4蛙心灌流課件

1、4蛙心灌流實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 6 離子和藥物對(duì)蟾蜍心臟的影響離子和藥物對(duì)蟾蜍心臟的影響 蛙心灌流蛙心灌流4蛙心灌流n心臟具有心臟具有自動(dòng)節(jié)律性自動(dòng)節(jié)律性。離體心臟用理化性質(zhì)近似于。離體心臟用理化性質(zhì)近似于血漿的生理溶液進(jìn)行灌流，以保持其新陳代謝順利血漿的生理溶液進(jìn)行灌流，以保持其新陳代謝順利進(jìn)行，這種節(jié)律性可維持較長(zhǎng)時(shí)間。進(jìn)行，這種節(jié)律性可維持較長(zhǎng)時(shí)間。n心臟正常節(jié)律性活動(dòng)有賴于內(nèi)外環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定，心臟正常節(jié)律性活動(dòng)有賴于內(nèi)外環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定，因此，改變灌流液成分，心臟的活動(dòng)便會(huì)產(chǎn)生一定因此，改變灌流液成分，心臟的活動(dòng)便會(huì)產(chǎn)生一定的變化。的變化。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x4蛙心灌流v 心肌細(xì)胞生物電活

2、動(dòng)的基礎(chǔ)是心肌細(xì)胞生物電活動(dòng)的基礎(chǔ)是 鈉、鉀、鈣等鈉、鉀、鈣等跨膜離子流跨膜離子流。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x v 細(xì)胞外液中這些離子濃度的變細(xì)胞外液中這些離子濃度的變 化會(huì)對(duì)心臟的活動(dòng)產(chǎn)生不同的化會(huì)對(duì)心臟的活動(dòng)產(chǎn)生不同的 影響。影響。4蛙心灌流v調(diào)節(jié)心臟活動(dòng)的調(diào)節(jié)心臟活動(dòng)的神經(jīng)、體液神經(jīng)、體液因素對(duì)心臟活動(dòng)的直接作用是神經(jīng)遞因素對(duì)心臟活動(dòng)的直接作用是神經(jīng)遞質(zhì)或激素與心肌細(xì)胞相應(yīng)質(zhì)或激素與心肌細(xì)胞相應(yīng)受體受體結(jié)合，導(dǎo)致心臟活動(dòng)的增強(qiáng)或減弱。結(jié)合，導(dǎo)致心臟活動(dòng)的增強(qiáng)或減弱。v交感神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放遞質(zhì)交感神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放遞質(zhì)去甲腎上腺素，作用于心肌去甲腎上腺素，作用于心肌細(xì)胞上的細(xì)

3、胞上的受體，使心肌收縮力增強(qiáng)；迷走神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋受體，使心肌收縮力增強(qiáng)；迷走神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放遞質(zhì)放遞質(zhì)乙酰膽堿，作用于心肌細(xì)胞膜上的乙酰膽堿，作用于心肌細(xì)胞膜上的M受體，對(duì)心肌細(xì)胞起受體，對(duì)心肌細(xì)胞起抑制作用，使心肌的自律性降低。抑制作用，使心肌的自律性降低。v特異的受體阻斷劑能阻斷相應(yīng)的遞質(zhì)與受體的相互作用。特異的受體阻斷劑能阻斷相應(yīng)的遞質(zhì)與受體的相互作用。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x4蛙心灌流n學(xué)習(xí)離體蛙心的制備及其灌流方法。學(xué)習(xí)離體蛙心的制備及其灌流方法。n觀察鈣、鉀等離子，異丙腎上腺素、乙酰膽堿、觀察鈣、鉀等離子，異丙腎上腺素、乙酰膽堿、阿托品、普萘洛爾等藥物對(duì)心臟活動(dòng)的

4、影響。阿托品、普萘洛爾等藥物對(duì)心臟活動(dòng)的影響。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)對(duì)象與器材實(shí)驗(yàn)對(duì)象與器材n蟾蜍（雄性），兩棲類手術(shù)器械，蟾蜍（雄性），兩棲類手術(shù)器械，八木氏套管八木氏套管，蛙心灌，蛙心灌流架，蛙心夾，流架，蛙心夾，萬能滑輪萬能滑輪，換能器，鐵支架，蛙板，換能器，鐵支架，蛙板n林格溶液，林格溶液， 4 4CaClCaCl2 2，4 4KClKCl，0.010.01腎上腺素，腎上腺素，0.010.01乙酰膽堿（乙酰膽堿（AchAch），），0.1%0.1%普萘洛爾普萘洛爾， 0.1%0.1%阿托品阿托品八木氏套管八木氏套管萬能滑輪萬能滑輪4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟n離

