細(xì)菌感染的病原學(xué)診斷

1、細(xì)菌感染的病原學(xué)診斷細(xì)菌感染的病原學(xué)診斷 （一）標(biāo)本的采集（一）標(biāo)本的采集要求：要求： 1.1.早期采集：盡量在發(fā)病早期、應(yīng)用抗生素之前采集早期采集：盡量在發(fā)病早期、應(yīng)用抗生素之前采集2.2.根據(jù)標(biāo)本的種類及可能的目的菌的特性選擇不同的根據(jù)標(biāo)本的種類及可能的目的菌的特性選擇不同的標(biāo)本采集方法標(biāo)本采集方法3.3.無菌采集：嚴(yán)格無菌操作，采集后標(biāo)本置于無菌容無菌采集：嚴(yán)格無菌操作，采集后標(biāo)本置于無菌容器，且不得接觸任何抗菌物質(zhì)和消毒劑器，且不得接觸任何抗菌物質(zhì)和消毒劑4.4.標(biāo)本采集要足量標(biāo)本采集要足量5.5.安全采集安全采集一、臨床標(biāo)本的采集與處理原則一、臨床標(biāo)本的采集與處理原則（二）標(biāo)本的運(yùn)送

2、、保存與處理（二）標(biāo)本的運(yùn)送、保存與處理 標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢，厭氧菌必須在標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢，厭氧菌必須在2h內(nèi)送檢。內(nèi)送檢。1. . 床邊接種床邊接種2. . 置于保存液或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中送檢置于保存液或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中送檢3. . 針對可能存在的病原體的特點(diǎn)對標(biāo)本進(jìn)行冷藏、針對可能存在的病原體的特點(diǎn)對標(biāo)本進(jìn)行冷藏、保溫或保持厭氧狀態(tài)進(jìn)行送檢保溫或保持厭氧狀態(tài)進(jìn)行送檢4. . 標(biāo)本送檢過程中應(yīng)注意安全標(biāo)本送檢過程中應(yīng)注意安全n不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法n染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法二、細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查二、細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查主要用于觀察細(xì)菌的動力及其運(yùn)動狀態(tài)主要用于觀察細(xì)菌的動力及其運(yùn)動狀態(tài)1

3、.1.懸滴法懸滴法2.壓滴法壓滴法3.毛細(xì)管法毛細(xì)管法4.4.暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡檢查檢查法法5.5.相差顯微鏡相差顯微鏡檢查法檢查法（一）不染色細(xì)菌標(biāo)本的檢查（一）不染色細(xì)菌標(biāo)本的檢查細(xì)菌染色標(biāo)本的制作程序細(xì)菌染色標(biāo)本的制作程序 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色（二）細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查（二）細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查（1 1）單染色法）單染色法 只用一種染料色的方法只用一種染料色的方法 制片制片結(jié)晶紫結(jié)晶紫1min1min水洗水洗晾干、油鏡檢晾干、油鏡檢（2 2）復(fù)染色法）復(fù)染色法 革蘭染色法（革蘭染色法（Gram stainGram stain） 抗酸染色法（抗酸染色法（acid-fas

4、t stainacid-fast stain）（3 3）特殊結(jié)構(gòu)染色法）特殊結(jié)構(gòu)染色法3.3.細(xì)菌常用的染色方法細(xì)菌常用的染色方法革蘭染色法（革蘭染色法（Gram stainGram stain）方法（改良快速法）方法（改良快速法） 初染：初染： 結(jié)晶紫等量結(jié)晶紫等量NaHCO3 35s，水洗，水洗 媒染：媒染： 堿性碘液堿性碘液 35s，水洗，水洗 脫色：脫色： 丙酮酒精丙酮酒精 35s，水洗，水洗 復(fù)染：復(fù)染： 堿性稀釋復(fù)紅堿性稀釋復(fù)紅 35s，水洗，水洗結(jié)果結(jié)果 紫色：革蘭陽性菌紫色：革蘭陽性菌 紅色：革蘭陰性菌紅色：革蘭陰性菌原理原理方法方法 （ZiehlZiehlNeelsenNee

5、lsen染色法）染色法） 初染：初染：5 5石碳酸復(fù)紅石碳酸復(fù)紅 加溫加溫 染染 3 35min 5min ，水洗，水洗 脫色：脫色：3%3%鹽酸酒精鹽酸酒精 1 min 1 min ，水洗，水洗 復(fù)染：堿性美蘭復(fù)染：堿性美蘭 1 min 1 min ，水洗，水洗抗酸染色法（抗酸染色法（acid-fast stainacid-fast stain）結(jié)果結(jié)果p紅色：抗酸性細(xì)菌紅色：抗酸性細(xì)菌p藍(lán)色：非抗酸性細(xì)菌藍(lán)色：非抗酸性細(xì)菌注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)p 一張玻片只能涂染一份標(biāo)本一張玻片只能涂染一份標(biāo)本p 不能使用染色缸不能使用染色缸p 染色關(guān)鍵：脫色時間的長短染色關(guān)鍵：脫色時間的長短特殊結(jié)構(gòu)染色法特殊

6、結(jié)構(gòu)染色法q莢膜染色（莢膜染色（capsule staincapsule stain）q芽胞染色（芽胞染色（spore stainspore stain）q鞭毛染色（鞭毛染色（flagellumflagellum stain stain）細(xì)菌的接種與分離培養(yǎng)技術(shù)細(xì)菌的接種與分離培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基（一、培養(yǎng)基（culture mediumculture medium）（一）定義（一）定義 用人工方法將適合細(xì)菌生長需要的各種營養(yǎng)用人工方法將適合細(xì)菌生長需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)配制成的混合營養(yǎng)制品。物質(zhì)配制成的混合營養(yǎng)制品。n營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì) 氮源、碳源、無機(jī)鹽類、生長因子等氮源、碳源、無機(jī)鹽類、生長因子

