清華大學微生物學第六生長繁殖及控制

1、第三節(jié)第三節(jié) 影響微生物生長的主要因素影響微生物生長的主要因素三、三、PH 值值 一、溫一、溫 度度 二、氧氣二、氧氣一、溫一、溫 度度一、一、 溫溫 度度生長溫度三基點生長溫度三基點最適生長溫度：最適生長溫度： 某菌代時最短或生長速率最某菌代時最短或生長速率最高時的培養(yǎng)溫度。高時的培養(yǎng)溫度。 最適生長溫度并非一切生理最適生長溫度并非一切生理過程的最適溫度過程的最適溫度一、一、 溫溫 度度二、氧氣二、氧氣微生物與氧的關(guān)系微生物與氧的關(guān)系二、氧氣二、氧氣為什么厭氧菌遠離氧氣呢？好氧微生物可以通過呼吸產(chǎn)生能量，好氧微生物可以通過呼吸產(chǎn)生能量，滿足機體的需要，但氧會使一切生滿足機體的需要，但氧會使一

2、切生物產(chǎn)生有毒害作用的代謝產(chǎn)物，如物產(chǎn)生有毒害作用的代謝產(chǎn)物，如超氧陰離子自由基與超氧陰離子自由基與H2O2超氧陰離子自由基的特點？超氧陰離子自由基的特點？ 帶負電，兼有分子、離子性質(zhì)帶負電，兼有分子、離子性質(zhì)性質(zhì)及不穩(wěn)定，化學反應(yīng)能力極強性質(zhì)及不穩(wěn)定，化學反應(yīng)能力極強可破壞細胞內(nèi)各種大分子和膜結(jié)構(gòu)可破壞細胞內(nèi)各種大分子和膜結(jié)構(gòu)或形成其他活性氧化物或形成其他活性氧化物超氧陰離子自由基的特點？超氧陰離子自由基的特點？ 為什么只有厭氧菌害怕氧氣呢？為什么只有厭氧菌害怕氧氣呢？ 三、三、 PH 微生物生長過程中機體內(nèi)發(fā)生的微生物生長過程中機體內(nèi)發(fā)生的絕大多數(shù)的反應(yīng)是酶促反應(yīng)，而酶促絕大多數(shù)的反應(yīng)是酶

3、促反應(yīng)，而酶促反應(yīng)都有一個最適反應(yīng)都有一個最適pH范圍，在此范范圍，在此范圍內(nèi)只要條件適合，酶促反應(yīng)速率最圍內(nèi)只要條件適合，酶促反應(yīng)速率最高，微生物生長速率最大高，微生物生長速率最大 因此微生物生長也有一個最適生因此微生物生長也有一個最適生長的長的pH范圍。范圍。 三、三、 PH三、三、 PH三、三、 PH1.微生物細胞內(nèi)環(huán)境的微生物細胞內(nèi)環(huán)境的PH是否穩(wěn)定？是否穩(wěn)定？2.微生物的生命活動會改變培養(yǎng)基或微生物的生命活動會改變培養(yǎng)基或外環(huán)境的外環(huán)境的PH嗎？嗎？三、三、 PH2.微生物的生命活動會改變培養(yǎng)基或外環(huán)境的微生物的生命活動會改變培養(yǎng)基或外環(huán)境的PH嗎？嗎？三、三、PH如何在發(fā)酵過程中及

4、時調(diào)節(jié)如何在發(fā)酵過程中及時調(diào)節(jié)pH？第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論良好微生物培養(yǎng)裝置的條件：良好微生物培養(yǎng)裝置的條件： 應(yīng)在提供豐富而均勻的營養(yǎng)物質(zhì)的應(yīng)在提供豐富而均勻的營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，能保證微生物獲得適宜的溫度基礎(chǔ)上，能保證微生物獲得適宜的溫度和對絕大多數(shù)微生物所必需的良好通氣和對絕大多數(shù)微生物所必需的良好通氣條件（只有少數(shù)厭氧菌例外），此外，條件（只有少數(shù)厭氧菌例外），此外，還要為微生物提供一個適宜的物理化學還要為微生物提供一個適宜的物理化學條件和嚴防雜菌的污染等。條件和嚴防雜菌的污染等。 第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論微生物培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展：微生物培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展：從少量培養(yǎng)發(fā)展到大規(guī)模培養(yǎng)；從淺層培

