DNA重組技術(shù)的基本工具(精校版)

1、.1專題專題1 基因工程基因工程1-1 DNA1-1 DNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具.2設(shè)想？設(shè)想？ 能否培養(yǎng)出具有抗蟲能否培養(yǎng)出具有抗蟲性狀的抗蟲棉呢？性狀的抗蟲棉呢？.3.4.5.6.7.81-1 DNA1-1 DNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀” 限制酶限制酶 “分子縫合針分子縫合針” DNADNA連接酶連接酶 “分子運(yùn)輸車分子運(yùn)輸車” 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 .9黏性末端黏性末端平末端平末端4 4、切割方式：、切割方式：錯(cuò)位切和平切錯(cuò)位切和平切.10ATGCATGC限制酶切割磷酸二酯鍵限制酶切割磷酸二酯鍵.11限制性內(nèi)切酶

2、作用過程.12 1 1、大腸桿菌的一種限制酶大腸桿菌的一種限制酶（EcoR)EcoR)能識別能識別GAATTCGAATTC序列，并在序列，并在G G和和A A之間切開形成之間切開形成黏性黏性末端。末端。 2 2、SmaSma能識別能識別CCCGGGCCCGGG序列，序列，并在并在C C和和G G之間切割形成之間切割形成平平末端末端 。常見的兩種限制酶.13.14黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端.15.16.17基因的針線：基因的針線：DNADNA連接酶連接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG

3、C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同種限制酶切割用同種限制酶切割.18ATGCATGC連接酶連接連接酶連接磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵DNADNA連接酶的作用過程：連接酶的作用過程：二、分子縫合針二、分子縫合針DNA連接酶連接酶.19 T磷磷酸酸二二酯酯鍵鍵1234512345 A.20作用部位：作用部位：（扶手）（扶手）（梯子）（梯子）.21連接連接黏性黏性末端末端連接連接黏性黏性末端和末端和平平末端末端分類分類作用作用E.coli DNA連接酶連接酶連接酶種類：連接酶種類：T4DNA連接酶連接酶.22兩兩DNADNA片段要具有片段要具有互補(bǔ)互

4、補(bǔ)的黏性末端的黏性末端才能拼起來才能拼起來DNADNA連接酶的縫合作用連接酶的縫合作用可把黏性末端之間的可把黏性末端之間的縫隙縫隙“縫合縫合”起來起來，注意：注意：DNADNA連接酶可連接雙鏈連接酶可連接雙鏈DNADNA中的中的DNADNA單鏈缺口，單鏈缺口，但不能連接單鏈但不能連接單鏈DNADNA！.23DNADNA連接酶與連接酶與DNADNA聚合酶是一回事嗎？聚合酶是一回事嗎？T4 DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNADNA連接酶的縫合作用連接酶的縫合作用.24A A T T GA A T T GC CA AA AT TT TA AA AT TT TDNA聚合酶

5、聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶的作用聚合酶的作用返回返回.25核苷酸分子的連接核苷酸分子的連接：ATGCATGCDNADNA聚合酶連接單鏈聚合酶連接單鏈DNADNA把單個(gè)脫氧核苷酸連接到把單個(gè)脫氧核苷酸連接到DNADNA片段上片段上.26都能催化形成都能催化形成磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)都是蛋白質(zhì)不需要不需要需要需要形成完整的重形成完整的重組組DNA分子分子形成形成DNA的一條的一條鏈鏈基因工程基因工程DNA復(fù)制復(fù)制DNA連接酶與連接酶與DNA聚合酶的比較聚合酶的比較只能將單個(gè)核苷酸只能將單個(gè)核苷酸連接到已有的連接到已有的DNADNA片段上，形片段上，形成磷酸二酯鍵成磷酸二酯鍵在兩個(gè)在兩個(gè)DNADNA片片段之間形成磷段之間形成磷酸二酯鍵酸二酯鍵.27三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 1 1、基因工程的載體被喻為、基因工程的載體被喻為：分子運(yùn)輸車分子運(yùn)輸車2 2、常用載體的種類、常用載體的種類：衍生物衍生物.28.29作為載體的必要條件作為載體的必要條件1. 1.能夠自我復(fù)制能夠自我復(fù)制能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)；2.2.有一個(gè)至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)有