7、等n凝固物質(zhì)凝固物質(zhì) 瓊脂、明膠、卵白蛋白等瓊脂、明膠、卵白蛋白等n抑制劑抑制劑 抗生素、化學(xué)物質(zhì)、染料等抗生素、化學(xué)物質(zhì)、染料等n指示劑指示劑 酚紅、溴甲酚紫、中性紅等酚紅、溴甲酚紫、中性紅等（二）培養(yǎng)基的組成成分（二）培養(yǎng)基的組成成分n按用途分類按用途分類p基礎(chǔ)培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（基（basic medium）牛肉湯、普通瓊脂平板）牛肉湯、普通瓊脂平板 p營養(yǎng)培養(yǎng)基（營養(yǎng)培養(yǎng)基（nutrient medium）血瓊脂平板、巧克力）血瓊脂平板、巧克力血平板血平板p鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(differential medium) 糖發(fā)酵管、糖發(fā)酵管、KIA、MIUp選擇培養(yǎng)基（選擇培養(yǎng)基（selec

8、tive medium） SS瓊脂、麥康凱瓊脂瓊脂、麥康凱瓊脂p特殊培養(yǎng)基（特殊培養(yǎng)基（special medium）厭氧菌培養(yǎng)基、細(xì)菌）厭氧菌培養(yǎng)基、細(xì)菌L型培養(yǎng)基型培養(yǎng)基（三）培養(yǎng)基的種類（三）培養(yǎng)基的種類n按物理性狀分類按物理性狀分類 q固體（平板、斜面、高層）固體（平板、斜面、高層）q半固體半固體q液體液體（一）接種工具（一）接種工具 接種環(huán)與接種針接種環(huán)與接種針二、細(xì)菌的接種與分離技術(shù)二、細(xì)菌的接種與分離技術(shù)（二）細(xì)菌的接種方法（二）細(xì)菌的接種方法1. 平板劃線分離法平板劃線分離法n 用于細(xì)菌標(biāo)本的分離純化。用于細(xì)菌標(biāo)本的分離純化。2. 瓊脂斜面接種法瓊脂斜面接種法 n主要用于單個菌

9、落的純培主要用于單個菌落的純培養(yǎng)及保存菌種，也可用于養(yǎng)及保存菌種，也可用于某些生化鑒定試驗(yàn)的接種。某些生化鑒定試驗(yàn)的接種。3. 穿刺接種法穿刺接種法n用于半固體培養(yǎng)基或用于半固體培養(yǎng)基或KIA、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種。種。n半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細(xì)菌的動力。用于觀察細(xì)菌的動力。 n用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。糖發(fā)酵管等的接種。4. 液體接種法液體接種法 5. 傾注平板法傾注平板法 n細(xì)菌定量培養(yǎng)細(xì)菌定量培養(yǎng) 6. 6. 涂布法涂布法nL L棒涂布。棒涂布。n增菌培養(yǎng)、活菌

10、計(jì)數(shù)、藥敏試驗(yàn)等。增菌培養(yǎng)、活菌計(jì)數(shù)、藥敏試驗(yàn)等。四、細(xì)菌的培養(yǎng)方法四、細(xì)菌的培養(yǎng)方法1.需氧培養(yǎng)（普通培養(yǎng)）需氧培養(yǎng)（普通培養(yǎng)） n 需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下進(jìn)行的培養(yǎng)需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下進(jìn)行的培養(yǎng)普通普通孵育箱孵育箱37 C 1824h觀察培養(yǎng)結(jié)果觀察培養(yǎng)結(jié)果 平板平板已接種好的已接種好的 斜面斜面 試管試管n 少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌需要培少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌需要培養(yǎng)養(yǎng)37d直至直至1個月才能生長。個月才能生長。 2. 二氧化碳培養(yǎng)二氧化碳培養(yǎng) 將已接種培養(yǎng)基置于將已接種培養(yǎng)基置于5%10%CO2環(huán)境中進(jìn)環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法。行培養(yǎng)的方法。 （2）燭缸培養(yǎng)：簡單）燭缸培養(yǎng)：簡單易

11、行，不需特殊設(shè)備，易行，不需特殊設(shè)備，尤其適用于基層實(shí)驗(yàn)室。尤其適用于基層實(shí)驗(yàn)室。（1）二氧化碳培養(yǎng)箱：）二氧化碳培養(yǎng)箱：能自動調(diào)節(jié)能自動調(diào)節(jié)CO2的含量、的含量、溫度和濕度。溫度和濕度。3. 厭氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng) n厭氧菌對厭氧菌對O O2 2敏感，培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原敏感，培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環(huán)境。電勢的厭氧環(huán)境。q物理法、化學(xué)法、生物法。物理法、化學(xué)法、生物法。q厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧菌共生厭氧法等。菌共生厭氧法等。五、細(xì)菌的生長現(xiàn)象五、細(xì)菌的生長現(xiàn)象 細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征: :n菌落大小菌落大小n形狀（

