食物中毒基本原理及相關(guān)快速檢測(cè)技術(shù)(上課版)

1、食物中毒的基本原理食物中毒的基本原理及相關(guān)快速檢測(cè)技術(shù)及相關(guān)快速檢測(cè)技術(shù) 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院醫(yī)檢教研室醫(yī)檢教研室 汪川汪川 隨著經(jīng)濟(jì)日益全球化和國(guó)際食品貿(mào)隨著經(jīng)濟(jì)日益全球化和國(guó)際食品貿(mào)易的日益擴(kuò)大，危及人類(lèi)健康、生命安易的日益擴(kuò)大，危及人類(lèi)健康、生命安全的重大食品安全事件屢屢發(fā)生，令人全的重大食品安全事件屢屢發(fā)生，令人防不勝防，使食品安全成為一個(gè)重要性防不勝防，使食品安全成為一個(gè)重要性日益提高的日益提高的公共衛(wèi)生問(wèn)題公共衛(wèi)生問(wèn)題。食品安全問(wèn)題食品安全問(wèn)題 國(guó)外重要食品安全事件回顧：國(guó)外重要食品安全事件回顧：1986年始于英國(guó)的瘋牛病年始于英國(guó)的瘋牛病 。1999年

2、，比利時(shí)、荷蘭、法國(guó)、德國(guó)相繼發(fā)生因二惡英污年，比利時(shí)、荷蘭、法國(guó)、德國(guó)相繼發(fā)生因二惡英污染導(dǎo)致畜禽類(lèi)產(chǎn)品及乳制品含高濃度二惡英的事件。染導(dǎo)致畜禽類(lèi)產(chǎn)品及乳制品含高濃度二惡英的事件。 1996年年6月始于日本的大腸桿菌月始于日本的大腸桿菌O157食物中毒。食物中毒。 2002年年4月，瑞典司德哥爾摩大學(xué)的科學(xué)家發(fā)布一項(xiàng)研究月，瑞典司德哥爾摩大學(xué)的科學(xué)家發(fā)布一項(xiàng)研究報(bào)告指出，包括炸薯?xiàng)l在內(nèi)的多種油炸淀粉類(lèi)食品中含有報(bào)告指出，包括炸薯?xiàng)l在內(nèi)的多種油炸淀粉類(lèi)食品中含有致癌物質(zhì)丙烯酰胺。致癌物質(zhì)丙烯酰胺。 國(guó)內(nèi)食品安全情況：國(guó)內(nèi)食品安全情況： 2003年，衛(wèi)生部共收到全國(guó)重大食物中毒事件報(bào)年，衛(wèi)生部共

3、收到全國(guó)重大食物中毒事件報(bào)告告379起，起，12876人中毒，人中毒，323人死亡。與人死亡。與2002年比較，年比較，重大食物中毒的報(bào)告起數(shù)、中毒人數(shù)、死亡人數(shù)分別重大食物中毒的報(bào)告起數(shù)、中毒人數(shù)、死亡人數(shù)分別增加了增加了196.1%、80.7%、134.1%。 我國(guó)致病性微生物引起的食源性疾病現(xiàn)狀表明，我國(guó)致病性微生物引起的食源性疾病現(xiàn)狀表明，由腸道致病菌污染食品引起的食物中毒以及疾病散發(fā)由腸道致病菌污染食品引起的食物中毒以及疾病散發(fā)是直接造成人體健康損害的主要食源性危害。是直接造成人體健康損害的主要食源性危害。食源性疾?。ㄊ吃葱约膊。╢ood borne disease） nWHO的定義

4、的定義 “食源性疾病是指通過(guò)食源性疾病是指通過(guò)攝食攝食進(jìn)入人體內(nèi)的進(jìn)入人體內(nèi)的各種致病因子各種致病因子引起的、通常具有引起的、通常具有感染性質(zhì)感染性質(zhì)或或中毒性質(zhì)中毒性質(zhì)的一類(lèi)疾病的一類(lèi)疾病”。n美國(guó)美國(guó)CDC的定義的定義 “食源性疾病是由于食用了受污染的食品或飲料而引起的食源性疾病是由于食用了受污染的食品或飲料而引起的疾病疾病”。n聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織強(qiáng)調(diào)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織強(qiáng)調(diào) “食源性疾病是一組重要的傳染病和中毒性疾病食源性疾病是一組重要的傳染病和中毒性疾病”。 在美國(guó)，每年有在美國(guó)，每年有7,6007,600萬(wàn)病例，導(dǎo)致萬(wàn)病例，導(dǎo)致5,0005,000人死人死亡。亡。 1985-2003年，中國(guó)食

5、物中毒共發(fā)生年，中國(guó)食物中毒共發(fā)生26,89426,894起，起，發(fā)病人數(shù)發(fā)病人數(shù)722,322722,322人。人。 目前已知的食源性疾病大約有目前已知的食源性疾病大約有250250多種，大多數(shù)多種，大多數(shù)為由為由生物因素生物因素導(dǎo)致的感染性疾病，其中尤以導(dǎo)致的感染性疾病，其中尤以細(xì)菌細(xì)菌性性食源性疾病最為普遍。食源性疾病最為普遍。 食源性疾病的三個(gè)基本要素食源性疾病的三個(gè)基本要素 食物是傳播疾病的食物是傳播疾病的媒介媒介 引起食源性疾病的病原物是引起食源性疾病的病原物是食物中的食物中的致病因子致病因子 臨床特征為臨床特征為急性急性中毒性或感染性表現(xiàn)中毒性或感染性表現(xiàn) 食源性疾病的特點(diǎn)：食源

