分光光度法在藥品中應(yīng)用

1、紫外紫外- -可見分光光度法在可見分光光度法在藥品檢驗中的應(yīng)用藥品檢驗中的應(yīng)用1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計紫外分光光度計紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述一一.概述：概述：l 分光光度法是通過測定物質(zhì)在某些特定波分光光度法是通過測定物質(zhì)在某些特定波長處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對物長處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。紫外質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。紫外- -可見分可見分光光度法具有操作簡便快速、專屬性和靈敏度光光度法具有操作簡便快速、專屬性和靈敏度高等優(yōu)點。因此在藥品的分析檢

2、驗中被廣泛采高等優(yōu)點。因此在藥品的分析檢驗中被廣泛采用。在各國藥典中藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢用。在各國藥典中藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢查和含量測定等各個項目中都能見到紫外查和含量測定等各個項目中都能見到紫外- -可可見分光光度法的應(yīng)用實例。見分光光度法的應(yīng)用實例。一一.概述：概述：l吸收光譜：發(fā)射連續(xù)光譜的光源（如氘燈和鎢吸收光譜：發(fā)射連續(xù)光譜的光源（如氘燈和鎢絲燈）發(fā)出的光通過透明物質(zhì)（固體、液體或絲燈）發(fā)出的光通過透明物質(zhì)（固體、液體或氣體）后，一些波長的單色光成分被該物質(zhì)選氣體）后，一些波長的單色光成分被該物質(zhì)選擇吸收，在原來的連續(xù)光譜上出現(xiàn)若干條暗線擇吸收，在原來的連續(xù)光譜上出現(xiàn)若干條暗

3、線或暗帶，這種光譜叫做吸收光譜?；虬祹?，這種光譜叫做吸收光譜。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計紫外分光光度計紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述二二.分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理在紫外和可見光區(qū)，靈敏度和精密度較高，在紫外和可見光區(qū)，靈敏度和精密度較高，一般每一般每1 1mlml溶液中含有幾微克（溶液中含有幾微克（ g g）的物質(zhì)的物質(zhì)即可測定，誤差約為即可測定，誤差約為1-2%1-2%，在此區(qū)域內(nèi)，在此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對光的吸收主要系分子中電子的能級物質(zhì)對光的吸收主要系分子中電子的能級躍遷所致，同時伴有分子的

4、振動和轉(zhuǎn)動能躍遷所致，同時伴有分子的振動和轉(zhuǎn)動能級的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，級的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，選擇性不如紅外光區(qū)，選擇性不如紅外光區(qū)，故紫外故紫外- -可見光區(qū)主可見光區(qū)主要用于定量分析以及作為物理常數(shù)的測定。要用于定量分析以及作為物理常數(shù)的測定。紅外光區(qū)的靈敏度和精密度較低，一般需要紅外光區(qū)的靈敏度和精密度較低，一般需要數(shù)百微克（數(shù)百微克（ g g）的供試品進(jìn)行測定，此區(qū)域的供試品進(jìn)行測定，此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對光的吸收系由分子中振動和轉(zhuǎn)動內(nèi)，物質(zhì)對光的吸收系由分子中振動和轉(zhuǎn)動能級的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強(qiáng)，能級的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強(qiáng)，特別是在特別是在7-

5、157-15 m m（稱為稱為“指紋區(qū)指紋區(qū)”），吸收），吸收峰很多，而且尖銳。除光學(xué)異構(gòu)體外，不會峰很多，而且尖銳。除光學(xué)異構(gòu)體外，不會遇到兩種不同的化學(xué)物質(zhì)完全相同的紅外吸遇到兩種不同的化學(xué)物質(zhì)完全相同的紅外吸收光譜，收光譜，故紅外區(qū)主要用于鑒別和分析物質(zhì)故紅外區(qū)主要用于鑒別和分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。的結(jié)構(gòu)。透光率（透光率（T T）：單色光通過一物質(zhì)的溶液時，）：單色光通過一物質(zhì)的溶液時，透過光的強(qiáng)度（透過光的強(qiáng)度（I I）與入射光的強(qiáng)度（與入射光的強(qiáng)度（I I0 0）之之比。即：比。即：T=I/IT=I/I0 0。吸 光 度 （吸 光 度 （ A A ） ：） ： 透 光 率 的 負(fù) 對 數(shù) 值

