瘦肉精殘留及其檢測(cè)技術(shù)重慶PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1瘦肉精殘留及其檢測(cè)技術(shù)重慶瘦肉精殘留及其檢測(cè)技術(shù)重慶第1頁(yè)/共62頁(yè)第2頁(yè)/共62頁(yè)第3頁(yè)/共62頁(yè)第4頁(yè)/共62頁(yè)第5頁(yè)/共62頁(yè)一、畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)及動(dòng)物源性產(chǎn)品簡(jiǎn)況數(shù)據(jù)來(lái)源：中國(guó)統(tǒng)計(jì)年鑒（ 2011 ）第6頁(yè)/共62頁(yè)數(shù)據(jù)來(lái)源：中國(guó)統(tǒng)計(jì)年鑒（ 2011 ）第7頁(yè)/共62頁(yè)第8頁(yè)/共62頁(yè)第9頁(yè)/共62頁(yè)提示：目前發(fā)生的中毒事件都是由克倫特羅引起的。第10頁(yè)/共62頁(yè)第11頁(yè)/共62頁(yè)第12頁(yè)/共62頁(yè)11種受體激動(dòng)劑的結(jié)構(gòu)式第13頁(yè)/共62頁(yè)第14頁(yè)/共62頁(yè)肉色鮮紅，脂肪層極薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿，后臀肌肉飽滿突出，但肥肉和瘦肉明顯分離，組織疏松。 健康正常豬肉肉色淡紅，

2、肉質(zhì)彈性好，組織緊密，肥瘦交替，肉皮與瘦肉之間脂肪（膘）厚約。第15頁(yè)/共62頁(yè)第16頁(yè)/共62頁(yè)第17頁(yè)/共62頁(yè)豬以20ppm萊克多巴胺添加濃度飼喂后殘留消除情況強(qiáng)志懿，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文注：給藥飼喂7天，數(shù)據(jù)來(lái)源于美國(guó)禮來(lái)公司第18頁(yè)/共62頁(yè)注：給藥30天，數(shù)據(jù)來(lái)源于Food Chemistry, 127 (2011) 327332第19頁(yè)/共62頁(yè)第20頁(yè)/共62頁(yè)（一）國(guó)外殘留限量標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家國(guó)家藥物藥物靶動(dòng)物靶動(dòng)物殘留限量（殘留限量（g/kg）歐盟克倫特羅牛肌肉：0.1；肝臟：0.5；腎臟：0.5；牛奶：0.05馬肌肉：0.1；肝臟：0.5；腎臟：0.5美國(guó)萊克多巴胺牛肝臟：90；

3、肌肉：30豬肝臟：150；肌肉：50第21頁(yè)/共62頁(yè)（一）國(guó)外殘留限量標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家國(guó)家藥物藥物靶動(dòng)物靶動(dòng)物殘留限量（殘留限量（g/kg）日本克倫特羅牛肝臟：0.6；肌肉：0.2豬肝臟：不得檢出；肌肉：不得檢出日本萊克多巴胺牛肝臟：40；肌肉：10豬肝臟：40；肌肉：10注：其他受體激動(dòng)劑未見限量標(biāo)準(zhǔn)第22頁(yè)/共62頁(yè)2012年7月5日，CAC第35屆年會(huì)上69票贊成，67票反對(duì)，通過(guò)了萊克多巴胺在組織中的最大殘留限量。牛肉和豬肉，10ppb，牛肝和豬肝，40ppb，牛腎和豬腎，90ppb。第23頁(yè)/共62頁(yè)歐盟、中國(guó)、俄羅斯、印度等仍然堅(jiān)持反對(duì)。第24頁(yè)/共62頁(yè)（二）我國(guó)殘留限量標(biāo)準(zhǔn)第25頁(yè)/

4、共62頁(yè)第26頁(yè)/共62頁(yè)第27頁(yè)/共62頁(yè)序號(hào)序號(hào)獸藥及其它化合物名稱獸藥及其它化合物名稱禁止用途禁止用途禁用動(dòng)物禁用動(dòng)物1-興奮劑類：克侖特羅、沙丁胺醇、西馬特羅及其鹽、酯及制劑所有用途所有食品動(dòng)物2性激素類：己烯雌酚及其鹽、酯及制劑所有用途所有食品動(dòng)物3具有雌激素樣作用的物質(zhì)：玉米赤霉醇、去甲雄三烯醇酮、醋酸甲孕酮及制劑所有用途所有食品動(dòng)物4氯霉素、及其鹽、酯（包括：琥珀氯霉素）及其制劑所有用途所有食品動(dòng)物5氨苯砜及制劑所有用途所有食品動(dòng)物6硝基呋喃類：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃苯烯酸鈉及制劑所有用途所有食品動(dòng)物7硝基化合物：硝基酚鈉、硝呋烯腙及制劑所有用途所有食品動(dòng)物8催眠、鎮(zhèn)靜類：安眠