5、養(yǎng)發(fā)展從少量培養(yǎng)發(fā)展到大規(guī)模培養(yǎng)；從淺層培養(yǎng)發(fā)展到厚層（固體）或深層（液體）培養(yǎng)；從以固體到厚層（固體）或深層（液體）培養(yǎng)；從以固體培養(yǎng)技術(shù)為主發(fā)展到以液體培養(yǎng)技術(shù)為主；從靜培養(yǎng)技術(shù)為主發(fā)展到以液體培養(yǎng)技術(shù)為主；從靜止式液體培養(yǎng)發(fā)展到通氣攪拌式的液體培養(yǎng)；從止式液體培養(yǎng)發(fā)展到通氣攪拌式的液體培養(yǎng)；從單批培養(yǎng)發(fā)展到連續(xù)培養(yǎng)以至多級連續(xù)培養(yǎng)；從單批培養(yǎng)發(fā)展到連續(xù)培養(yǎng)以至多級連續(xù)培養(yǎng)；從利用分散的微生物細胞發(fā)展到利用固定化的細胞集利用分散的微生物細胞發(fā)展到利用固定化的細胞集團；從單純利用微生物細胞到大量培養(yǎng)、利用高團；從單純利用微生物細胞到大量培養(yǎng)、利用高等動、植物細胞；從單菌發(fā)酵發(fā)展到混菌發(fā)酵；等

6、動、植物細胞；從單菌發(fā)酵發(fā)展到混菌發(fā)酵；從利用野生菌種發(fā)展到利用變異株以及從利用野生菌種發(fā)展到利用變異株以及“工程工程菌菌”；低密度培養(yǎng)到高密度培養(yǎng)低密度培養(yǎng)到高密度培養(yǎng)等等。等等。 第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論一、實驗室培養(yǎng)法一、實驗室培養(yǎng)法二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論一、實驗室培養(yǎng)法（一）固體培養(yǎng)法（一）固體培養(yǎng)法（二）液體培養(yǎng)法（二）液體培養(yǎng)法一、實驗室培養(yǎng)法高層瓊脂柱高層瓊脂柱厭氧培養(yǎng)皿厭氧培養(yǎng)皿亨蓋特滾管技術(shù)亨蓋特滾管技術(shù)厭氧罐厭氧罐厭氧手套箱厭氧手套箱固體培養(yǎng)法固體培養(yǎng)法斜面、平板、斜面、平板、克氏扁瓶、茄子瓶克氏扁瓶、茄子瓶厭氧

7、菌培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)好氧菌培養(yǎng)好氧菌培養(yǎng)一、實驗室培養(yǎng)法克氏扁瓶克氏扁瓶 茄子瓶茄子瓶一、實驗室培養(yǎng)法（1）高層瓊脂柱）高層瓊脂柱 用加有還原劑的固體或半固體培用加有還原劑的固體或半固體培養(yǎng)基裝入試管中，以培養(yǎng)相應(yīng)的厭養(yǎng)基裝入試管中，以培養(yǎng)相應(yīng)的厭氧菌。氧菌。 在這種培養(yǎng)基中，越是深層，在這種培養(yǎng)基中，越是深層，其氧化還原勢越低，因而越有利于其氧化還原勢越低，因而越有利于厭氧菌的生長。厭氧菌的生長。 （2）厭氧培養(yǎng)皿厭氧培養(yǎng)皿 利用皿蓋去創(chuàng)造一個狹窄空間，加上使用還原性培養(yǎng)基而達到無氧培養(yǎng)的目的（例如Brewer皿，見圖6-10）；利用皿底有兩個相互隔開的空間，其中之一放焦性沒食子酸，另一則放Na