12、露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）n高度（突起、扁平或凹陷）高度（突起、扁平或凹陷）n邊緣（整齊、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）邊緣（整齊、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）n表面（光滑、粗糙等）表面（光滑、粗糙等）n濕潤度（干燥、濕潤等）濕潤度（干燥、濕潤等）n透明度（不透明、半透明、透明等）透明度（不透明、半透明、透明等）n顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、黃色或無色等）顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、黃色或無色等）n溶血性（溶血性（溶血、溶血、溶血或溶血或溶血）溶血）n特殊氣味特殊氣味半固體觀察半固體觀察動力陰性動力陰性動力陽性動力陽性n表面菌膜生長表面菌膜生長n均勻混

13、濁生長均勻混濁生長n沉淀生長沉淀生長細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)不同細(xì)菌具有不同的酶系統(tǒng)，對糖和蛋白質(zhì)不同細(xì)菌具有不同的酶系統(tǒng)，對糖和蛋白質(zhì)的分解能力不同，因而其代謝產(chǎn)物也各異。據(jù)的分解能力不同，因而其代謝產(chǎn)物也各異。據(jù)此可利用生物化學(xué)方法檢測這些代謝產(chǎn)物以區(qū)此可利用生物化學(xué)方法檢測這些代謝產(chǎn)物以區(qū)別和鑒定不同細(xì)菌。別和鑒定不同細(xì)菌。原理原理1. 糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)一、碳水化合物代謝試驗(yàn)一、碳水化合物代謝試驗(yàn) 用途用途 糖發(fā)酵試驗(yàn)是鑒定細(xì)菌最常用的生化反應(yīng)，特別用于腸糖發(fā)酵試驗(yàn)是鑒定細(xì)菌最常用的生化反應(yīng)，特別用于

14、腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。桿菌科細(xì)菌的鑒定。2.2.氧化氧化/ /發(fā)酵試驗(yàn)（發(fā)酵試驗(yàn)（O OF F試驗(yàn)）試驗(yàn)） 又稱葡萄糖代謝類型鑒別試驗(yàn)或又稱葡萄糖代謝類型鑒別試驗(yàn)或 Hugh-LeifsonHugh-Leifson（HLHL）試驗(yàn)）試驗(yàn)分解葡萄糖分解葡萄糖 氧化型氧化型分解葡萄糖分解葡萄糖 發(fā)酵型發(fā)酵型不分解葡萄糖不分解葡萄糖 產(chǎn)堿型產(chǎn)堿型有氧有氧有氧或無氧有氧或無氧有氧或無氧有氧或無氧細(xì)菌細(xì)菌n 原理原理 產(chǎn)堿型產(chǎn)堿型 發(fā)酵型發(fā)酵型 氧化型氧化型n用途用途 主要用于革蘭陰性桿菌的鑒別。腸桿菌科細(xì)菌均為發(fā)酵型，主要用于革蘭陰性桿菌的鑒別。腸桿菌科細(xì)菌均為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌通常為氧化型或產(chǎn)堿型。非發(fā)

15、酵菌通常為氧化型或產(chǎn)堿型。葡萄球菌和微球菌的鑒別，前者為發(fā)酵型，后者為氧化型。葡萄球菌和微球菌的鑒別，前者為發(fā)酵型，后者為氧化型。 陽性陽性 培養(yǎng)基變黑培養(yǎng)基變黑陰性陰性 培養(yǎng)基不變色培養(yǎng)基不變色 用途用途 主要用于主要用于D D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者陽性，后者陰性。也可用于腸桿菌科、其他革蘭陰性陽性，后者陰性。也可用于腸桿菌科、其他革蘭陰性菌及厭氧菌的鑒別。菌及厭氧菌的鑒別。 3.七葉苷水解試驗(yàn)七葉苷水解試驗(yàn)4.4.甲基紅（甲基紅（MRMR）試驗(yàn)）試驗(yàn)細(xì)菌細(xì)菌葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸 醇、酮、醛等醇、酮、醛等 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 pHpH5.45.4甲酸、

16、乙酸、乳酸等甲酸、乙酸、乳酸等 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 pHpH4.44.4甲基紅指示劑甲基紅指示劑 pHpH4.5 4.5 變?yōu)榧t色變?yōu)榧t色 pHpH5.4 5.4 變?yōu)辄S色變?yōu)辄S色 用途用途 主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別，前者陽性，后者陰性。菌的鑒別，前者陽性，后者陰性。n原理原理5.VP5.VP試驗(yàn)試驗(yàn)細(xì)菌細(xì)菌脫羧脫羧KOH-2H二乙酰二乙酰胍基胍基紅色化合物紅色化合物葡萄糖葡萄糖乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇 COCO2 2丙酮酸丙酮酸 用途用途 本試驗(yàn)常與本試驗(yàn)常與MRMR試驗(yàn)一起使用，通常兩者結(jié)試驗(yàn)一起使用，通常兩者結(jié)果相反。果相反。 MR VPMR VP 大腸

17、埃希菌大腸埃希菌 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌 二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)1.1.吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)試驗(yàn)）吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)試驗(yàn)）n原理原理 色氨酸色氨酸 吲哚（靛基質(zhì)）吲哚（靛基質(zhì)） 細(xì)菌細(xì)菌對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛（柯氏試劑）（柯氏試劑）玫瑰吲哚玫瑰吲哚（紅色）（紅色）n用途用途 主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。2.2.硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)n 原理原理含硫氨基酸含硫氨基酸細(xì)菌細(xì)菌硫化氫硫化氫Fe2+（或或Pb2+）FeS（ PbS） （黑色）（黑色）n 用途用途 常用于腸桿菌科菌屬間的鑒定。常用于腸桿菌科菌屬間的鑒定。3.3.尿素酶試驗(yàn)?zāi)蛩?/p>