5、酮及制劑所有用途所有食品動(dòng)物9林丹（丙體六六六）殺蟲劑所有食品動(dòng)物10毒殺芬（氯化烯）殺蟲劑、清塘劑所有食品動(dòng)物第28頁(yè)/共62頁(yè)序號(hào)序號(hào)獸藥及其它化合物名稱獸藥及其它化合物名稱禁止用途禁止用途禁用動(dòng)物禁用動(dòng)物11呋喃丹（克百威）殺蟲劑所有食品動(dòng)物12殺蟲脒（克死螨）殺蟲劑所有食品動(dòng)物13雙甲脒殺蟲劑水生食品動(dòng)物14酒石酸銻鉀殺蟲劑所有食品動(dòng)物15錐蟲胂胺殺蟲劑所有食品動(dòng)物16孔雀石綠抗菌劑、殺蟲劑所有食品動(dòng)物17五氯酚酸鈉殺螺劑所有食品動(dòng)物18各種汞制劑包括：氯化亞汞（甘汞）、硝酸亞汞、醋酸汞、吡啶基醋酸汞殺蟲劑所有食品動(dòng)物19性激素類：甲基睪丸酮、丙酸睪酮、苯丙酸諾龍、苯甲酸雌二醇及其鹽、

6、酯及制劑促生長(zhǎng)所有食品動(dòng)物20催眠、鎮(zhèn)靜類：氯丙嗪、地西泮、及其鹽、酯及制劑促生長(zhǎng)所有食品動(dòng)物21硝基咪唑類：甲硝唑、地美硝唑及其鹽、酯及制劑促生長(zhǎng)所有食品動(dòng)物第29頁(yè)/共62頁(yè)第30頁(yè)/共62頁(yè)第31頁(yè)/共62頁(yè)1、老藥新對(duì)象、老藥新對(duì)象克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。2、新藥老對(duì)象、新藥老對(duì)象苯乙醇胺苯乙醇胺A用于豬；在國(guó)家殘留監(jiān)控中，檢測(cè)豬肉、豬肝用于豬；在國(guó)家殘留監(jiān)控中，檢測(cè)豬肉、豬肝9種激動(dòng)劑，豬尿檢測(cè)種激動(dòng)劑，豬尿檢測(cè)3種。種。3、非飼料添加使用、非飼料添加使用（1）添于墊料，經(jīng)皮膚吸收；）添于墊料，經(jīng)皮膚吸收；（2）屠宰

7、前使用，注水增重。）屠宰前使用，注水增重。第32頁(yè)/共62頁(yè)五、殘留檢測(cè)技術(shù)五、殘留檢測(cè)技術(shù)殘留分析一般程序殘留分析一般程序 先用快速檢測(cè)產(chǎn)品（試劑盒或試紙條）進(jìn)行篩查，可疑先用快速檢測(cè)產(chǎn)品（試劑盒或試紙條）進(jìn)行篩查，可疑陽(yáng)性樣品再用儀器分析方法尤其是色質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法加以確陽(yáng)性樣品再用儀器分析方法尤其是色質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法加以確證。美國(guó)、歐盟和日本等發(fā)達(dá)國(guó)家均按此程序進(jìn)行。證。美國(guó)、歐盟和日本等發(fā)達(dá)國(guó)家均按此程序進(jìn)行。第33頁(yè)/共62頁(yè)10-1210-910-610-3紫外/可見分光光度法放射免疫測(cè)定法/酶免疫測(cè)定法色質(zhì)聯(lián)用分析放射受體分析氣相色譜(ECD/NPD)氣相色譜(FID)高效液相色譜(

8、FLD/UVD)時(shí)間分辨免疫/化學(xué)發(fā)光免疫熒光分光光度法微生物測(cè)定法比色法10-15第34頁(yè)/共62頁(yè)氣相色譜法（氣相色譜法（GC）高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）超高效液相色譜法（超高效液相色譜法（UPLC）氣譜氣譜-質(zhì)譜法（質(zhì)譜法（GC-MS）氣譜氣譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）液譜液譜-質(zhì)譜法（質(zhì)譜法（LC-MS）液譜液譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）其他新技術(shù)，如飛行時(shí)間質(zhì)譜其他新技術(shù)，如飛行時(shí)間質(zhì)譜等等第35頁(yè)/共62頁(yè)獸藥殘留實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范，農(nóng)牧發(fā)20031號(hào)瘦肉精儀器檢測(cè)方法（HPLC、LC-MS/MS等）檢測(cè)限為。第36頁(yè)/共62頁(yè)精確度高