8、OH溶液，在皿蓋平板上接入待培養(yǎng)的厭氧菌后，立即密閉。經(jīng)搖動，使焦性沒食子酸與NaOH溶液接觸，發(fā)生吸氧反應(yīng)，從而造成無氧環(huán)境（如SPray皿或Bray皿一、實驗室培養(yǎng)法 （3）亨蓋特滾管技術(shù)）亨蓋特滾管技術(shù)原理：原理：利用除氧銅柱來制備高純氮，并用高純氮驅(qū)除利用除氧銅柱來制備高純氮，并用高純氮驅(qū)除小環(huán)境中的空氣，使培養(yǎng)基的配制、分裝、滅菌和貯存，小環(huán)境中的空氣，使培養(yǎng)基的配制、分裝、滅菌和貯存，以及菌種的接種、培養(yǎng)、觀察、分離、移種和保藏等以及菌種的接種、培養(yǎng)、觀察、分離、移種和保藏等過程始終處于高度無氧條件下，從而保證了這類嚴格過程始終處于高度無氧條件下，從而保證了這類嚴格厭氧菌的存活。厭

9、氧菌的存活。一、實驗室培養(yǎng)法 優(yōu)點：優(yōu)點：試管內(nèi)壁有較大的表面積試管內(nèi)壁有較大的表面積 試管口面積、試管腔體積極小試管口面積、試管腔體積極小有利于阻止氧與厭氧菌的接觸有利于阻止氧與厭氧菌的接觸一、實驗室培養(yǎng)法（4）厭氧罐技術(shù)）厭氧罐技術(shù)一、實驗室培養(yǎng)法（4）厭氧罐技術(shù)這是一種常規(guī)的不很嚴格的厭氧技術(shù)，可用于培養(yǎng)多數(shù)厭氧菌。在罐內(nèi)一般可放10個常用的培養(yǎng)皿（直徑9cm）或任何液體培養(yǎng)的試管。使用時，先裝入待培養(yǎng)的對象，然后密閉罐蓋，接著可采用抽真空灌氮抽真空灌氮抽真空灌混合氣（N2 CO2 H2=80 10 10，V/V）。這樣，罐內(nèi)少量剩余氧在鈀催化劑作用下，可被灌入的混合氣中的H2還原成水，

10、從而造成很高的無氧狀態(tài)。這時指示劑美藍被還原成無色。 一、實驗室培養(yǎng)法（4）厭氧罐技術(shù)目前，國際上盛行方便的“GasPak”產(chǎn)氣袋商品，把袋口剪開一角并加適量水后，即會自動放出足夠的CO2和H2。這就是內(nèi)源式的氫氣和二氧化碳源。一、實驗室培養(yǎng)法（4）厭氧罐技術(shù)特點：厭氧菌培養(yǎng)過程處于無氧狀態(tài) 培養(yǎng)基配制、接種、觀察 分離、保藏等過程無法保證一、實驗室培養(yǎng)法（5）厭氧手套箱實驗室研究厭氧菌的三大重要技術(shù):厭氧手套箱技術(shù)厭氧罐技術(shù)亨蓋特滾管技術(shù)一、實驗室培養(yǎng)法淺層液體靜止培養(yǎng)搖瓶振蕩培養(yǎng)通入加壓空氣機械攪拌等液體培養(yǎng)法1.好氧菌的液體培養(yǎng) 如何提高氧的供應(yīng)？一、實驗室培養(yǎng)法液體培養(yǎng)法實驗室常用好氧