6、性疾病的特點(diǎn)： 食源性疾病的發(fā)病形式有食源性疾病的發(fā)病形式有暴發(fā)暴發(fā)和和散發(fā)散發(fā)兩種。兩種。 食源性疾病中的食源性疾病中的腸道傳染病腸道傳染病存在存在人與人人與人之間之間的傳播。的傳播。 食源性疾病的種類(lèi)多，潛伏期各有不同。食源性疾病的種類(lèi)多，潛伏期各有不同。 食源性疾病食源性疾病不一定不一定出現(xiàn)明顯的消化道癥狀。出現(xiàn)明顯的消化道癥狀。 食源性疾病主要包括：食源性疾病主要包括： 食物中毒食物中毒 經(jīng)食物而感染的腸道傳染病經(jīng)食物而感染的腸道傳染病 食源性寄生蟲(chóng)病食源性寄生蟲(chóng)病 食物中有毒、有害污染物所引起的中毒性食物中有毒、有害污染物所引起的中毒性疾病。疾病。 定義：定義： 攝入了含有攝入了含有

7、生物性生物性、化學(xué)性化學(xué)性有毒有有毒有害物質(zhì)的食品或把有毒有害物質(zhì)當(dāng)作食品害物質(zhì)的食品或把有毒有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后所出現(xiàn)的攝入后所出現(xiàn)的非傳染性非傳染性急性、亞急性急性、亞急性疾病。疾病。 特點(diǎn)：特點(diǎn)： （1）患者起病常為暴發(fā)性，多數(shù)在）患者起病常為暴發(fā)性，多數(shù)在24-48小時(shí)內(nèi)相繼發(fā)??；小時(shí)內(nèi)相繼發(fā)病； （2）同餐者先后出現(xiàn)相似的癥狀，一般以）同餐者先后出現(xiàn)相似的癥狀，一般以胃腸癥狀較明顯；胃腸癥狀較明顯； （3）未進(jìn)同一食品者不發(fā)??；）未進(jìn)同一食品者不發(fā)?。?（4）停止進(jìn)食有毒食品后，短期內(nèi)無(wú)新患）停止進(jìn)食有毒食品后，短期內(nèi)無(wú)新患者出現(xiàn)。者出現(xiàn)。食物中毒的分類(lèi)食物中毒的分類(lèi)細(xì)菌性細(xì)菌性食

8、物中毒食物中毒真菌及其毒真菌及其毒素食物中毒素食物中毒動(dòng)物性動(dòng)物性食物中毒食物中毒有毒植物有毒植物中毒中毒化學(xué)性化學(xué)性食物中毒食物中毒分分 類(lèi)類(lèi)什么是細(xì)菌性食物中毒？什么是細(xì)菌性食物中毒？ 人體攝入了被人體攝入了被細(xì)菌細(xì)菌或其或其毒素毒素污染的食品后所出現(xiàn)的污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染非傳染性急性性急性、亞急性亞急性疾病。疾病。細(xì)細(xì) 菌菌 性性 食食 物物 中中 毒毒細(xì)菌性食物中毒類(lèi)型細(xì)菌性食物中毒類(lèi)型毒素毒素( (腸毒素腸毒素) )型型感染感染( (細(xì)菌細(xì)菌侵入侵入) )型型混混 合合 型型 彎曲菌和沙門(mén)菌是彎曲菌和沙門(mén)菌是2004年澳大利亞最主要的食源年澳大利亞最主要的食源性疾病病原菌；性疾

9、病病原菌； 在美國(guó)，主要的病原菌為彎曲菌、沙門(mén)菌和腸出在美國(guó)，主要的病原菌為彎曲菌、沙門(mén)菌和腸出血性大腸桿菌。血性大腸桿菌。 1986-1996年我國(guó)導(dǎo)致致病微生物性食物中毒最年我國(guó)導(dǎo)致致病微生物性食物中毒最多的前多的前5位病原菌由高到低分別為位病原菌由高到低分別為沙門(mén)菌沙門(mén)菌、副溶血副溶血性弧菌性弧菌、變形桿菌變形桿菌、金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌和和蠟樣芽蠟樣芽孢桿菌孢桿菌。常見(jiàn)食物中毒病原菌常見(jiàn)食物中毒病原菌全國(guó)食品污染物和食源性疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)全國(guó)食品污染物和食源性疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)細(xì)菌性食物中毒流行特征細(xì)菌性食物中毒流行特征（1）呈爆發(fā)性。）呈爆發(fā)性。 （2）潛伏期短而固定。）潛伏期短而固定。 （

10、3）病程短，病死率低。）病程短，病死率低。 （4）有季節(jié)性。）有季節(jié)性。 食品變質(zhì)食品變質(zhì) 食品沒(méi)有煮熟煮透食品沒(méi)有煮熟煮透 生吃食品生吃食品 食品從業(yè)人員食品從業(yè)人員1、中毒病人在、中毒病人在相近的時(shí)間內(nèi)相近的時(shí)間內(nèi)，均使用過(guò)某種，均使用過(guò)某種相同相同的可的可疑中毒疑中毒食品食品，未食用者不發(fā)病。停止食用該食品后，發(fā)，未食用者不發(fā)病。停止食用該食品后，發(fā)病很快停止。病很快停止。2、同種食物中毒病人的臨床表現(xiàn)基本相似。、同種食物中毒病人的臨床表現(xiàn)基本相似。3、潛伏期、潛伏期一般較短一般較短。4、一般無(wú)人與人之間的、一般無(wú)人與人之間的直接直接傳染。傳染。5、從、從中毒食品中毒食品或或病人病人的生

