核酸雜交技術(shù)PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù)第1頁(yè)/共69頁(yè)Tm0.41(GC)%第2頁(yè)/共69頁(yè)或DNA單鏈之間形成雜交分子。第3頁(yè)/共69頁(yè)第4頁(yè)/共69頁(yè)n交可以分為液相雜交和固相雜交。固相雜交是將待測(cè)核酸先固定在固相支持物上，然后與溶液中的游離探針進(jìn)行雜交，形成的雜交體結(jié)合在固相支持物上。第5頁(yè)/共69頁(yè)第6頁(yè)/共69頁(yè)第7頁(yè)/共69頁(yè)第8頁(yè)/共69頁(yè)第9頁(yè)/共69頁(yè)第10頁(yè)/共69頁(yè)第11頁(yè)/共69頁(yè)第12頁(yè)/共69頁(yè)n32P 主要以-32PNTP 或-32PdNTP 形式通過酶促反應(yīng)摻入核酸探針，第13頁(yè)/共69頁(yè)第14頁(yè)/共69頁(yè)生物素生物素-11-dUTP生物素是親和素（生物素是親和素（a

2、vidin）的天然配體。用生物素化）的天然配體。用生物素化探針與待測(cè)核酸雜交之后，可以用偶聯(lián)有報(bào)道酶（例探針與待測(cè)核酸雜交之后，可以用偶聯(lián)有報(bào)道酶（例如堿性磷酸酶）的親和素與雜交體結(jié)合，然后，加報(bào)如堿性磷酸酶）的親和素與雜交體結(jié)合，然后，加報(bào)道酶底物（例如堿性磷酸酶的底物道酶底物（例如堿性磷酸酶的底物X-磷酸酯），通過磷酸酯），通過呈色反應(yīng)或產(chǎn)生發(fā)光產(chǎn)物進(jìn)行分析呈色反應(yīng)或產(chǎn)生發(fā)光產(chǎn)物進(jìn)行分析第15頁(yè)/共69頁(yè)第16頁(yè)/共69頁(yè)第17頁(yè)/共69頁(yè)5ATCGTAGCGATTAGGCCTACCGA33TAGCATCGCTAATCCGGATGGCT5切口平移法（切口平移法（nick translati

3、on)DNA聚合酶聚合酶I假設(shè)：假設(shè)：dGTP用用32P第18頁(yè)/共69頁(yè)第19頁(yè)/共69頁(yè)第20頁(yè)/共69頁(yè)3ATCGTAGCGATTAGGCCTACCGA55TAGCA3隨機(jī)引物法（隨機(jī)引物法（random priming)Klennow片段片段假設(shè)：假設(shè)：dGTP用用32P第21頁(yè)/共69頁(yè)第22頁(yè)/共69頁(yè)第23頁(yè)/共69頁(yè)第24頁(yè)/共69頁(yè)第25頁(yè)/共69頁(yè)第26頁(yè)/共69頁(yè)第27頁(yè)/共69頁(yè)第28頁(yè)/共69頁(yè)第29頁(yè)/共69頁(yè)第30頁(yè)/共69頁(yè)第31頁(yè)/共69頁(yè)第32頁(yè)/共69頁(yè)第33頁(yè)/共69頁(yè)第34頁(yè)/共69頁(yè)（一）基本步驟（一）基本步驟樣品制備樣品制備電泳分電泳分離離變性變性

4、印跡印跡固定固定預(yù)雜預(yù)雜交交雜雜交交洗洗膜膜檢測(cè)檢測(cè)與分析與分析第35頁(yè)/共69頁(yè)第36頁(yè)/共69頁(yè)第37頁(yè)/共69頁(yè)第38頁(yè)/共69頁(yè)第39頁(yè)/共69頁(yè)第40頁(yè)/共69頁(yè)第41頁(yè)/共69頁(yè)第42頁(yè)/共69頁(yè)n用于檢測(cè)RNA（主要是mRNA）,用于研究基因表達(dá)。第43頁(yè)/共69頁(yè)第44頁(yè)/共69頁(yè)第45頁(yè)/共69頁(yè)第46頁(yè)/共69頁(yè)病原性微生物和生物制品中的核酸污染狀況第47頁(yè)/共69頁(yè)第48頁(yè)/共69頁(yè)第49頁(yè)/共69頁(yè)第50頁(yè)/共69頁(yè)第51頁(yè)/共69頁(yè)第52頁(yè)/共69頁(yè)第53頁(yè)/共69頁(yè)第54頁(yè)/共69頁(yè)第55頁(yè)/共69頁(yè)第56頁(yè)/共69頁(yè)第57頁(yè)/共69頁(yè)第58頁(yè)/共69頁(yè)第59頁(yè)/共69頁(yè)第60頁(yè)/共69頁(yè)第61頁(yè)/共69