結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測技術(shù)選擇——分子線形探針方法

1、結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測技術(shù)選擇結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測技術(shù)選擇分子線形探針方法分子線形探針方法 2 結(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外被證實(shí)至少對(duì)異煙肼/利福平耐藥MDR-TB 耐藥型TB的特殊形式，由于結(jié)核分枝桿菌對(duì)異煙肼、利福平、任何氟喹諾酮類，以及可注射的抗TB藥物卡那霉素、卷曲霉素、阿米卡星、鏈霉素中的至少1種有耐藥性XDR-TB3耐藥結(jié)核分枝桿菌機(jī)制耐藥結(jié)核分枝桿菌機(jī)制基因突變結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因藥物外排泵的影響結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的改變4耐藥產(chǎn)生的主要原因耐藥產(chǎn)生的主要原因微生物上，耐藥性是基因突變引起藥物對(duì)突變株的效力降低造成的。臨床及管理上，不足夠的或不恰當(dāng)?shù)闹委煂?dǎo)致結(jié)核

2、病患者體內(nèi)的耐藥突變株變成優(yōu)勢株。520122012年年TBTB流行情況流行情況 全球（Global Tuberculosis Report 2013） TB約有860萬 MDR-TB：45萬 3.6%新發(fā)結(jié)核病，20%復(fù)治結(jié)核病患者 XDR-TB：約有9.6%MDR-TB 中國（Tuberculosis profile in China, 2013） TB：90萬 MDR-TB：6萬620122012中國中國MDR-TBMDR-TB流行情況流行情況Tuberculosis Profile in China, 2012/sree/Reports?o

3、p=Replet&name=%2FWHO_HQ_Reports%2FG2%2FPROD%2FEXT%2FTBCountryProfile&ISO2=CN&LAN=EN&outtype=pdf7中國耐藥流行情況中國耐藥流行情況 中國，異煙肼耐藥率位居第一。中國，異煙肼耐藥率位居第一。全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查資料匯編8中國耐藥流行情況中國耐藥流行情況中國單耐藥中，單耐異煙肼的患者最多中國單耐藥中，單耐異煙肼的患者最多910中國衛(wèi)生部中國衛(wèi)生部1. 2009年，中國衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局和梅里埃基金會(huì)在京聯(lián)合舉辦了“耐多藥結(jié)核病診斷技術(shù)研討會(huì)” (主要邀請(qǐng)各地疾

4、病預(yù)防控制中心)2.2. 分別于分別于20072007年和年和20122012年年與衛(wèi)生部簽署了結(jié)核病防控項(xiàng)目11中蓋項(xiàng)目中蓋項(xiàng)目12耐多藥結(jié)核鑒定藥敏分子檢測系統(tǒng)的選擇耐多藥結(jié)核鑒定藥敏分子檢測系統(tǒng)的選擇利福平檢測不能替代MDR檢測中國是TB和MDR-TB高負(fù)擔(dān)國家；異煙肼耐藥率居首耐多藥快速診斷需要同時(shí)對(duì)異煙肼和利福平進(jìn)行耐藥檢測WHO 政策聲明政策聲明有充分的總括性證據(jù)證明關(guān)于在國家特定情況下快速有充分的總括性證據(jù)證明關(guān)于在國家特定情況下快速篩查篩查MDR-TB使用線性探針方法的建議的合理性。使用線性探針方法的建議的合理性?！?4耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢

5、測HAINHAIN GenoTypeGenoType MTBDR MTBDRplusplusGenoType MTBDRplus：一種基于：一種基于DNA STRIP 技術(shù)的線性探針方法。技術(shù)的線性探針方法。WHO推薦：參比級(jí)和地方級(jí)選擇線性探針方推薦：參比級(jí)和地方級(jí)選擇線性探針方法應(yīng)用于較高級(jí)別的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室。法應(yīng)用于較高級(jí)別的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室。2021-12-11151617LPA基本原理基本原理 預(yù)先標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物被固定在硝化纖維試紙條上的DNA探針?biāo)东@，并使用比色法檢測后，結(jié)果以線性條帶形式顯現(xiàn)18耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測GenoGenoType MTBD

6、R MTBDRplusplus 基于線形探針技術(shù) （2008年WHO認(rèn)可） 簡便快捷，6小時(shí)得到結(jié)果 樣本要求: 固體或液體培養(yǎng)物; 臨床痰標(biāo)本 與傳統(tǒng)藥敏檢測結(jié)果相比，符合率較高2021-12-1119GenoType MTBDRplus 檢測結(jié)果檢測結(jié)果 快速檢測結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTBC） 檢測利福平和/或異煙肼的耐藥性（單耐或MDR） 檢測異質(zhì)性耐藥20 HAIN 試劑盒試劑盒21GenoType - DNA STRIP 技術(shù)技術(shù)2021-12-112122 雜交儀（手工雜交儀（手工,12條）條）TwinCubator TwinCubator （可做（可做1212個(gè)條）個(gè)條）23 雜

7、交儀（全自動(dòng)雜交儀（全自動(dòng),48條）條）24GenoType 系列產(chǎn)品可在同一平臺(tái)（基于同一種技術(shù)DNASTRIP 技術(shù)）完成：6種MTBC和30種NTM鑒定，MDR-TB和XDR-TB藥敏檢測。GenoType MTBDRplus是Genotype系列產(chǎn)品之一，是一種可同時(shí)鑒定MTBC和檢測RFP和/或INH耐藥情況的分子遺傳學(xué)方法。2021-12-112425 世界衛(wèi)生組織在南非、印度及俄羅斯這些結(jié)核病高發(fā)區(qū)，對(duì)比評(píng)估分子線性探針與傳統(tǒng)方法 結(jié)果顯示分子線性探針對(duì)涂陽標(biāo)本的靈敏度和特異性高于97%和98%，肯定了快速檢測對(duì)控制耐多藥結(jié)核傳播的價(jià)值。 分子線性探針雖然未能完全取代傳統(tǒng)培養(yǎng)，特

8、別涂陰標(biāo)本必須做培養(yǎng)，但這種新技術(shù)大縮短等候的時(shí)間、省略繁瑣的操作流程，并提高了檢測中的生物安全性。26快速檢測方法與傳統(tǒng)方法對(duì)比快速檢測方法與傳統(tǒng)方法對(duì)比傳統(tǒng)法快速法實(shí)驗(yàn)方法PNB/TCH鑒別比例法/絕對(duì)濃度法藥敏實(shí)驗(yàn)GenoType MTBDRplus樣本要求固體培養(yǎng)物固體培養(yǎng)物涂陽標(biāo)本或培養(yǎng)物（固體/液體）功 能鑒別MTB、M.bovis和NTM一二線藥物耐藥情況同時(shí)鑒定MTBC和利福平和/或異煙肼耐藥情況，可確定是否為單耐或MDR時(shí) 間4-8周4-8周6小時(shí)工作強(qiáng)度較大大，一般8種藥物最多可以完成30個(gè)樣本/人/天小，Twincubator是12份樣本規(guī)格，全自動(dòng)GT Blot48是48跟樣品規(guī)格結(jié)果判讀BSL3/2，肉眼讀取菌落數(shù)BSL3/2，肉