6、透 光 率 的 負(fù) 對 數(shù) 值 . .即即: :A=log1/T= -A=log1/T= -logTlogT比耳比耳- -郎伯定律（郎伯定律（Beer -Lamberts LawBeer -Lamberts Law）：）：吸光度（吸光度（A A）與）與溶液的濃度溶液的濃度（C C）和）和光路長光路長（L L）是成正比例的。即：是成正比例的。即：A=ECLA=ECL比耳比耳- -郎伯定律適用范圍：郎伯定律適用范圍：l1.1.溶液的濃度不能過高或過低，使測溶液的濃度不能過高或過低，使測定結(jié)果的相對誤差最小的最佳透射率定結(jié)果的相對誤差最小的最佳透射率為為T=37%T=37%左右。左右。l2.2.所用

7、溶劑不得與測定物質(zhì)有分子間所用溶劑不得與測定物質(zhì)有分子間締合，生成復(fù)合物、異構(gòu)化或出現(xiàn)酸締合，生成復(fù)合物、異構(gòu)化或出現(xiàn)酸堿平衡堿平衡。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計的使用紫外分光光度計的使用紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述三三.紫外紫外-可見分光光度計的使用可見分光光度計的使用l1.1.基本構(gòu)造：基本構(gòu)造：穩(wěn)壓電源光源波長選擇裝置樣品池檢測器記錄裝置2.2.儀器的校正和檢定儀器的校正和檢定l（1 1）波長的校正：由于溫度變化對機(jī)械部分）波長的校正：由于溫度變化對機(jī)械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除的影

8、響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應(yīng)定期對所用儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)應(yīng)定期對所用儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。于測定前校正測定波長。l鈥玻璃在鈥玻璃在279.4279.4nmnm、287.5nm287.5nm、333.7nm333.7nm、 360.9nm360.9nm、418.5nm418.5nm、460.0nm460.0nm、484.5nm484.5nm、536.2nm536.2nm與與637.5637.5nmnm的波長處有尖銳的吸收的波長處有尖銳的吸收峰，可作為波長校正用。峰，可作為波長校正用。 取在取在120120 C C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約干燥至恒重

9、的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約6060mgmg，精密稱定，用精密稱定，用0.0050.005mol/Lmol/L硫酸溶液溶解硫酸溶液溶解并稀釋至并稀釋至10001000mlml，在規(guī)定的波長處測定吸光度在規(guī)定的波長處測定吸光度并計算其吸收系數(shù)。并計算其吸收系數(shù)。（2 2）吸光度的準(zhǔn)確度：）吸光度的準(zhǔn)確度：波長波長（nmnm）235235（最小）（最?。?57257（最大）（最大）313313（最?。ㄗ钚。?50350（最大）（最大）吸收系數(shù)吸收系數(shù)（E E1%1%1cm1cm）124.5124.5144144.0.048.648.6106.6106.6許可范圍許可范圍123.0-126.0123.0-12

10、6.0142.8-146.2142.8-146.247.0-50.347.0-50.3105.5-108.5105.5-108.5 （3 3）雜散光的檢查：）雜散光的檢查： 按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。試劑試劑濃度濃度%（g/ml）波長波長（nmnm）透光率透光率（%）碘化鈉碘化鈉1.00 1.00 220220 0.8亞硝酸鈉亞硝酸鈉5.00 5.00 340340 0.83.3.紫外分光光度法對溶劑的要求紫外分光光度法對溶劑的要求 用用1 1cmcm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測定