11、物樣品中檢出能引起與的生物樣品中檢出能引起與中毒中毒臨床表現(xiàn)一致臨床表現(xiàn)一致的病原。的病原。6、未獲取足夠的實(shí)驗(yàn)室診斷資料時(shí)，可判定為原因不明食、未獲取足夠的實(shí)驗(yàn)室診斷資料時(shí)，可判定為原因不明食物中毒。物中毒。 1 1、及、及時(shí)報(bào)時(shí)報(bào)告告當(dāng)當(dāng)?shù)氐牡氐男l(wèi)衛(wèi)生行政部生行政部門(mén)門(mén)。 2 2、對(duì)對(duì)病人采取病人采取緊緊急急處處理理 3 3、對(duì)對(duì)中毒食品的控制中毒食品的控制處處理理 4 4、根據(jù)不同的中毒食品，、根據(jù)不同的中毒食品，對(duì)對(duì)中毒中毒場(chǎng)場(chǎng) 所采取相所采取相應(yīng)應(yīng)的消毒的消毒處處理。理。 調(diào)查：了解中毒的經(jīng)過(guò)，包括中毒的時(shí)間、原因、調(diào)查：了解中毒的經(jīng)過(guò)，包括中毒的時(shí)間、原因、人數(shù)、和病人的臨床癥狀和

12、體征，中毒前攝入過(guò)何種食人數(shù)、和病人的臨床癥狀和體征，中毒前攝入過(guò)何種食物、同食者的癥狀等。物、同食者的癥狀等。 根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查結(jié)果，結(jié)合流行病學(xué)特征或有毒物質(zhì)根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查結(jié)果，結(jié)合流行病學(xué)特征或有毒物質(zhì)的理化性質(zhì)，初步判斷出病原的可能類(lèi)別，擬定出的理化性質(zhì)，初步判斷出病原的可能類(lèi)別，擬定出合合理理的檢驗(yàn)程序。的檢驗(yàn)程序。處理基本程序樣品采集n樣品的采集：樣品的采集：不要求樣品的代表性，而強(qiáng)調(diào)不要求樣品的代表性，而強(qiáng)調(diào)針對(duì)性，盡可能采集毒物含量最多的部位。針對(duì)性，盡可能采集毒物含量最多的部位。檢品檢品最好最好是中毒者曾經(jīng)吃過(guò)的剩余食物或藥是中毒者曾經(jīng)吃過(guò)的剩余食物或藥物；其次可取中毒者的嘔吐物、

13、胃內(nèi)容物、物；其次可取中毒者的嘔吐物、胃內(nèi)容物、尿液、血液等。尿液、血液等。處理基本程序檢測(cè)測(cè)定：取樣后應(yīng)盡快測(cè)定，測(cè)定時(shí)盡可測(cè)定：取樣后應(yīng)盡快測(cè)定，測(cè)定時(shí)盡可能采用可靠的測(cè)定方法，對(duì)方法的靈敏能采用可靠的測(cè)定方法，對(duì)方法的靈敏度要求不一定很高，但應(yīng)度要求不一定很高，但應(yīng)簡(jiǎn)便、快速、簡(jiǎn)便、快速、可靠?？煽?。 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果下結(jié)論時(shí)，應(yīng)以事實(shí)為依據(jù)，客對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果下結(jié)論時(shí)，應(yīng)以事實(shí)為依據(jù)，客觀地作出結(jié)論，不能絕對(duì)化。觀地作出結(jié)論，不能絕對(duì)化。 如結(jié)果為陰性，應(yīng)報(bào)告為如結(jié)果為陰性，應(yīng)報(bào)告為“按按XX方法試驗(yàn)，方法試驗(yàn)，未檢出未檢出xx”，而不能報(bào)告為，而不能報(bào)告為 “無(wú)無(wú)”、“0”等字樣。等字樣。 如檢

14、驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，應(yīng)注明如檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，應(yīng)注明“用用XX方法檢方法檢出出xx”，而不能作出，而不能作出“XX中毒中毒”或或“XX致死致死”等結(jié)論。等結(jié)論。 應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有的快速檢驗(yàn)方法如在此之前所有的快速檢驗(yàn)方法如PCR、VIDAS等得到的等得到的結(jié)果結(jié)果僅供參考僅供參考。 應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的病原體的統(tǒng)一性統(tǒng)一性。 非病源檢樣與病源檢樣檢出的非病源檢樣與病源檢樣檢出的致病意致病意義明確義明確的細(xì)菌在種類(lèi)、生化和的細(xì)菌在種類(lèi)、生化和/ /或血清型、或血清型、毒素型毒素型均一致均一

15、致時(shí)，可報(bào)告為細(xì)菌性食源性時(shí)，可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的疾病事件的病原體病原體。 非病源檢樣與病源檢樣非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出只有一種檢出病原菌時(shí)，此檢驗(yàn)結(jié)果僅供臨床與流行病病原菌時(shí)，此檢驗(yàn)結(jié)果僅供臨床與流行病學(xué)診斷參考，其中非病源檢樣的檢驗(yàn)結(jié)果學(xué)診斷參考，其中非病源檢樣的檢驗(yàn)結(jié)果參考價(jià)值較大，病源檢樣只有在同次細(xì)菌參考價(jià)值較大，病源檢樣只有在同次細(xì)菌性食源性疾病事件中的多數(shù)患者樣品中檢性食源性疾病事件中的多數(shù)患者樣品中檢出種類(lèi)、生化和出種類(lèi)、生化和/ /或血清型、毒素型均一致或血清型、毒素型均一致的病原體時(shí)才有的病原體時(shí)才有參考價(jià)值參考價(jià)值。 非病源檢樣與病源檢樣非病源檢樣與病源

16、檢樣只有一種檢出只有一種檢出病原病原菌時(shí)，在與同一次細(xì)菌性食源性疾病事件中采集菌時(shí)，在與同一次細(xì)菌性食源性疾病事件中采集的多數(shù)患者的急性發(fā)病期和恢復(fù)期血清發(fā)生有凝的多數(shù)患者的急性發(fā)病期和恢復(fù)期血清發(fā)生有凝集集效價(jià)顯著升高效價(jià)顯著升高的，可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾的，可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的病原體，但此結(jié)果僅用作病事件的病原體，但此結(jié)果僅用作回顧性診斷回顧性診斷。 非病源檢樣與病源檢樣檢出占非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對(duì)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)但通常但通常致病意義不甚明確致病意義不甚明確的細(xì)菌如的細(xì)菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類(lèi)、大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類(lèi)、生化和生化和/ /或血清型均一致