5、體蛙心的制備離體蛙心的制備 暴露心臟：暴露心臟：取一只蟾蜍，雙毀髓后背位固定于蛙板上。剪開取一只蟾蜍，雙毀髓后背位固定于蛙板上。剪開胸腹部皮膚、肌肉，剪斷左右烏喙骨和鎖骨。將胸腹部皮膚、肌肉，剪斷左右烏喙骨和鎖骨。將整個(gè)胸腔暴露。整個(gè)胸腔暴露。將胸腺、心包膜、動(dòng)脈膜、肝系膜去除干凈，辨將胸腺、心包膜、動(dòng)脈膜、肝系膜去除干凈，辨認(rèn)心臟結(jié)構(gòu)及認(rèn)心臟結(jié)構(gòu)及9條重要血管的位置。條重要血管的位置。4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟n離體蛙心的制備離體蛙心的制備血管結(jié)扎：血管結(jié)扎：結(jié)扎右主動(dòng)脈結(jié)扎右主動(dòng)脈：在右主動(dòng)脈下穿過兩根線，分別結(jié)扎，：在右主動(dòng)脈下穿過兩根線，分別結(jié)扎，中間剪斷。中間剪斷。 總結(jié)扎線總結(jié)扎

6、線：左右肝靜脈和左右肺靜脈之間穿雙線，其中：左右肝靜脈和左右肺靜脈之間穿雙線，其中一條線的一端自左主動(dòng)脈下方，向動(dòng)物胸腔左上方穿出，一條線的一端自左主動(dòng)脈下方，向動(dòng)物胸腔左上方穿出，與另一端在動(dòng)物胸腔左上方打一個(gè)松結(jié)，將心室拉至胸與另一端在動(dòng)物胸腔左上方打一個(gè)松結(jié)，將心室拉至胸腔右下側(cè)，當(dāng)心房腔右下側(cè)，當(dāng)心房收縮上提收縮上提時(shí)于胸腔左上側(cè)位置結(jié)扎。時(shí)于胸腔左上側(cè)位置結(jié)扎。將兩側(cè)前腔靜脈、左右肺靜脈結(jié)扎在內(nèi)，從結(jié)扎線以外將兩側(cè)前腔靜脈、左右肺靜脈結(jié)扎在內(nèi)，從結(jié)扎線以外剪斷。注意剪斷。注意遠(yuǎn)離靜脈竇遠(yuǎn)離靜脈竇。 4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟n離體蛙心的制備離體蛙心的制備插管插管：左肝靜脈插管左肝靜

7、脈插管：在左右肝靜脈和后腔靜脈下穿線，打一個(gè)松結(jié)，：在左右肝靜脈和后腔靜脈下穿線，打一個(gè)松結(jié)，在左肝靜脈遠(yuǎn)心端沿向心方向剪開一個(gè)楔形切口（大小約為管在左肝靜脈遠(yuǎn)心端沿向心方向剪開一個(gè)楔形切口（大小約為管徑的徑的1/2），將裝滿灌流液的靜脈插管（粗管）插入左肝靜脈，），將裝滿灌流液的靜脈插管（粗管）插入左肝靜脈，見蛙心膨脹變白后結(jié)扎線扣。用灌流液將心臟內(nèi)血液完全洗出。見蛙心膨脹變白后結(jié)扎線扣。用灌流液將心臟內(nèi)血液完全洗出。左主動(dòng)脈插管左主動(dòng)脈插管：在左主動(dòng)脈弓下穿線，打一個(gè)松結(jié)，在動(dòng)脈管：在左主動(dòng)脈弓下穿線，打一個(gè)松結(jié)，在動(dòng)脈管壁遠(yuǎn)心端剪一個(gè)楔形切口（大小約為管徑的壁遠(yuǎn)心端剪一個(gè)楔形切口（大小約

