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1、shmt的電泳制備1.shmt的電泳制備方案制定1.2SHMT的分離制備v原理原理:利用溶液中帶有不同量的電荷的陽(yáng)離子或陰離子,在外加電場(chǎng)中以不同的遷移速度向電極移動(dòng),而達(dá)到分離目的的分析方法。v電泳方案電泳方案:聚丙烯酰胺凝膠電泳3操作準(zhǔn)備v樣品處理樣品處理:超聲波破碎大腸桿菌。v管型盤狀電泳管型盤狀電泳v 電泳槽電泳槽:盤狀電泳槽國(guó)內(nèi)有很多單位生產(chǎn),也可因地制宜,自己制造,槽大多為圓筒形(圖9),也有長(zhǎng)方形的,上、下槽分別接鉑金絲電極,要注意電極到各膠管的距離相等,以保持各凝膠管的電場(chǎng)一致。v 電泳儀電泳儀:國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的型號(hào)很多,如北京六一儀器廠的DYY-型,電壓在0600v內(nèi)任意調(diào)節(jié),電流

2、輸出0100mA,這類電泳儀比較恰當(dāng)。v 玻璃管:玻璃管:選擇粗細(xì)均一的圓玻璃管,內(nèi)徑57mm左右,管長(zhǎng)70100mm。管口用金剛砂磨平,電泳管的清潔很重要,需浸入10%重鉻酸鹽-硫酸溶液中清洗,再用蒸餾水徹底淋洗干凈,在管中滴入丙酮而后干燥備用。v 4v聚膠架:聚膠架:普通試管架式樣,有機(jī)玻璃制成,架的孔洞內(nèi)裝一乳膠管,要求乳膠管孔內(nèi)徑與玻璃管外徑相同或略小。v 微量注射器或微量進(jìn)樣器微量注射器或微量進(jìn)樣器:加樣時(shí),由于需樣品量極小,作定量分析時(shí)要求樣品量準(zhǔn)確,因此最好用25.50或100l的微量進(jìn)樣器加樣,也可用50或100l加液器代用。v普通注射器普通注射器:主要用于灌膠和剝膠,2030ml,附加10號(hào)不銹鋼長(zhǎng)針頭(約10cm長(zhǎng))。 5v 其他其他:日光臺(tái)燈,PH計(jì),恒溫水浴,燒杯,容量瓶,量筒,試管,漏斗,濾紙,電爐,電子天平等。v試劑試劑 甲叉雙丙烯酰胺(Bis);丙烯酰胺(Acr);四甲基乙二胺(TEMED);過(guò)硫酸銨;核黃素(VB2);三羥甲基氨基甲烷(Tris);蔗糖;甘氨酸;鹽酸等。 6分離膠的制備分離膠的制備濃縮膠的制備濃縮膠的制

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