17、，同時(shí)本次細(xì)菌或血清型均一致，同時(shí)本次細(xì)菌性食源性疾病事件中非患者對(duì)照標(biāo)本中性食源性疾病事件中非患者對(duì)照標(biāo)本中未檢出該菌時(shí)，應(yīng)做該菌的毒素、毒素未檢出該菌時(shí)，應(yīng)做該菌的毒素、毒素基因或動(dòng)物試驗(yàn)，陽(yáng)性結(jié)果可報(bào)告為細(xì)基因或動(dòng)物試驗(yàn)，陽(yáng)性結(jié)果可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的菌性食源性疾病事件的病原體病原體。 樣品中檢出的生化、血清符合樣品中檢出的生化、血清符合致瀉致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一，一定要以定要以毒素、毒素基因測(cè)試陽(yáng)性毒素、毒素基因測(cè)試陽(yáng)性為最為最終結(jié)論報(bào)告。終結(jié)論報(bào)告。 蠟樣芽胞桿菌蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達(dá)在非病源檢樣中須達(dá)到到10105 5cfu

18、/g(ml)cfu/g(ml)以上者才有報(bào)告價(jià)值。以上者才有報(bào)告價(jià)值。 細(xì)菌性食物中毒細(xì)菌性食物中毒快速診斷技術(shù)快速診斷技術(shù) 快速診斷技術(shù)快速診斷技術(shù) 免疫金技術(shù)免疫金技術(shù) 協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn) 顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng) 酶聯(lián)免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫技術(shù) 分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù) 免疫磁珠技術(shù)免疫磁珠技術(shù) 原理原理 根據(jù)細(xì)菌在其生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中可合成和釋放根據(jù)細(xì)菌在其生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中可合成和釋放某些某些特異性的酶特異性的酶，按酶的特性，選用相應(yīng)，按酶的特性，選用相應(yīng)的底物和指示劑，將其配制在相關(guān)的培養(yǎng)基的底物和指示劑，將其配制在相關(guān)的培養(yǎng)基中。根據(jù)細(xì)菌反應(yīng)后出現(xiàn)的明顯的顏色變化，中。根

19、據(jù)細(xì)菌反應(yīng)后出現(xiàn)的明顯的顏色變化，確定待分離的可疑菌株，反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果有確定待分離的可疑菌株，反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果有助于細(xì)菌的快速診斷。助于細(xì)菌的快速診斷。 與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，顯色培養(yǎng)基的與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，顯色培養(yǎng)基的靈靈敏性敏性、特異性特異性和和選擇性選擇性都明顯優(yōu)于傳統(tǒng)培都明顯優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基，且養(yǎng)基，且節(jié)省時(shí)間節(jié)省時(shí)間、人力人力和和資金投入資金投入，為，為食品微生物檢測(cè)提供了新途徑。食品微生物檢測(cè)提供了新途徑。 顯色培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)顯色培養(yǎng)基缺點(diǎn) （1 1）檢測(cè)混合感染的微生物時(shí)，由于非目標(biāo)菌的競(jìng)爭(zhēng)作用，）檢測(cè)混合感染的微生物時(shí)，由于非目標(biāo)菌的競(jìng)爭(zhēng)作用，常常會(huì)造成目標(biāo)菌漏檢和檢測(cè)結(jié)果假陰性，或

20、由于非目標(biāo)菌常常會(huì)造成目標(biāo)菌漏檢和檢測(cè)結(jié)果假陰性，或由于非目標(biāo)菌也存在特異性酶反應(yīng)造成檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性，從而降低了顯也存在特異性酶反應(yīng)造成檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性，從而降低了顯色培養(yǎng)基的靈敏性和特異性；色培養(yǎng)基的靈敏性和特異性； （2 2）某種細(xì)菌不同血清型可能存在特異性酶反應(yīng)的差異，）某種細(xì)菌不同血清型可能存在特異性酶反應(yīng)的差異，結(jié)果在顯色培養(yǎng)基上出現(xiàn)不同顏色的菌落，還需要輔助觀察結(jié)果在顯色培養(yǎng)基上出現(xiàn)不同顏色的菌落，還需要輔助觀察或傳統(tǒng)生化試驗(yàn)才能對(duì)菌株作鑒定；或傳統(tǒng)生化試驗(yàn)才能對(duì)菌株作鑒定； （3 3）顯色培養(yǎng)基中的抑菌劑在抑制雜菌生長(zhǎng)的同時(shí)可能對(duì)）顯色培養(yǎng)基中的抑菌劑在抑制雜菌生長(zhǎng)的同時(shí)可能對(duì)

21、目標(biāo)菌產(chǎn)生一定的影響；目標(biāo)菌產(chǎn)生一定的影響； （4 4）一些顯色培養(yǎng)基在檢測(cè)過(guò)程中只能對(duì)目標(biāo)菌進(jìn)行定性）一些顯色培養(yǎng)基在檢測(cè)過(guò)程中只能對(duì)目標(biāo)菌進(jìn)行定性分析，還不能定量分析。分析，還不能定量分析。 免疫磁珠技術(shù)免疫磁珠技術(shù) 1.免疫磁珠的性質(zhì)免疫磁珠的性質(zhì) 免疫磁珠（免疫磁珠（Immunomagnetic bead，IMB由載由載體微球和免疫配基結(jié)合而成。載體微球的核心為金屬體微球和免疫配基結(jié)合而成。載體微球的核心為金屬小顆粒（小顆粒（Fe2 O3、Fe3O4），核心外包裹一層高分子），核心外包裹一層高分子材料（如聚苯乙烯、聚氯乙烯），最外層是功能基層，材料（如聚苯乙烯、聚氯乙烯），最外層是功能