11、菌培養(yǎng)法：試管液體培養(yǎng)三角瓶淺層液體培養(yǎng)搖瓶振蕩培養(yǎng)臺式發(fā)酵罐一、實驗室培養(yǎng)法搖瓶振蕩培養(yǎng)： 即將三角瓶內(nèi)培養(yǎng)液用8層紗布包住瓶口，以取代一般的棉花塞，同時降低瓶內(nèi)的裝液量，把它放到往復(fù)式或旋轉(zhuǎn)式搖床上作有節(jié)奏的振蕩，以達到提高溶氧量的目的。此法是荷蘭的AJKluyver等于1933年最早試用，目前仍廣泛地用于菌種的篩選以及進行生理、生化和發(fā)酵等試驗中。 一、實驗室培養(yǎng)法（4）臺式發(fā)酵罐 體積一般為幾升至幾十升，并有多種自動控制和記錄裝置?，F(xiàn)成的商品種類很多，用作發(fā)酵研究十分方便。 平行發(fā)酵罐發(fā)酵罐 第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置（一）固態(tài)培養(yǎng)法1. 好氧菌的曲法培養(yǎng)2

12、. 厭氧菌的堆積培養(yǎng)法二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置（一）固態(tài)培養(yǎng)法1. 好氧菌的曲法培養(yǎng) 好氧菌的固體培養(yǎng)方法都是將接過種的固體基質(zhì)薄薄地攤鋪在容器表面，這樣，既可使微生物獲得充分的氧氣，又可讓微生物在生長過程中產(chǎn)生的熱量及時釋放，這就是曲法培養(yǎng)的基本原理。 第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置（一）固態(tài)培養(yǎng)法第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置（一）固態(tài)培養(yǎng)法根據(jù)制曲的容器形狀和規(guī)模的大小，可把各種制曲方法分成瓶曲、袋曲（用塑料袋制曲）、盤曲（用木盤制曲）簾子曲（用竹簾子制曲）、轉(zhuǎn)鼓曲（用木質(zhì)空心轉(zhuǎn)鼓，不斷轉(zhuǎn)動制曲）和通風曲等。 第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論

13、二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置（一）固態(tài)培養(yǎng)法第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論（一）固態(tài)培養(yǎng)法2.厭氧菌的堆積培養(yǎng)法第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論（一）固態(tài)培養(yǎng)法2.厭氧菌的堆積培養(yǎng)法二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置（二）液體培養(yǎng)法好氧菌的培養(yǎng)（1）淺盤培養(yǎng)（2）深層液體通氣培養(yǎng) 發(fā)酵罐二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置 發(fā)酵罐（fermenter） 是一種鋼質(zhì)圓筒形直立容器，有扁球形的底和蓋，其高與直徑之比一般為1 22.5。 容積可大可小，大型發(fā)酵罐的容積在50500m3間，最大的為英國用于甲醇蛋白生產(chǎn)的巨型發(fā)酵罐，其有效容積達1500m3。 二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置 發(fā)酵罐啤酒發(fā)酵罐大型發(fā)酵罐（二）液

14、體培養(yǎng)法二、生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)微生物的裝置厭氧菌大規(guī)模的液體培養(yǎng)裝置 迄今為止，能作大規(guī)模液體培養(yǎng)的厭氧菌僅局限于丙酮丁醇梭菌的丙酮丁醇發(fā)酵一種。由于該菌是嚴格厭氧菌，故可省略通氣、攪拌設(shè)備，簡化工藝過程，還能大大節(jié)約能源的消耗。由于厭氧發(fā)酵罐不必安裝通氣、攪拌裝置，所以其體積一般可明顯大于有通氣、攪拌設(shè)備的發(fā)酵罐（國際上厭氧發(fā)酵罐的體積可達到2000m3），從而提高了生產(chǎn)效率。 第五節(jié) 有害微生物的控制第五節(jié) 有害微生物的控制滅菌：采用強烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部滅菌：采用強烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施。的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施。第五節(jié)

