPIA)速率抑制速率抑制NIPIA ( NIPIA ( 低分子量低分子量TDM)TDM) Edited by E. Dalla Dea ESTSIMMAGEIMMAGE檢測原理檢測原理- 速率散射法速率散射法(670(670nmnm)ARRAYARRAY的優(yōu)秀傳統(tǒng)：的優(yōu)秀傳統(tǒng)： 20 20年實(shí)踐證明卓越的精

17、確度和準(zhǔn)確度年實(shí)踐證明卓越的精確度和準(zhǔn)確度激光光源激光光源Edited by E. Dalla Dea ESTS近紅外顆粒透射免疫分析法：近紅外顆粒透射免疫分析法： 速率透射法速率透射法(940(940nm)nm)增加高敏分析檢測菜單： 地高辛，H-CRP，鐵蛋白排除高膽紅素和溶血性樣本的非特異性干擾LED光源光源Edited by E. Dalla Dea ESTS12Conjugate-antibody complexing213Inhibition of complexing by hapten (drug)1. Conjugate (hapten on carrier)2. Antib

18、ody3. Hapten (drug)速率散射抑制法速率散射抑制法(670(670nm)nm) TDM TDM檢測檢測Edited by E. Dalla Dea ESTSOn board cooling system試劑冷藏系統(tǒng)試劑冷藏系統(tǒng)-增加試劑穩(wěn)定性增加試劑穩(wěn)定性四個緩沖液位四個緩沖液位-完成完成1400個測試個測試樣品針試劑針分離樣品針試劑針分離- 同時完成取樣和加試劑同時完成取樣和加試劑 提高檢測速度提高檢測速度 全面的液面探測系統(tǒng)全面的液面探測系統(tǒng) Level Sensor Fluid SensorIMMAGEEdited by E. Dalla Dea ESTS3939個半永久性反應(yīng)杯個半永久性反應(yīng)杯-同時檢測質(zhì)控、定標(biāo)和樣本同時檢測質(zhì)控、定標(biāo)和樣本全面的條形碼系統(tǒng)全面的條形碼系統(tǒng)( (各種通用條形碼各種通用條形碼) )7272個樣本位個樣本位( (每試劑位檢測每試劑位檢測2424種項目種項目) )真正的隨機(jī)急診真正的隨機(jī)急診功能功能(不需停機(jī)不需停機(jī))IMMAGEEdited by E. Dalla Dea ESTS-自動校正光源自動校正光源- - 原始試管功能原始試管功能- 靈活的系統(tǒng)界面：觸摸式，鼠標(biāo)，鍵盤靈活的系統(tǒng)界面：觸摸式，鼠標(biāo)，鍵盤- 24小時隨時