22、基層，如氨基（如氨基（-NH-2）、羧基（）、羧基（-COOH）、羥基（）、羥基（-OH）。）。由于載體微球表現(xiàn)物理性質(zhì)不同，可結(jié)合不同的免疫由于載體微球表現(xiàn)物理性質(zhì)不同，可結(jié)合不同的免疫配基（如抗體、抗原、配基（如抗體、抗原、DNA、RNA）。）。 IMBIMB的大小和形狀的均一性，可使靶細(xì)胞迅速和的大小和形狀的均一性，可使靶細(xì)胞迅速和有效地結(jié)合到磁珠上，它的球形結(jié)構(gòu)可消除與不規(guī)有效地結(jié)合到磁珠上，它的球形結(jié)構(gòu)可消除與不規(guī)則形狀粒子有關(guān)的非特異性結(jié)合，超順磁性可使磁則形狀粒子有關(guān)的非特異性結(jié)合，超順磁性可使磁珠置于磁場(chǎng)時(shí)，顯示其磁性，從磁場(chǎng)移出時(shí)，磁性珠置于磁場(chǎng)時(shí)，顯示其磁性，從磁場(chǎng)移出時(shí)，

23、磁性消除，磁珠分散，保護(hù)性殼可防止金屬微粒漏出。消除，磁珠分散，保護(hù)性殼可防止金屬微粒漏出。 根據(jù)磁珠功能基結(jié)合的免疫配基不同分為：包根據(jù)磁珠功能基結(jié)合的免疫配基不同分為：包被一抗磁珠、包被二抗磁珠、未包被的磁珠和包被被一抗磁珠、包被二抗磁珠、未包被的磁珠和包被抗生物素的磁珠?？股锼氐拇胖椤?2. 2.免疫磁珠技術(shù)的原理免疫磁珠技術(shù)的原理 免疫磁珠的免疫配基可結(jié)合活性蛋白質(zhì)（如抗體），利免疫磁珠的免疫配基可結(jié)合活性蛋白質(zhì)（如抗體），利用磁珠上的抗體可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合后形成抗原一用磁珠上的抗體可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合后形成抗原一抗體一磁珠免疫復(fù)合物，這種復(fù)合物在磁場(chǎng)作用下，發(fā)生力抗體

24、一磁珠免疫復(fù)合物，這種復(fù)合物在磁場(chǎng)作用下，發(fā)生力學(xué)移動(dòng)，使復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，達(dá)到分離特異性抗原的學(xué)移動(dòng)，使復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，達(dá)到分離特異性抗原的目的。免疫磁珠的免疫配基也可借助親和素一生物素系統(tǒng)與目的。免疫磁珠的免疫配基也可借助親和素一生物素系統(tǒng)與非蛋白結(jié)合（如各種非蛋白結(jié)合（如各種DNADNA、RNARNA大分子大分子) )，用磁珠固相分離單鏈，用磁珠固相分離單鏈法，將磁珠上結(jié)合，雙鏈法，將磁珠上結(jié)合，雙鏈DNADNA、RNARNA通過(guò)堿性變形處理成為單通過(guò)堿性變形處理成為單股股DNADNA、RNARNA，可直接快速對(duì)，可直接快速對(duì)PCRPCR雙鏈產(chǎn)物進(jìn)行分離或?qū)ζ鋯捂滊p鏈產(chǎn)物進(jìn)行分

25、離或?qū)ζ鋯捂溸M(jìn)行測(cè)序。進(jìn)行測(cè)序。幾種常見(jiàn)的幾種常見(jiàn)的細(xì)菌性食物中毒細(xì)菌性食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒 1.病原學(xué)病原學(xué) 副溶血性弧菌為革蘭陰性無(wú)芽胞桿菌，一般為副溶血性弧菌為革蘭陰性無(wú)芽胞桿菌，一般為0.3-0.7m2-6m大小，易呈多形態(tài)，有弧狀、橢大小，易呈多形態(tài)，有弧狀、橢圓狀、球狀、棒狀、莢膜球桿狀。菌體兩端濃染，一圓狀、球狀、棒狀、莢膜球桿狀。菌體兩端濃染，一端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。本菌廣泛存在于海水中偶亦端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。本菌廣泛存在于海水中偶亦見(jiàn)淡水。在見(jiàn)淡水。在37、PH7.7、含氯化鈉、含氯化鈉3-4的環(huán)境中的環(huán)境中生長(zhǎng)最好。生長(zhǎng)最好。2.副溶血性弧菌的毒力

26、因子副溶血性弧菌的毒力因子 （1）耐熱直接溶血毒素耐熱直接溶血毒素（thermostable direct hemolysin, TDH）：該菌的主要毒力因子。）：該菌的主要毒力因子。 （2）耐熱相關(guān)溶血毒素耐熱相關(guān)溶血毒素（thermostable related hemolysin, TRH）：是一些菌株特別）：是一些菌株特別是是KP-菌株的毒力因子。菌株的毒力因子。 （3）尿素酶尿素酶:也有可能是某些副溶血性弧菌的毒也有可能是某些副溶血性弧菌的毒力因子之一力因子之一 。尿素酶基因尿素酶基因(ureC)與與TRH基因之間基因之間有一定的聯(lián)系，在具有致病性的有一定的聯(lián)系，在具有致病性的KP-