9、假陽(yáng)性率低較高的靈敏度重現(xiàn)性好效率較高準(zhǔn)確度高優(yōu)點(diǎn)第37頁(yè)/共62頁(yè)需要專業(yè)操作人員儀器難以普及成本高操作繁瑣缺點(diǎn)第38頁(yè)/共62頁(yè)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法熒光偏振免疫測(cè)定法熒光偏振免疫測(cè)定法量子點(diǎn)標(biāo)記熒光測(cè)定法量子點(diǎn)標(biāo)記熒光測(cè)定法時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定法時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定法膠體金免疫測(cè)定法膠體金免疫測(cè)定法放射免疫測(cè)定法放射免疫測(cè)定法微生物抑制測(cè)定法微生物抑制測(cè)定法生物傳感器生物傳感器生物芯片生物芯片（二）快速檢測(cè)技術(shù)（二）快速檢測(cè)技術(shù)第39頁(yè)/共62頁(yè)基本原理在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體與固相載體表面的抗原或抗體

10、起反應(yīng)，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。 第40頁(yè)/共62頁(yè)1、加入待測(cè)物；2、加入抗體；3、加入酶標(biāo)二體；4、加入底物；5、加入終止液目前最常用方法為間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，其他還用直接法、夾心法等。第41頁(yè)/共62頁(yè)第42頁(yè)/共62頁(yè)目前市場(chǎng)上獸藥等殘留檢測(cè)ELISA試劑盒品種有數(shù)十個(gè)，克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等試劑盒產(chǎn)品非常成熟。 96孔酶標(biāo)版樣品稀釋液標(biāo)準(zhǔn)溶液底物溶液終止液酶標(biāo)二抗工作液濃縮洗滌液抗體工作液第43頁(yè)/共62頁(yè)藥物藥物樣品樣

11、品檢測(cè)限（檢測(cè)限（ppb）檢測(cè)時(shí)間檢測(cè)時(shí)間克倫特羅尿液、組織、血清、飼料0.1、0.1、0.2、501-2h萊克多巴胺尿液、組織、血清、飼料0.1、0.5、0.3、501-2h沙丁胺醇尿液、組織、血清、飼料0.2、0.5、0.2、21-2h第44頁(yè)/共62頁(yè)方法名稱方法名稱靈敏度級(jí)別靈敏度級(jí)別本底干擾本底干擾單個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間單個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間酶聯(lián)免疫吸附10-8-10-10一般1h左右化學(xué)發(fā)光免疫10-12-10-15小1h左右熒光偏振免疫10-8-10-10小5-10min量子點(diǎn)標(biāo)記免疫10-9-10-10一般0.5h左右時(shí)間分辨免疫10-15-10-19幾乎為零1h左右試劑盒方法比較第45頁(yè)

12、/共62頁(yè)試紙條結(jié)構(gòu)采用競(jìng)爭(zhēng)法，樣品滴入后，在層析作用下經(jīng)膠體金標(biāo)記抗體的結(jié)合墊，再流經(jīng)包被抗原和二抗的T線和C線，若樣品中含有藥物，藥物與金標(biāo)抗體結(jié)合后不再與抗原反應(yīng)，T線不顯色；若不含藥物，則金標(biāo)抗體與抗原反應(yīng)，T線顯色；無(wú)論有無(wú)藥物，二抗與金標(biāo)抗體均反應(yīng)，即C線顯色。 第46頁(yè)/共62頁(yè)優(yōu)點(diǎn) 靈敏度高，特異性強(qiáng) 檢測(cè)方便、快捷，一般3-5分鐘就能出結(jié)果 幾乎不需要任何儀器設(shè)備 可用于大量樣本的快速篩選，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)第47頁(yè)/共62頁(yè)第48頁(yè)/共62頁(yè)試紙條的一般檢測(cè)步驟1、樣品前處理 對(duì)尿液、血清等樣品，只需進(jìn)行簡(jiǎn)單稀釋即可； 對(duì)豬肉等組織樣品，通過(guò)提取或加熱處理后，進(jìn)行稀釋；2、取出檢測(cè)卡，平放到桌面上，用一次性吸管吸取樣品處理液，在加樣孔中加入3-4滴；3、5 min后觀察結(jié)果；4、結(jié)果判定。第49頁(yè)/共62頁(yè)陰性：C線顯色，T線有顏色，無(wú)論顏色深淺均判為陰性。陽(yáng)性：C線顯色，T線無(wú)顏色，判為陽(yáng)性。無(wú)效：C線不顯色，無(wú)論T線是否有無(wú)，該試紙條均判為無(wú)效。結(jié)果判定第50頁(yè)/共62頁(yè)藥物藥物樣品樣品檢測(cè)限（檢測(cè)限（ppb）檢測(cè)時(shí)間檢測(cè)時(shí)間克倫特羅尿液、血清、肌肉、飼料2、3、5、1005min萊克多巴胺尿液、血清、肌肉、飼料3