18、酶試驗(yàn)n原理原理 NH2OC 2H2O (NH4)2CO3 2NH3CO2 H2O NH2 細(xì)菌（脲酶）細(xì)菌（脲酶）（尿素）（尿素）（碳酸銨）（碳酸銨）（培養(yǎng)基（培養(yǎng)基pH）n用途用途 主要用于腸道桿菌科的鑒定。主要用于腸道桿菌科的鑒定。變形桿菌屬為。變形桿菌屬為。4.4.苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)n 原理原理 苯丙氨酸苯丙氨酸 苯丙酮酸苯丙酮酸NH3細(xì)菌（苯丙氨酸脫氨酶）細(xì)菌（苯丙氨酸脫氨酶）Fe+綠色化合物綠色化合物n 用途用途 主要用于腸桿菌科的鑒定。主要用于腸桿菌科的鑒定。三、碳源和氮源利用試驗(yàn)三、碳源和氮源利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)n原理原理 某些細(xì)菌能利用枸

19、櫞酸鈉作為唯一碳源某些細(xì)菌能利用枸櫞酸鈉作為唯一碳源獲得能量，并利用銨鹽作為唯一氮源，因而獲得能量，并利用銨鹽作為唯一氮源，因而能在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解枸櫞酸鹽能在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鈉和氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。生成碳酸鈉和氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。n結(jié)果結(jié)果 培養(yǎng)基變藍(lán)為陽性，不變色為陰性。培養(yǎng)基變藍(lán)為陽性，不變色為陰性。n用途用途 用于腸桿菌科中各菌屬間的鑒別。用于腸桿菌科中各菌屬間的鑒別。IMViCIMViC試驗(yàn)試驗(yàn)I I 吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)M M MR MR試驗(yàn)試驗(yàn)V V VP VP試驗(yàn)試驗(yàn)C C 枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)用于腸道桿菌的鑒定用于腸道桿菌的鑒定

20、 I MR VP CI MR VP C 大腸埃希菌大腸埃希菌 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌 + +四、呼吸酶類試驗(yàn)四、呼吸酶類試驗(yàn)1.1.氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)n原理原理還原型細(xì)胞色素還原型細(xì)胞色素C C 氧化型細(xì)胞色素氧化型細(xì)胞色素C C 細(xì)菌（細(xì)胞色素氧化酶）細(xì)菌（細(xì)胞色素氧化酶）對苯二胺對苯二胺醌類化合物醌類化合物（WursterWurster氏藍(lán)）氏藍(lán)）n試劑試劑 1%1%鹽酸四甲基對苯二胺鹽酸四甲基對苯二胺 或或 1%1%鹽酸二甲基對苯二胺鹽酸二甲基對苯二胺試劑試劑n結(jié)果結(jié)果 細(xì)菌細(xì)菌10s10s內(nèi)呈深紫色（或深藍(lán)色）為陽性，內(nèi)呈深紫色（或深藍(lán)色）為陽性，不變色為陰性。不變色為陰性。四甲基對苯

21、二胺四甲基對苯二胺二甲基對苯二胺二甲基對苯二胺n用途用途 （1）革蘭陰性桿菌的鑒定：腸桿菌科均呈陰性，）革蘭陰性桿菌的鑒定：腸桿菌科均呈陰性，大多數(shù)非發(fā)酵菌呈陽性。大多數(shù)非發(fā)酵菌呈陽性。（2）奈瑟菌屬的鑒定：奈瑟菌屬為陽性）奈瑟菌屬的鑒定：奈瑟菌屬為陽性 。n注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 試驗(yàn)時避免接觸含鐵物質(zhì)，不能用接種環(huán)取菌。試驗(yàn)時避免接觸含鐵物質(zhì)，不能用接種環(huán)取菌。2.2.過氧化氫酶試驗(yàn)（過氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）觸酶試驗(yàn)）n原理原理 細(xì)菌（過氧化氫酶）細(xì)菌（過氧化氫酶） 2H2O2 2H2OO2用途用途 常用于革蘭陽性球菌的初步分常用于革蘭陽性球菌的初步分群。葡萄球菌屬和微球菌屬為陽群。葡萄球菌屬

22、和微球菌屬為陽性，鏈球菌屬和腸球菌為陰性。性，鏈球菌屬和腸球菌為陰性。五、抑菌試驗(yàn)五、抑菌試驗(yàn)1.1.桿菌肽試驗(yàn)桿菌肽試驗(yàn)n原理原理 A A群溶血性鏈球菌對桿菌肽幾乎群溶血性鏈球菌對桿菌肽幾乎100%100%敏感，敏感，而其它鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。而其它鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。n 用途用途 鑒別鑒別A A群和非群和非A群鏈球菌的重要試驗(yàn)，群鏈球菌的重要試驗(yàn)，A A群鏈球菌為陽性，其他群鏈球菌為群鏈球菌為陽性，其他群鏈球菌為陰性。陰性。 2.2.奧普托欣（奧普托欣（OptochinOptochin ）敏感試驗(yàn)）敏感試驗(yàn)n原理原理 OptochinOptochin( (乙基氫化羥基奎寧乙基氫化羥