27、菌株染色體上菌株染色體上可能同時(shí)存在尿素酶基因可能同時(shí)存在尿素酶基因(ureC)和和trh基因基因 。副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒 3.流行病學(xué)流行病學(xué) （1）季節(jié)性：）季節(jié)性：夏秋季節(jié)夏秋季節(jié)是發(fā)病的高峰期。是發(fā)病的高峰期。 （2）傳染源：）傳染源：感染者感染者。 （3）傳播途徑：主要經(jīng)）傳播途徑：主要經(jīng)食物傳播食物傳播，帶魚(yú)、黃魚(yú)、，帶魚(yú)、黃魚(yú)、烏賊、梭子蟹等烏賊、梭子蟹等海產(chǎn)品海產(chǎn)品帶菌率極高帶菌率極高 4. 4.臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 潛伏期短，潛伏期短，4-484-48小時(shí)不等。一般為小時(shí)不等。一般為1010小時(shí)左右，最短小時(shí)左右，最短2

28、-32-3小小時(shí)即可發(fā)病。發(fā)病急，具有急性腸胃炎的典型癥狀：腹痛、時(shí)即可發(fā)病。發(fā)病急，具有急性腸胃炎的典型癥狀：腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐等。初期為腹部不適，上腹部疼痛或胃部腹瀉、惡心、嘔吐等。初期為腹部不適，上腹部疼痛或胃部痙攣，惡心、嘔吐、發(fā)燒，以及頭痛、發(fā)汗、口渴等癥狀。痙攣，惡心、嘔吐、發(fā)燒，以及頭痛、發(fā)汗、口渴等癥狀。發(fā)病發(fā)病5-65-6小時(shí)后感到劇烈腹痛，小時(shí)后感到劇烈腹痛，臍部陣發(fā)性絞痛臍部陣發(fā)性絞痛為本病的特為本病的特點(diǎn)，腹瀉多為水樣便，重者為黏液便和黏血便。該病病后免點(diǎn)，腹瀉多為水樣便，重者為黏液便和黏血便。該病病后免疫力不強(qiáng)，可重復(fù)感染。疫力不強(qiáng)，可重復(fù)感染。 副溶血性弧菌食物

29、中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒 5.診斷依據(jù)診斷依據(jù) （1）符合副溶血性弧菌感染的）符合副溶血性弧菌感染的流行病學(xué)特點(diǎn)流行病學(xué)特點(diǎn)和和主要臨主要臨床表現(xiàn)床表現(xiàn)。 （2）從可疑食品、食品容器、病人嘔吐物或腹瀉便中）從可疑食品、食品容器、病人嘔吐物或腹瀉便中檢出檢出生物學(xué)特性或血清型別生物學(xué)特性或血清型別致的副溶血性弧菌。致的副溶血性弧菌。 （3）同一暴發(fā)事件中病人的）同一暴發(fā)事件中病人的臨床表現(xiàn)基本相同臨床表現(xiàn)基本相同。 （4）從）從2例及例及2例以上病例的糞便中分離到例以上病例的糞便中分離到“神奈川神奈川”試驗(yàn)試驗(yàn)陽(yáng)性的病原體或從可疑食品中分離到相同的大量病原

30、菌陽(yáng)性的病原體或從可疑食品中分離到相同的大量病原菌（105CFUg以上）。以上）。 （5）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)具有毒性或與患者血清有抗原抗體反應(yīng)。）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)具有毒性或與患者血清有抗原抗體反應(yīng)。6. 6.快速檢測(cè)快速檢測(cè)（1 1）基于分子生物學(xué)技術(shù)的快速檢測(cè)：針對(duì)）基于分子生物學(xué)技術(shù)的快速檢測(cè)：針對(duì)tdhtdh基因、基因、tdhtdh及及trhtrh基因的基因的PCRPCR技術(shù)以及采用堿性磷酸酶標(biāo)記的寡技術(shù)以及采用堿性磷酸酶標(biāo)記的寡核苷酸探針技術(shù)（核苷酸探針技術(shù)（envyme-labeled oligonucleotide probeenvyme-labeled oligonucleotide probe）

31、等。）等。副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒 缺點(diǎn)：只能檢測(cè)具有致病毒力的副溶血性弧菌，缺點(diǎn)：只能檢測(cè)具有致病毒力的副溶血性弧菌，而不適用于測(cè)定其總量。而不適用于測(cè)定其總量。 編碼不耐熱溶血素（編碼不耐熱溶血素（thermolabile thermolabile hemolysinhemolysin）的基因）的基因tlhtlh，并發(fā)現(xiàn)該基因，并發(fā)現(xiàn)該基因?yàn)樗惺茉嚫比苎曰【灿校瑹o(wú)論為所有受試副溶血性弧菌所共有，無(wú)論其為致病性還是非致病性菌株株。其為致病性還是非致病性菌株株。tlhtlh基基因的發(fā)現(xiàn)為開(kāi)發(fā)快速檢測(cè)副溶血性弧菌因的發(fā)現(xiàn)為開(kāi)發(fā)快速檢測(cè)副溶血性弧菌總量的方法提供了可能?？偭?/p>

32、的方法提供了可能。 副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒（2）顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基技術(shù)）顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基技術(shù) 副溶血性弧菌分離檢測(cè)的選擇性顯色培養(yǎng)基副溶血性弧菌分離檢測(cè)的選擇性顯色培養(yǎng)基(bio-chrome vibrio medium，BCVM)副溶血性弧菌形成紫副溶血性弧菌形成紫色菌落，而創(chuàng)傷弧菌、擬態(tài)弧菌以及霍利斯弧菌則為藍(lán)綠色色菌落，而創(chuàng)傷弧菌、擬態(tài)弧菌以及霍利斯弧菌則為藍(lán)綠色菌落菌落。 鑒于鑒于BCVM的高度特異性，研究人員開(kāi)發(fā)出一種用于定的高度特異性，研究人員開(kāi)發(fā)出一種用于定量測(cè)定副溶血性弧菌總量的雙層培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)法量測(cè)定副溶血性弧