15、有害微生物的控制消毒：是一種采用較溫和的理化因素，僅殺死消毒：是一種采用較溫和的理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的病原菌，物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的病原菌，而對被消毒的物體基本無害的措施。而對被消毒的物體基本無害的措施。例如一些常用的對皮膚、水果、飲用水例如一些常用的對皮膚、水果、飲用水進行藥劑消毒的方法；進行藥劑消毒的方法；對啤酒、牛奶、果汁和醬油等對啤酒、牛奶、果汁和醬油等進行消毒處理的巴氏消毒法，等進行消毒處理的巴氏消毒法，等 （二）消毒（二）消毒（disinfection） 第五節(jié) 有害微生物的控制（三）防腐（antisepsis） 防腐就是利用某種理化因素完全抑制

16、霉腐微生物的生長繁殖，從而達到防止食品等發(fā)生霉腐的措施。第五節(jié) 有害微生物的控制防腐的措施很多，主要有： （1）低溫 利用4以下的各種低溫 （2）缺氧 在密閉容器中加入除氧劑 （3）干燥 曬干或紅外線干燥等 （4）高滲 鹽腌和糖漬等 （5）高酸度 泡菜 （6）防腐劑 苯甲酸、尼泊金、山梨酸等 第五節(jié) 有害微生物的控制（四）化療（四）化療（chemotherapy） 化療即化學治療。它是利用具有高度化療即化學治療。它是利用具有高度選擇毒力（選擇毒力（selectivetoxicity，即對病原菌，即對病原菌具有高度毒力而對宿主無顯著毒性）的化學具有高度毒力而對宿主無顯著毒性）的化學物質(zhì)來抑制宿主

17、體內(nèi)病原微生物的生長繁殖，物質(zhì)來抑制宿主體內(nèi)病原微生物的生長繁殖，借以達到治療該傳染病的一種措施。借以達到治療該傳染病的一種措施。二、物理滅菌因素的代表 高溫 高溫的致死作用，主要是由于它使微生物的高溫的致死作用，主要是由于它使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要蛋白質(zhì)和核酸等重要生物高分子發(fā)生變性、生物高分子發(fā)生變性、破壞破壞，例如它可使核酸發(fā)生脫氨、脫嘌呤或，例如它可使核酸發(fā)生脫氨、脫嘌呤或降解，以及破壞細胞膜上的類脂質(zhì)成分等。降解，以及破壞細胞膜上的類脂質(zhì)成分等。 （一）高溫殺菌作用的種類（一）高溫殺菌作用的種類 二、物理滅菌因素的代表 高溫1、干熱滅菌法、干熱滅菌法火焰灼燒（最徹底）火焰灼燒（最

18、徹底）烘箱內(nèi)熱空氣滅菌烘箱內(nèi)熱空氣滅菌干熱滅菌干熱滅菌溫度：溫度：150-170 時間：時間：1-2h對象：金屬器械、玻璃器皿等對象：金屬器械、玻璃器皿等1、干熱滅菌法、干熱滅菌法細菌的芽孢是耐熱性最強的生命形式，所以，干熱細菌的芽孢是耐熱性最強的生命形式，所以，干熱滅菌時間常以幾種有代表性的細菌芽孢的耐熱性作滅菌時間常以幾種有代表性的細菌芽孢的耐熱性作參考標準參考標準 2、濕熱滅菌、濕熱滅菌相同溫度和作用時間下，相同溫度和作用時間下，濕熱比干熱滅菌更好？濕熱比干熱滅菌更好？更易于傳遞熱量；更易于傳遞熱量；更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu)更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu) 濕熱對一般營養(yǎng)