23、基奎寧) ) 能干擾肺炎鏈能干擾肺炎鏈球菌葉酸合成，抑制該菌的生長，故肺炎鏈球菌球菌葉酸合成，抑制該菌的生長，故肺炎鏈球菌對對OptochinOptochin敏感，而其它鏈球菌對其耐藥。敏感，而其它鏈球菌對其耐藥。n用途用途 用于肺炎鏈球菌和甲型鏈球用于肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌的鑒別。菌的鑒別。肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌為陽性，為陽性，甲型鏈球菌為陰性。甲型鏈球菌為陰性。六、其他生化試驗(yàn)六、其他生化試驗(yàn)1.凝固酶試驗(yàn)?zāi)堂冈囼?yàn)n原理原理 致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：結(jié)合凝固酶致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：結(jié)合凝固酶（或凝聚因子）和游離凝固酶。（或凝聚因子）和游離凝固酶。 游離凝固酶游離凝固酶 凝

24、血酶樣物質(zhì)凝血酶樣物質(zhì) （凝血酶原）（凝血酶原）協(xié)同因子協(xié)同因子纖維蛋白原纖維蛋白原纖維蛋白纖維蛋白 （試管法）（試管法）結(jié)合凝固酶結(jié)合凝固酶纖維蛋白纖維蛋白 （玻片法（玻片法 ）纖維蛋白原纖維蛋白原n結(jié)果結(jié)果 玻片法：對照側(cè)無凝集顆粒玻片法：對照側(cè)無凝集顆粒 血漿側(cè)出現(xiàn)明顯凝集顆粒血漿側(cè)出現(xiàn)明顯凝集顆粒 陽性陽性n用途用途 用于葡萄球菌的鑒定，常作為鑒定葡萄球菌致病性的用于葡萄球菌的鑒定，常作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)。重要指標(biāo)。試管法：試管法：血漿凝固、不流動血漿凝固、不流動 陽性陽性2.2.膽汁溶菌試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)n原理原理 膽鹽或膽汁能溶解肺炎鏈球菌。膽鹽或膽汁能溶解肺炎鏈球菌。n

25、用途用途 主要用于肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌的鑒別。肺主要用于肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌的鑒別。肺炎鏈球菌陽性，草綠色鏈球菌陰性。炎鏈球菌陽性，草綠色鏈球菌陰性。血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)檢測的原理血清學(xué)檢測的原理：未知未知 已知已知 血清學(xué)鑒定（確診，細(xì)菌定種、定型）血清學(xué)鑒定（確診，細(xì)菌定種、定型）已知已知 未知未知 血清學(xué)診斷（協(xié)助診斷）血清學(xué)診斷（協(xié)助診斷）Ag AbAg-Ab 1.表面抗原表面抗原 莢膜多糖抗原莢膜多糖抗原 K抗原抗原 Vi抗原抗原2. 菌體抗原（菌體抗原（O抗原）抗原）3.鞭毛抗原（鞭毛抗原（H抗原）抗原）4.菌毛抗原菌毛抗原 目前尚未用于細(xì)菌鑒定目前尚未用于細(xì)菌鑒定特

26、異性抗原特異性抗原：細(xì)菌鑒定與分群（型）的主要依據(jù)：細(xì)菌鑒定與分群（型）的主要依據(jù)類屬抗原或共同抗原類屬抗原或共同抗原：非特異性交叉反應(yīng)的原因：非特異性交叉反應(yīng)的原因細(xì)菌的抗原物質(zhì)：細(xì)菌的抗原物質(zhì)：1.1.玻片凝集試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn)n 原理原理 用用診斷血清（已知抗體）在載玻片上直接與待檢菌混診斷血清（已知抗體）在載玻片上直接與待檢菌混合，若有相應(yīng)細(xì)菌，則可出現(xiàn)肉眼可見的凝集顆粒，借合，若有相應(yīng)細(xì)菌，則可出現(xiàn)肉眼可見的凝集顆粒，借以鑒定細(xì)菌。以鑒定細(xì)菌。n方法方法細(xì)菌細(xì)菌診斷血清診斷血清生理鹽水生理鹽水混勻混勻13min觀察結(jié)果觀察結(jié)果（一）凝集反應(yīng)（一）凝集反應(yīng)一、血清學(xué)鑒定一、血清學(xué)鑒定n結(jié)

27、果結(jié)果陽性陽性試驗(yàn)側(cè)出現(xiàn)凝集顆粒，對照側(cè)均勻混濁；試驗(yàn)側(cè)出現(xiàn)凝集顆粒，對照側(cè)均勻混濁；陰性陰性試驗(yàn)側(cè)與對照側(cè)均為均勻混濁；試驗(yàn)側(cè)與對照側(cè)均為均勻混濁；自凝自凝試驗(yàn)側(cè)及對照側(cè)均出現(xiàn)凝集顆粒。試驗(yàn)側(cè)及對照側(cè)均出現(xiàn)凝集顆粒。 n 用途用途 用于鑒定菌種及菌型。用于鑒定菌種及菌型。 n 評價評價 本法簡便、快速、特異性強(qiáng)，是鑒定細(xì)菌最常用的方法。本法簡便、快速、特異性強(qiáng)，是鑒定細(xì)菌最常用的方法。2. 反相間接凝集試驗(yàn)反相間接凝集試驗(yàn) n原理原理 已知已知AbAb顆粒性載體顆粒性載體 Ag 顆粒凝集顆粒凝集 （致敏顆粒）（致敏顆粒） （未知）（未知）n方法方法 常用方法有反相間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)和膠乳凝集