33、菌總量的雙層培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)法(double layer agar plate，DLAP)。DLAP法操作簡(jiǎn)單，類(lèi)似于傳統(tǒng)法操作簡(jiǎn)單，類(lèi)似于傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)法，所不同的是培養(yǎng)基有兩層，底層為的平板計(jì)數(shù)法，所不同的是培養(yǎng)基有兩層，底層為BCVM，上層為非選擇性培養(yǎng)基上層為非選擇性培養(yǎng)基(TSA+1.5%NaCI)。 副溶血性弧菌在海博弧菌顯色培養(yǎng)基上典型特征：副溶血性弧菌在海博弧菌顯色培養(yǎng)基上典型特征：副溶血性弧菌顯藍(lán)色至藍(lán)綠色副溶血性弧菌顯藍(lán)色至藍(lán)綠色 ， 霍亂弧菌和其它弧霍亂弧菌和其它弧菌顯無(wú)色。菌顯無(wú)色。 出自：青島高科園海博生物技術(shù)有限公司出自：青島高科園海博生物技術(shù)有限公司 副溶血性弧菌食

34、物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒副溶血性弧菌食物中毒法國(guó)科瑪嘉弧菌顯色法國(guó)科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)基（CHROMagar Vibrio）： 副溶血性弧菌：紫色；副溶血性弧菌：紫色；其他弧菌：白色或無(wú)其他弧菌：白色或無(wú)色色 沙門(mén)菌屬（沙門(mén)菌屬（Salmonella）是一大群）是一大群革蘭氏染色陰性的桿革蘭氏染色陰性的桿菌菌。按最新分類(lèi)法，分屬于腸桿菌科沙門(mén)菌屬，包括腸道沙門(mén)。按最新分類(lèi)法，分屬于腸桿菌科沙門(mén)菌屬，包括腸道沙門(mén)菌菌(S. enterica，又稱(chēng)為豬霍亂沙門(mén)菌，又稱(chēng)為豬霍亂沙門(mén)菌，S. choleraesuis)和邦和邦戈?duì)柹抽T(mén)菌（戈?duì)柹抽T(mén)菌（S. bongori）兩個(gè)

35、種。前者又分為）兩個(gè)種。前者又分為6個(gè)亞種：腸個(gè)亞種：腸道沙門(mén)菌腸道亞種（道沙門(mén)菌腸道亞種（S. enterica subsp.）、腸道沙門(mén)菌薩拉）、腸道沙門(mén)菌薩拉姆亞種（姆亞種（S. enterica subsp. salamae）、腸道沙門(mén)菌亞利桑）、腸道沙門(mén)菌亞利桑那亞種（那亞種（S. enterica subsp. arizonae）、腸道沙門(mén)菌雙相亞）、腸道沙門(mén)菌雙相亞利桑那亞種（利桑那亞種（S. enterica subsp. diarizonae)、腸道沙門(mén)菌浩、腸道沙門(mén)菌浩敦亞種（敦亞種（S. enterica subsp. houtenae)和腸道沙門(mén)菌因迪卡和腸道沙門(mén)菌因迪

36、卡亞種（亞種（S. enterica subsp. indica）。目前至少有。目前至少有67種種O抗原抗原和和2300個(gè)以上的血清型。個(gè)以上的血清型。 最常見(jiàn)引起食物中毒的為最常見(jiàn)引起食物中毒的為B組中的組中的鼠傷寒沙門(mén)菌鼠傷寒沙門(mén)菌，C組組中的中的豬霍亂沙門(mén)菌豬霍亂沙門(mén)菌，D組中的組中的腸炎沙門(mén)菌腸炎沙門(mén)菌。 沙門(mén)菌對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng)，在水和土壤中能存活沙門(mén)菌對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng)，在水和土壤中能存活2-3周，周，糞便中能存活糞便中能存活1-2個(gè)月，在冰凍土壤中能越冬。不耐熱，個(gè)月，在冰凍土壤中能越冬。不耐熱，55、1小時(shí)或小時(shí)或60、10-20分鐘死亡。分鐘死亡。 導(dǎo)致沙門(mén)菌食物中毒的食品中

37、細(xì)菌數(shù)量導(dǎo)致沙門(mén)菌食物中毒的食品中細(xì)菌數(shù)量般需要般需要107-109CFUg。 對(duì)兒童、老人、體弱者，對(duì)兒童、老人、體弱者，15-20 CFug的沙門(mén)菌即可能的沙門(mén)菌即可能引起發(fā)病。引起發(fā)病。 沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒 引起中毒的食品：引起中毒的食品： 多由多由動(dòng)物食品動(dòng)物食品引起，特別是引起，特別是畜肉類(lèi)及其畜肉類(lèi)及其制品制品，其次為禽肉、蛋類(lèi)、奶類(lèi)及其制品。，其次為禽肉、蛋類(lèi)、奶類(lèi)及其制品。 沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒污染來(lái)源：污染來(lái)源： 家畜、家禽的生前感染、畜肉、禽肉的沙家畜、家禽的生前感染、畜肉、禽肉的沙門(mén)菌污染、蛋類(lèi)沙門(mén)菌的來(lái)源、奶中沙門(mén)菌的門(mén)菌污染、蛋類(lèi)沙門(mén)菌的來(lái)源、奶中沙

38、門(mén)菌的來(lái)源、熟制品中沙門(mén)菌的來(lái)源。來(lái)源、熟制品中沙門(mén)菌的來(lái)源。 全年皆可發(fā)生，但多見(jiàn)于夏、秋兩季，即全年皆可發(fā)生，但多見(jiàn)于夏、秋兩季，即5-10月。月。 沙門(mén)菌食物中毒潛伏期一般為沙門(mén)菌食物中毒潛伏期一般為12-36小時(shí)，超過(guò)小時(shí)，超過(guò)72小時(shí)者不多見(jiàn)。潛伏期較短者，病情通常較重。小時(shí)者不多見(jiàn)。潛伏期較短者，病情通常較重。 前驅(qū)癥狀有寒戰(zhàn)、頭暈、頭痛、食欲不振。主要癥前驅(qū)癥狀有寒戰(zhàn)、頭暈、頭痛、食欲不振。主要癥狀為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉與體溫狀為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉與體溫38-40或更高或更高的高熱。一般的高熱。一般3-5日內(nèi)迅速減輕。按其臨床特點(diǎn)分日內(nèi)迅速減輕。按其臨床特點(diǎn)分5種類(lèi)型，其中