19、體和孢子的殺滅條件：濕熱對一般營養(yǎng)體和孢子的殺滅條件：多數(shù)細菌和真菌的營養(yǎng)細胞：多數(shù)細菌和真菌的營養(yǎng)細胞：在在60左右處理左右處理5-10分鐘；分鐘；酵母菌和真菌的孢子：用酵母菌和真菌的孢子：用80以上溫度處理；以上溫度處理；細菌的芽孢：細菌的芽孢：121處理處理15分鐘以上；分鐘以上；2、濕熱滅菌、濕熱滅菌2、濕熱滅菌、濕熱滅菌對象：牛奶、啤酒、果酒或醬油等對象：牛奶、啤酒、果酒或醬油等For :高溫會破壞食品的營養(yǎng)與風味高溫會破壞食品的營養(yǎng)與風味巴氏消毒法巴氏消毒法具具體體方方法法低溫維持法：只要在低溫維持法：只要在63下維持下維持30min高溫瞬時法：只要在高溫瞬時法：只要在7285下維

20、持下維持15s超高溫法：只要超高溫法：只要120140加熱加熱24秒秒 煮沸消毒煮沸消毒 一般用于飲用水的消毒（一般用于飲用水的消毒（100下數(shù)分鐘）。下數(shù)分鐘）。 對于某些培養(yǎng)基，由于高壓蒸汽滅對于某些培養(yǎng)基，由于高壓蒸汽滅菌會破壞某些營養(yǎng)成分，可用間隙滅菌會破壞某些營養(yǎng)成分，可用間隙滅菌法滅菌，即流通蒸汽菌法滅菌，即流通蒸汽(或蒸煮或蒸煮)反復(fù)滅反復(fù)滅菌幾次，菌幾次，間隙滅菌法間隙滅菌法 第一次蒸煮后殺死微生物營養(yǎng)體，冷第一次蒸煮后殺死微生物營養(yǎng)體，冷卻，培養(yǎng)過夜，芽孢萌發(fā)，又第二次蒸煮卻，培養(yǎng)過夜，芽孢萌發(fā)，又第二次蒸煮，殺死營養(yǎng)體。這樣反復(fù)，殺死營養(yǎng)體。這樣反復(fù)23次就可以完次就可以完

21、全殺死營養(yǎng)體和芽孢，也可保持某些營養(yǎng)全殺死營養(yǎng)體和芽孢，也可保持某些營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞。物質(zhì)不被破壞。 常規(guī)加壓蒸氣滅菌法常規(guī)加壓蒸氣滅菌法2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法（2）加壓法）加壓法連續(xù)加壓蒸氣滅菌法連續(xù)加壓蒸氣滅菌法2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法加壓法加壓法 將待滅菌的物件放置在盛有適量水的加壓蒸汽滅菌鍋（或家用壓力鍋）內(nèi)。把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，并把其中原有的空氣徹底驅(qū)盡后將鍋密閉。再繼續(xù)加熱就會使鍋內(nèi)的蒸氣壓逐漸上升，從而溫度也上升到100以上。2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法加壓法加壓法 為達到良好的滅菌效果，一般要求溫度應(yīng)達到121（壓力為1kgcm2或15磅英寸2），時間維持1520分鐘，也可

22、采用在較低的溫度（115，即0.7kgcm2或10磅英寸2）下維持35分鐘的方法。2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法加壓法加壓法 此法適合于一切微生物學實驗室、醫(yī)療保健機構(gòu)或發(fā)酵工廠中對培養(yǎng)基及多種器材、物料的滅菌。 連續(xù)加壓蒸氣滅菌法連續(xù)加壓蒸氣滅菌法2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法加壓法加壓法135140下維持下維持515s優(yōu)點優(yōu)點：提高原料利用率、產(chǎn)品產(chǎn)量和質(zhì)量提高原料利用率、產(chǎn)品產(chǎn)量和質(zhì)量 提高發(fā)酵罐利用率提高發(fā)酵罐利用率 提高鍋爐利用率提高鍋爐利用率 宜于自動化操作宜于自動化操作適用范圍：適用范圍：大規(guī)模的發(fā)酵工廠中作培養(yǎng)基滅菌用大規(guī)模的發(fā)酵工廠中作培養(yǎng)基滅菌用 2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法加壓法加壓法利用溫度進行殺菌的定量指標？利用