11、其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)滿足以下定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)滿足以下要求：要求：波長波長 吸光度要求吸光度要求220220nm-240nmnm-240nm不得超過不得超過0.400.40241241nm-250nmnm-250nm不得超過不得超過0.200.20251251nm-300nmnm-300nm不得超過不得超過0.100.10300300nmnm以上以上 不得超過不得超過0.050.054.4.紫外分光光度法測定法紫外分光光度法測定法測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用為空白對照，采用1 1

12、cmcm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長長 2 2nmnm以內(nèi)測試幾個點的吸光度，以核對供試品的吸收以內(nèi)測試幾個點的吸光度，以核對供試品的吸收峰波長是否準(zhǔn)確。峰波長是否準(zhǔn)確。應(yīng)以吸光度最大的波長作為測定波長。應(yīng)以吸光度最大的波長作為測定波長。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸光度會偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬測得的吸光度會偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)。度時供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品由于吸收池和溶

13、劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計算含量。的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計算含量。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計的使用紫外分光光度計的使用紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述四四.紫外紫外- -可見分光光度法可見分光光度法在藥品檢驗中的應(yīng)用在藥品檢驗中的應(yīng)用l藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外- -可見分光光可見分光光度法的項目有度法的項目有吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢查、吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢查、純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含量測定量測

14、定等等。等等。1.吸收系數(shù)：吸收系數(shù)：l 藥品的吸收系數(shù)是藥品的理化特性常數(shù)，藥品的吸收系數(shù)是藥品的理化特性常數(shù)，可作為藥品生產(chǎn)過程中精制純化的一種指標(biāo)?？勺鳛樗幤飞a(chǎn)過程中精制純化的一種指標(biāo)。對紫外區(qū)一定波長的光有特征吸收的藥物進(jìn)對紫外區(qū)一定波長的光有特征吸收的藥物進(jìn)行精制時，應(yīng)進(jìn)行到產(chǎn)品在其特定波長測定行精制時，應(yīng)進(jìn)行到產(chǎn)品在其特定波長測定吸收系數(shù)達(dá)到一個吸收系數(shù)達(dá)到一個穩(wěn)定的最大值穩(wěn)定的最大值時為止，因時為止，因此吸收系數(shù)同其它物理常數(shù)一樣，也可作為此吸收系數(shù)同其它物理常數(shù)一樣，也可作為判斷藥品純度的依據(jù)。判斷藥品純度的依據(jù)。2.鑒別：鑒別：l藥物對光輻射的吸收特點（即其吸收光譜）藥物對

15、光輻射的吸收特點（即其吸收光譜）可與其它化學(xué)的或物理的方法配合作為鑒別可與其它化學(xué)的或物理的方法配合作為鑒別的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜互相核對。與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜互相核對。l對于具有兩個以上最大吸收的藥物可以進(jìn)一對于具有兩個以上最大吸收的藥物可以進(jìn)一步簡化操作，無需費時作吸收光譜曲線，只步簡化操作，無需費時作吸收光譜曲線，只要測出各最大吸收波長處的吸收度，要測出各最大吸收波長處的吸收度，求出這求出這些吸收度的比值些吸收度的比值，測出它們相對位置的比值，測出它們相對位置的比值即可即可。維生素維生素B12B12的鑒別規(guī)定每的鑒別規(guī)

16、定每1 1mlml中含維生素中含維生素B B12122525 g g的水溶液，照分光光度法測定，在的水溶液，照分光光度法測定，在278278、361361與與550550nmnm的波長處有最大吸收。的波長處有最大吸收。 A361nmA361nm/ /A278nmA278nm應(yīng)為應(yīng)為1.70-1.881.70-1.88。 A361nmA361nm/ /A A550550nmnm應(yīng)為應(yīng)為3.15-3.453.15-3.45。 維生素B2水溶液的吸收光譜3.純度檢查：純度檢查：l若一種化合物對紫外光和可見光區(qū)的某一若一種化合物對紫外光和可見光區(qū)的某一波段呈光學(xué)透明（即不吸收或幾乎不吸波段呈光學(xué)透明（