8、為管徑的1/2），插入動(dòng)脈插），插入動(dòng)脈插管（細(xì)管），見有灌流液流出后結(jié)扎線扣。管（細(xì)管），見有灌流液流出后結(jié)扎線扣。注意動(dòng)脈插管勿插注意動(dòng)脈插管勿插入主動(dòng)脈圓錐。入主動(dòng)脈圓錐。蟾蜍心臟示意圖蟾蜍心臟示意圖4蛙心灌流n游離心臟游離心臟： 在左肝靜脈和左主動(dòng)脈結(jié)扎線外在左肝靜脈和左主動(dòng)脈結(jié)扎線外端剪斷，并剪掉與心臟相連的其端剪斷，并剪掉與心臟相連的其他組織，游離心臟。他組織，游離心臟。n離體心臟安放離體心臟安放：將離體心臟安放于蛙心灌流架上，將離體心臟安放于蛙心灌流架上，調(diào)整灌流液液面及動(dòng)脈插管出口調(diào)整灌流液液面及動(dòng)脈插管出口的高度，使灌流液既能在心臟收的高度，使灌流液既能在心臟收縮時(shí)順利搏出心

9、臟，又能形成循縮時(shí)順利搏出心臟，又能形成循環(huán)。環(huán)。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟蛙心灌流裝置蛙心灌流裝置A：動(dòng)脈插管：動(dòng)脈插管 B：靜脈插管：靜脈插管4蛙心灌流* * 標(biāo)本與儀器連接：標(biāo)本與儀器連接：用蛙心夾在心臟舒張期夾住用蛙心夾在心臟舒張期夾住心尖部，蛙心夾上的棉線通心尖部，蛙心夾上的棉線通過萬能滑輪轉(zhuǎn)換后與張力換過萬能滑輪轉(zhuǎn)換后與張力換能器相連。能器相連。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟4蛙心灌流斯氏插管法斯氏插管法斯氏插管法斯氏插管法儀器連接儀器連接4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟n觀察離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響：觀察離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響：打開軟件打開軟件選擇實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)選擇實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)循環(huán)循環(huán)蛙心灌流）蛙心灌流）開開始始示

10、波示波 開始開始記錄記錄 記錄正常心搏曲線。記錄正常心搏曲線。向靜脈插管內(nèi)林格溶液中向靜脈插管內(nèi)林格溶液中滴加滴加4CaCl2 2滴，觀察心滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即搏出現(xiàn)變化后立即將灌流液全部吸出，用新鮮林格溶將灌流液全部吸出，用新鮮林格溶液換洗液換洗23遍后，在靜脈插管內(nèi)注入新鮮林格溶液，遍后，在靜脈插管內(nèi)注入新鮮林格溶液，使心臟恢復(fù)正常搏動(dòng)；使心臟恢復(fù)正常搏動(dòng)；滴加滴加4CaCl2 6滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即換洗；滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即換洗；滴加滴加4KCl 12滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即換洗。滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即換洗。4蛙心灌流 正常心搏曲線正常心搏曲線 4CaCl2， 2

11、滴滴 一旦出現(xiàn)現(xiàn)象一旦出現(xiàn)現(xiàn)象立即立即換洗換洗，2-3次次正常心搏曲線正常心搏曲線4CaCl2， 6滴滴 一旦出現(xiàn)現(xiàn)象一旦出現(xiàn)現(xiàn)象立即立即換洗換洗，2-3次次正常心搏曲線正常心搏曲線4KCl， 1-2滴滴 一旦出現(xiàn)現(xiàn)象一旦出現(xiàn)現(xiàn)象立即立即換洗換洗，2-3次次正常心搏曲線正常心搏曲線 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟n觀察離子對(duì)心臟活觀察離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響：動(dòng)的影響：4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟n 觀察藥物對(duì)心臟活動(dòng)的影響：觀察藥物對(duì)心臟活動(dòng)的影響：記錄正常心搏曲線；記錄正常心搏曲線；滴加滴加0.01%腎上腺素腎上腺素1滴，觀察心搏情況，出現(xiàn)變化后立即滴，觀察心搏情況，出現(xiàn)變化后立即換洗換洗；滴滴加加0.1%