28、試常用方法有反相間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)和膠乳凝集試驗(yàn)。驗(yàn)。n評價評價 敏感性高且易于觀察結(jié)果，是一種敏感快速的方法。敏感性高且易于觀察結(jié)果，是一種敏感快速的方法?？捎糜跈z測微量抗原可用于檢測微量抗原。（二）莢膜腫脹試驗(yàn)（二）莢膜腫脹試驗(yàn) n原理原理 當(dāng)特異性抗血清與相應(yīng)細(xì)菌的莢膜抗原當(dāng)特異性抗血清與相應(yīng)細(xì)菌的莢膜抗原特異性結(jié)合，形成復(fù)合物時，可使細(xì)菌莢膜顯特異性結(jié)合，形成復(fù)合物時，可使細(xì)菌莢膜顯著增大，呈腫脹現(xiàn)象。著增大，呈腫脹現(xiàn)象。 n方法方法 待檢菌抗血清染料待檢菌抗血清染料待檢菌正常兔血清染料待檢菌正常兔血清染料室溫室溫510min鏡檢鏡檢n結(jié)果結(jié)果 陽性陽性 在紅色細(xì)菌周圍可見厚薄不等、邊

29、界清晰的無色在紅色細(xì)菌周圍可見厚薄不等、邊界清晰的無色環(huán)狀物，而在對照側(cè)無此現(xiàn)象；環(huán)狀物，而在對照側(cè)無此現(xiàn)象； 陰性陰性 試驗(yàn)側(cè)與對照側(cè)均不產(chǎn)生無色環(huán)狀物。試驗(yàn)側(cè)與對照側(cè)均不產(chǎn)生無色環(huán)狀物。n 應(yīng)用應(yīng)用 本試驗(yàn)常用于肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌、流感本試驗(yàn)常用于肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血桿菌、炭疽芽胞桿菌的檢測及分型。嗜血桿菌、炭疽芽胞桿菌的檢測及分型。（三）制動試驗(yàn)（三）制動試驗(yàn)n原理原理 抗鞭毛抗體與鞭毛抗原結(jié)合，使鞭毛強(qiáng)直、抗鞭毛抗體與鞭毛抗原結(jié)合，使鞭毛強(qiáng)直、相互粘著而失去動力，細(xì)菌運(yùn)動停止。相互粘著而失去動力，細(xì)菌運(yùn)動停止。n方法方法 抗血清抗血清室溫室溫 510min懸滴觀察懸

30、滴觀察細(xì)菌運(yùn)動細(xì)菌運(yùn)動懸滴觀察懸滴觀察細(xì)菌運(yùn)動細(xì)菌運(yùn)動 菌懸液菌懸液 n結(jié)果結(jié)果 陽性陽性 細(xì)菌運(yùn)動停止，菌體凝集成塊細(xì)菌運(yùn)動停止，菌體凝集成塊 陰性陰性 細(xì)菌運(yùn)動無改變細(xì)菌運(yùn)動無改變n注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 抗血清中不能加防腐劑。抗血清中不能加防腐劑。n應(yīng)用應(yīng)用 常用于運(yùn)動活潑細(xì)菌的快速鑒定，如霍亂弧常用于運(yùn)動活潑細(xì)菌的快速鑒定，如霍亂弧菌的鑒定。菌的鑒定。 二、血清學(xué)診斷二、血清學(xué)診斷 用已知抗原檢測病人血清中的相應(yīng)抗體，以診斷感用已知抗原檢測病人血清中的相應(yīng)抗體，以診斷感染性疾病的方法。染性疾病的方法。n用途用途 作為某些傳染病的輔助診斷，尤其對某些病原體作為某些傳染病的輔助診斷，尤其對某些病

31、原體不能培養(yǎng)或難于培養(yǎng)的感染性疾病，可以提供診斷依據(jù)。不能培養(yǎng)或難于培養(yǎng)的感染性疾病，可以提供診斷依據(jù)。 血清學(xué)診斷主要適用于病程較長的傳染病的診斷。血清學(xué)診斷主要適用于病程較長的傳染病的診斷。n結(jié)果判斷結(jié)果判斷 一般作血清學(xué)診斷時，需取患者急性期和恢一般作血清學(xué)診斷時，需取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本，若后者的抗體效價比前者有復(fù)期雙份血清標(biāo)本，若后者的抗體效價比前者有4 4倍或倍或4 4倍以增長上才有診斷意義。倍以增長上才有診斷意義。病毒感染的病原學(xué)檢查病毒感染的病原學(xué)檢查病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷方法病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷方法 病原學(xué)診斷病原學(xué)診斷 顯微鏡檢查顯微鏡檢查病毒分離培養(yǎng)與鑒定病毒分離培養(yǎng)

32、與鑒定抗原檢測抗原檢測核酸檢測核酸檢測血清學(xué)診斷血清學(xué)診斷 抗體檢測抗體檢測 IgM、IgG一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和處理一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和處理（一）標(biāo)本采集（一）標(biāo)本采集采集時間：盡早采集（越早越好）采集時間：盡早采集（越早越好）標(biāo)本種類：根據(jù)感染的部位、可能感染的病毒類型選標(biāo)本種類：根據(jù)感染的部位、可能感染的病毒類型選擇標(biāo)本種類擇標(biāo)本種類無菌采集標(biāo)本：必要時用抗生素或抗真菌藥處理無菌采集標(biāo)本：必要時用抗生素或抗真菌藥處理血清學(xué)檢查標(biāo)本：雙份血清血清學(xué)檢查標(biāo)本：雙份血清（二）標(biāo)本的運(yùn)送與保存（二）標(biāo)本的運(yùn)送與保存1.低溫送檢低溫送檢 4可保存數(shù)小時，可保存數(shù)小時，- -70可長期保存可長期保存對