17、即不吸收或幾乎不吸收），而不純雜質(zhì)有吸收時，則該物質(zhì)的收），而不純雜質(zhì)有吸收時，則該物質(zhì)的生產(chǎn)精制應(yīng)當(dāng)進(jìn)行到生產(chǎn)精制應(yīng)當(dāng)進(jìn)行到規(guī)定波長處的吸收系規(guī)定波長處的吸收系數(shù)降到最低時為止。數(shù)降到最低時為止。有些藥物就以此作為有些藥物就以此作為雜質(zhì)限度檢查的依據(jù)。此外，有些藥物的雜質(zhì)限度檢查的依據(jù)。此外，有些藥物的雜質(zhì)是通過比色法與雜質(zhì)對照品比較進(jìn)行雜質(zhì)是通過比色法與雜質(zhì)對照品比較進(jìn)行控制的。控制的。檢查檢查腎上腺素腎上腺素中的酮體：取腎上腺素，加中的酮體：取腎上腺素，加0.10.1mol/Lmol/L鹽酸溶液，制成每鹽酸溶液，制成每1 1mlml中含中含2 2mgmg的溶液，的溶液，照分光光度法，在照

18、分光光度法，在310310nmnm的波長處測定，吸光度的波長處測定，吸光度不得過不得過0.050.05。4.含量測定：含量測定：l藥典中含量測定方法可分為：藥典中含量測定方法可分為：l（1）對照品比較法）對照品比較法l（2）吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法l（3）比色法）比色法（1）對照品比較法：）對照品比較法：l應(yīng)用范圍：應(yīng)用范圍： 單一成分藥劑的測定。單一成分藥劑的測定。 混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測組分混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測組分的測定波長沒有或幾乎沒有吸收的測定波長沒有或幾乎沒有吸收 測定要求測定要求分別配制供試品溶液和對照品溶液分別配制供試品溶液和對照品溶液對照品溶液所含對照品

19、的量應(yīng)為供試品溶液中被對照品溶液所含對照品的量應(yīng)為供試品溶液中被測組分標(biāo)示量的測組分標(biāo)示量的 10%以內(nèi)。以內(nèi)。所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應(yīng)保持所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應(yīng)保持一致。一致。計算公式：計算公式： Cs=Cr*As/Ar Cs：供試品溶液的濃度供試品溶液的濃度 As：供試品溶液的吸光度供試品溶液的吸光度 Cr：對照品溶液的濃度對照品溶液的濃度 Ar：對照品溶液的吸光度對照品溶液的吸光度（2）吸收系數(shù)法：）吸收系數(shù)法：l應(yīng)用范圍：應(yīng)用范圍：單一成分藥劑的測定。單一成分藥劑的測定?；旌衔锘驈?fù)方制劑，但其它成分在被測組混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測組分的測定波長沒

20、有或幾乎沒有吸收分的測定波長沒有或幾乎沒有吸收測定要求：測定要求：通常為測定最大吸收峰波長處的吸光度通常為測定最大吸收峰波長處的吸光度供試品溶液在測定波長處濃度與吸光度嚴(yán)格遵供試品溶液在測定波長處濃度與吸光度嚴(yán)格遵循比耳循比耳-郎伯定律，具有良好的線性關(guān)系。郎伯定律，具有良好的線性關(guān)系。測定條件和操作應(yīng)與測定吸收系數(shù)時完全一致。測定條件和操作應(yīng)與測定吸收系數(shù)時完全一致。吸收系數(shù)是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別在經(jīng)過校正的不同吸收系數(shù)是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別在經(jīng)過校正的不同型號分光光度計上進(jìn)行多次測定求得的平均值。型號分光光度計上進(jìn)行多次測定求得的平均值。特別注意儀器的校正和檢定特別注意儀器的校正和檢定計算公式：計算公式： A=ECL以中國藥典以中國藥典2000年版氯霉素含量測定為例年版氯霉素含量測定為例: 精密稱取氯霉素精密稱取氯霉素0.1009g，置置100ml量瓶中，量瓶中，加乙醇加乙醇10ml振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取精密量取2ml，置置100ml量瓶中，加水稀釋至刻量瓶中，加水稀釋至