12、0.1%普萘洛爾普萘洛爾1滴，滴，約約1分鐘后分鐘后滴加滴加0.01%腎上腺素腎上腺素 1滴，滴，觀察心搏變化，與前一步進(jìn)行比較后，立即觀察心搏變化，與前一步進(jìn)行比較后，立即換洗換洗；滴加滴加0.01乙酰膽堿乙酰膽堿1滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即滴，觀察心搏出現(xiàn)變化后立即換洗換洗；滴加滴加0.1%阿托品阿托品1滴，滴，約約1分鐘后分鐘后滴加滴加0.01%乙酰膽堿乙酰膽堿1滴，滴，觀察心搏變化，與前一步進(jìn)行比較后，立即觀察心搏變化，與前一步進(jìn)行比較后，立即換洗換洗。n 注意：注意：每次更換灌流液時(shí)，液面應(yīng)保持一致。每次更換灌流液時(shí)，液面應(yīng)保持一致。4蛙心灌流 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 觀察藥物對(duì)心臟活動(dòng)的

13、影響：觀察藥物對(duì)心臟活動(dòng)的影響：正常心搏曲線正常心搏曲線 0.01%腎上腺素，腎上腺素， 1滴滴 一旦出現(xiàn)現(xiàn)象一旦出現(xiàn)現(xiàn)象立即立即換洗換洗，2-3次次 正常心搏曲線正常心搏曲線 0.1%普萘洛爾，普萘洛爾， 1滴滴 約約1分鐘后分鐘后0.01%腎上腺素，腎上腺素， 1滴滴 與前一步比較與前一步比較換洗換洗，2-3次次 正常心搏曲線正常心搏曲線正常心搏曲線正常心搏曲線 0.01乙酰膽堿乙酰膽堿 ， 1滴滴 一旦出現(xiàn)現(xiàn)象一旦出現(xiàn)現(xiàn)象立即立即換洗換洗，2-3次次 正常心搏曲線正常心搏曲線 0.1%阿托品阿托品， 1滴滴 約約1分鐘后分鐘后0.01%乙酰膽堿，乙酰膽堿， 1滴滴 與前一步比較與前一步比

14、較換洗換洗，2-3次次 正常心搏曲線正常心搏曲線4蛙心灌流 關(guān)鍵技術(shù)關(guān)鍵技術(shù)n血管的識(shí)別及結(jié)扎血管的識(shí)別及結(jié)扎n插管技術(shù)插管技術(shù)n游離心臟與換能器的連接游離心臟與換能器的連接n灌流液作用時(shí)間及更換時(shí)間的把握灌流液作用時(shí)間及更換時(shí)間的把握本實(shí)驗(yàn)需掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)本實(shí)驗(yàn)需掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)v蟾蜍離體心臟的制備蟾蜍離體心臟的制備v蟾蜍心臟插管技術(shù)蟾蜍心臟插管技術(shù)4蛙心灌流 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)n制備蛙心標(biāo)本時(shí)，勿傷及制備蛙心標(biāo)本時(shí)，勿傷及靜脈竇靜脈竇。心臟插管時(shí)，切勿。心臟插管時(shí)，切勿戳穿心壁及血管壁。戳穿心壁及血管壁。n各種液體滴管要專用，不可混用。每加一種溶液要用各種液體滴管要專用，不可混用。每加一種溶液

15、要用滴管混勻，以免所加溶液浮在上面，不易進(jìn)入心臟。滴管混勻，以免所加溶液浮在上面，不易進(jìn)入心臟。n蛙心插管內(nèi)液面應(yīng)保持一定高度，以蛙心插管內(nèi)液面應(yīng)保持一定高度，以1.5 cm 為宜。為宜。n張力換能器應(yīng)向下傾斜，以免液體進(jìn)入換能器。張力換能器應(yīng)向下傾斜，以免液體進(jìn)入換能器。n滴加試劑后，一旦出現(xiàn)變化應(yīng)立即用新鮮林格溶液換滴加試劑后，一旦出現(xiàn)變化應(yīng)立即用新鮮林格溶液換洗洗23次，以免心肌受損，而且必須待心臟恢復(fù)正常次，以免心肌受損，而且必須待心臟恢復(fù)正常后方能進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，以形成前后對(duì)照。后方能進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，以形成前后對(duì)照。n滴加藥品和換取新鮮林格溶液時(shí)，須及時(shí)標(biāo)記，以便滴加藥品和換取新鮮林格溶液時(shí)，須及時(shí)標(biāo)記，以便觀察分析。觀察分析。n化學(xué)藥物作用不明顯時(shí)，可再適量滴加，密切觀察藥化學(xué)藥物作用不明顯時(shí)，可再適量滴加，密切觀察藥物劑量添加后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。物劑量添加后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。n隨時(shí)用