33、冷凍標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融對冷凍標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融2.保濕送檢保濕送檢50%甘油鹽水保存送檢甘油鹽水保存送檢 病毒轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基（病毒轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基（virus transport medium ，VTM）含含0.5%明膠或牛血清白蛋白的明膠或牛血清白蛋白的Hanks液液3.無菌送檢無菌送檢二、病毒形態(tài)學(xué)檢查二、病毒形態(tài)學(xué)檢查1.光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡 僅用于大病毒顆粒和包涵體的檢查。僅用于大病毒顆粒和包涵體的檢查。 簡便、快速，但敏感性低，有些病毒感染細(xì)胞后簡便、快速，但敏感性低，有些病毒感染細(xì)胞后不形成包涵體不形成包涵體狂犬病毒胞漿內(nèi)包涵體狂犬病毒胞漿內(nèi)包涵體（內(nèi)基小提）（內(nèi)基小提）巨細(xì)胞病毒胞核內(nèi)包涵

34、體巨細(xì)胞病毒胞核內(nèi)包涵體2. 電鏡及免疫電鏡電鏡及免疫電鏡直接檢查標(biāo)本中的病毒顆粒，快速，直接檢查標(biāo)本中的病毒顆粒，快速，可確診。但敏感性低（可確診。但敏感性低（106/ml）免疫電鏡敏感性高，但只能用于已免疫電鏡敏感性高，但只能用于已知病毒的檢測）知病毒的檢測）乙型肝炎病毒電鏡圖 輪狀病毒電鏡圖 3.病毒大小的測定方法病毒大小的測定方法（1）電子顯微鏡直接測量）電子顯微鏡直接測量（2）超過濾法）超過濾法（3）超速離心法）超速離心法（一）病毒分離和鑒定的一般程序（一）病毒分離和鑒定的一般程序 動物接種動物接種組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)標(biāo)本采集標(biāo)本采集標(biāo)本處理后接種標(biāo)本處理后接種雞胚接種雞胚接種卵黃囊膜卵

35、黃囊膜尿囊液尿囊液羊膜腔液羊膜腔液絨毛尿囊膜絨毛尿囊膜觀察囊膜病變觀察囊膜病變血凝試驗(yàn)血凝試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)CPEEM包涵體包涵體空斑試驗(yàn)空斑試驗(yàn)紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)觀察發(fā)病觀察發(fā)病抗原檢測抗原檢測抗體檢測抗體檢測病理檢查病理檢查三、病毒的分離與鑒定三、病毒的分離與鑒定（二）病毒的分離（二）病毒的分離n雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)n動物接種動物接種n組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)1. 動物接種動物接種常用動物常用動物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病對小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病對動物的敏感性不同，根據(jù)病毒種類加以選擇。動物的敏感性不同，根據(jù)病毒種類加以選擇。接種途徑接種途徑

36、按病毒侵襲部位選擇相應(yīng)的接種途徑：按病毒侵襲部位選擇相應(yīng)的接種途徑：n乙型腦炎病毒及狂犬病毒乙型腦炎病毒及狂犬病毒 小鼠腦內(nèi)接種小鼠腦內(nèi)接種n柯薩奇病毒柯薩奇病毒 乳鼠腹腔接種乳鼠腹腔接種n乙肝病毒乙肝病毒 黑猩猩靜脈注射黑猩猩靜脈注射n流感病毒流感病毒 鼻腔滴種鼻腔滴種用途用途n分離鑒定病毒，制備疫苗，制備抗血清分離鑒定病毒，制備疫苗，制備抗血清2. 雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)常用于粘病毒、皰疹病毒和痘類病毒的分離培養(yǎng)常用于粘病毒、皰疹病毒和痘類病毒的分離培養(yǎng)接種途徑及方法接種途徑及方法 新鮮受精卵新鮮受精卵 接種病毒接種病毒3839713d卵黃囊接種卵黃囊接種羊膜腔接種羊膜腔接種尿囊腔接種尿囊腔接種

37、絨毛尿囊膜接種絨毛尿囊膜接種絨毛尿囊膜表現(xiàn)有痘病毒的特異性損傷絨毛尿囊膜表現(xiàn)有痘病毒的特異性損傷3.3.組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)n將人或動物離體的活組織或分散的活細(xì)胞在體外人工將人或動物離體的活組織或分散的活細(xì)胞在體外人工控制的條件下使其生長繁殖的一種技術(shù)。控制的條件下使其生長繁殖的一種技術(shù)。組織培養(yǎng)的類型組織培養(yǎng)的類型（1）組織塊培養(yǎng)）組織塊培養(yǎng)（2）器官培養(yǎng)）器官培養(yǎng) 人胚氣管呼吸道病毒；人胚氣管呼吸道病毒； 人胚腸人胚腸 腸道病毒腸道病毒（3）細(xì)胞培養(yǎng)最常用）細(xì)胞培養(yǎng)最常用原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng) 對病毒敏感，但制備費(fèi)時費(fèi)力，對病毒敏感，但制備費(fèi)時費(fèi)力，只能傳只能傳23代。代。二倍體

38、細(xì)胞二倍體細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng) 原代細(xì)胞反復(fù)傳代（原代細(xì)胞反復(fù)傳代（4050代）仍代）仍保持二倍體染色體特性。病毒分離和保持二倍體染色體特性。病毒分離和疫苗制備的首選疫苗制備的首選細(xì)胞株細(xì)胞株。傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng) 來源于腫瘤細(xì)胞或突變的二倍體細(xì)胞，來源于腫瘤細(xì)胞或突變的二倍體細(xì)胞，常用于病毒的分離鑒定，但不能用于制備疫苗。常用于病毒的分離鑒定，但不能用于制備疫苗。（三）病毒的鑒定（三）病毒的鑒定病毒的初步鑒定病毒的初步鑒定n動物感染范圍及潛伏期動物感染范圍及潛伏期n對雞胚的敏感性對雞胚的敏感性n在細(xì)胞培養(yǎng)中的表現(xiàn)在細(xì)胞培養(yǎng)中的表現(xiàn)n理化性質(zhì)的測定理化性質(zhì)的測定最后鑒定最后鑒定n血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒

39、定: 中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等試驗(yàn)等病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中的表現(xiàn)病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中的表現(xiàn)（1）細(xì)胞代謝作用改變）細(xì)胞代謝作用改變（培養(yǎng)液顏色變化）（培養(yǎng)液顏色變化）n正常細(xì)胞代謝：正常細(xì)胞代謝： 培養(yǎng)液由紅變黃培養(yǎng)液由紅變黃n病毒增殖，抑制細(xì)胞代謝：培養(yǎng)液顏色不變或病毒增殖，抑制細(xì)胞代謝：培養(yǎng)液顏色不變或更紅更紅 病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖后，使宿主的病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖后，使宿主的形態(tài)發(fā)生不同程度改變，這種由形態(tài)發(fā)生不同程度改變，這種由病毒增殖引起的細(xì)胞形態(tài)變化，病毒增殖引起的細(xì)胞形態(tài)變化，稱為細(xì)胞病變效應(yīng)。稱為細(xì)胞病變效應(yīng)。（2）細(xì)胞病變（）細(xì)胞病變（cytopat

40、hic effect ，CPE） 細(xì)胞變圓、融合、腫脹、細(xì)胞空泡、核細(xì)胞變圓、融合、腫脹、細(xì)胞空泡、核濃縮、形成嗜酸性或嗜堿性包涵體等。濃縮、形成嗜酸性或嗜堿性包涵體等。 某些病毒感染細(xì)胞后不出現(xiàn)某些病毒感染細(xì)胞后不出現(xiàn)CPE（4） 干擾現(xiàn)象干擾現(xiàn)象當(dāng)兩種不同的病毒同時或先后感染同一細(xì)胞時，其中當(dāng)兩種不同的病毒同時或先后感染同一細(xì)胞時，其中一種病毒可抑制另一種病毒的增殖，稱為病毒的干擾現(xiàn)一種病毒可抑制另一種病毒的增殖，稱為病毒的干擾現(xiàn)象。象。鼻病毒鼻病毒無無CPE鼻鼻V.Poli.V無無CPEPoli.V有有CPE（5）紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn)）紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn) 受感染的宿主細(xì)胞膜含受

41、感染的宿主細(xì)胞膜含病毒抗原（血凝素），可吸病毒抗原（血凝素），可吸附雞、豚鼠或猴紅細(xì)胞附雞、豚鼠或猴紅細(xì)胞 如果在培養(yǎng)瓶中加入相如果在培養(yǎng)瓶中加入相應(yīng)的血凝素抗血清，則不出應(yīng)的血凝素抗血清，則不出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象，即紅細(xì)現(xiàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象，即紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)陽性胞吸附抑制試驗(yàn)陽性（6）血凝及血凝抑制試驗(yàn)）血凝及血凝抑制試驗(yàn) 含有血凝素的病毒能吸附一定種類的哺乳動物或禽含有血凝素的病毒能吸附一定種類的哺乳動物或禽類的紅細(xì)胞，使紅細(xì)胞凝集。該現(xiàn)象可被相應(yīng)的血凝素類的紅細(xì)胞，使紅細(xì)胞凝集。該現(xiàn)象可被相應(yīng)的血凝素抗體抑制，稱為血凝抑制試驗(yàn)，可用于分型?？贵w抑制，稱為血凝抑制試驗(yàn)，可用于分型。新分離病毒

42、的鑒定新分離病毒的鑒定（1）病毒的大小及形態(tài)）病毒的大小及形態(tài)（2）核酸類型）核酸類型: 5-溴溴-2-脫氧尿苷（脫氧尿苷（BUDR）能抑）能抑 制制DNA復(fù)制，而不抑制復(fù)制，而不抑制RNA病毒。病毒。（3）乙醚敏感試驗(yàn)）乙醚敏感試驗(yàn): 有包膜病毒對乙醚敏感，經(jīng)有包膜病毒對乙醚敏感，經(jīng)乙醚作用后，失去感染性乙醚作用后，失去感染性（4）耐酸試驗(yàn)）耐酸試驗(yàn) 腸道病毒耐酸，在腸道病毒耐酸，在pH3的環(huán)境下的環(huán)境下穩(wěn)定，鼻病毒不耐酸，在穩(wěn)定，鼻病毒不耐酸，在pH3的環(huán)境下被滅活的環(huán)境下被滅活病毒的血清學(xué)鑒定病毒的血清學(xué)鑒定n中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等四、病毒的血清學(xué)診斷四、病毒的血清學(xué)診斷單份血清單份血清IgM測定測定 早期診斷早期診斷雙份血清雙份血清IgG測定測定 4倍以上增長，有診斷意義倍以上增長，有診斷意義五、病毒的分子生物學(xué)檢測五、病毒的分子生物學(xué)檢測 多種分子生物學(xué)方法。檢測以不同形式存在的多種分子生物學(xué)方法。檢測以不同形式存在的病毒基因片斷。敏感、特異、簡便、快速，標(biāo)