39、種類(lèi)型，其中胃腸炎型胃腸炎型最為常見(jiàn)。最為常見(jiàn)。沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒 流行特征與臨床癥狀流行特征與臨床癥狀沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒胃腸炎型胃腸炎型：前驅(qū)癥狀有頭痛、頭暈、惡心、腹：前驅(qū)癥狀有頭痛、頭暈、惡心、腹痛、寒戰(zhàn)。以后出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、發(fā)熱。大便為痛、寒戰(zhàn)。以后出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、發(fā)熱。大便為黃色或黃綠色黃色或黃綠色、帶粘液帶粘液和和血血?？炜?速速 診診 斷斷沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒 增菌后可以采用增菌后可以采用ELISAELISA進(jìn)行初進(jìn)行初步篩選，有條件單位可以采用步篩選，有條件單位可以采用PCRPCR法檢測(cè)沙門(mén)菌特異基因。法檢測(cè)沙門(mén)菌特異基因。沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中

40、毒（1）德國(guó)）德國(guó)M erck公司生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基公司生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基Ram bach agar以以丙烯乙二醇丙烯乙二醇和和5-溴溴-4-氯氯-3-吲哚吲哚-D半乳糖吡喃糖苷酸半乳糖吡喃糖苷酸(X-GAL)為底物檢測(cè)沙門(mén)菌，為底物檢測(cè)沙門(mén)菌，沙門(mén)菌能水解乙二醇產(chǎn)酸，不能水解沙門(mén)菌能水解乙二醇產(chǎn)酸，不能水解X -GA L，在，在培養(yǎng)基上產(chǎn)生特殊的紅色菌落。培養(yǎng)基上產(chǎn)生特殊的紅色菌落?？炜?速速 診診 斷斷 顯顯 色色 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒（2）利用沙門(mén)菌具有）利用沙門(mén)菌具有特異性辛酸酯酶特異性辛酸酯酶的特點(diǎn)，以的特點(diǎn)，以4甲基傘形酮甲基傘形酮辛酸酯辛酸酯結(jié)合物作為底物，當(dāng)

41、有結(jié)合物作為底物，當(dāng)有沙門(mén)菌存在時(shí)，在紫外燈下菌落周?chē)尸F(xiàn)熒光。沙門(mén)菌存在時(shí)，在紫外燈下菌落周?chē)尸F(xiàn)熒光。 國(guó)內(nèi)已有采用國(guó)內(nèi)已有采用萘酚萘酚辛酸酯辛酸酯結(jié)合物作為結(jié)合物作為底物，經(jīng)沙門(mén)菌產(chǎn)生的辛酸酯酶將辛酸酯分解后，釋放底物，經(jīng)沙門(mén)菌產(chǎn)生的辛酸酯酶將辛酸酯分解后，釋放出游離的出游離的萘酚與固蘭反應(yīng)出現(xiàn)紫褐色。萘酚與固蘭反應(yīng)出現(xiàn)紫褐色。 沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌沙門(mén)菌其它細(xì)菌其它細(xì)菌粉紅色粉紅色玫瑰色玫瑰色藍(lán)色藍(lán)色透明透明 -半乳糖半乳糖葡萄糖醛酸酯葡萄糖醛酸酯 粉紅色菌落粉紅色菌落=沙門(mén)氏菌可疑存在沙門(mén)氏菌可疑存在注意：發(fā)現(xiàn)粉紅色菌落也可能是注意：發(fā)現(xiàn)粉紅色菌落也可能是其它細(xì)菌其它細(xì)

42、菌主要有：主要有： 半乳糖苷酶陰性的埃半乳糖苷酶陰性的埃希氏大腸桿菌、有些莫拉氏菌屬希氏大腸桿菌、有些莫拉氏菌屬細(xì)菌、有些是志賀氏菌屬細(xì)菌細(xì)菌、有些是志賀氏菌屬細(xì)菌進(jìn)行完整的鑒定進(jìn)行完整的鑒定(生化鑒定、然后免疫學(xué)生化鑒定、然后免疫學(xué)鑒定鑒定)無(wú)粉紅色菌落無(wú)粉紅色菌落:不需要繼續(xù)鑒定不需要繼續(xù)鑒定食品細(xì)菌學(xué)按食品細(xì)菌學(xué)按ISO 6579或法國(guó)或法國(guó)NF08-052標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程操作選擇性標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程操作選擇性增菌后接種培養(yǎng)增菌后接種培養(yǎng)臨床細(xì)菌學(xué)完全按照臨床標(biāo)本臨床細(xì)菌學(xué)完全按照臨床標(biāo)本培養(yǎng)步驟進(jìn)行選擇性增菌后直培養(yǎng)步驟進(jìn)行選擇性增菌后直接接種和培養(yǎng)接接種和培養(yǎng)新一代沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基新一代沙門(mén)氏菌顯色

43、培養(yǎng)基 SM ID 2 專(zhuān)門(mén)檢測(cè)專(zhuān)門(mén)檢測(cè)沙門(mén)氏菌包括傷寒沙門(mén)氏菌包括傷寒,副傷寒沙門(mén)氏菌，跟其他乳糖副傷寒沙門(mén)氏菌，跟其他乳糖 (+) 的菌種，更清楚的區(qū)分：的菌種，更清楚的區(qū)分：沙門(mén)氏菌落沙門(mén)氏菌落 粉紅色粉紅色 到到 洋紅色；洋紅色；其他細(xì)菌透明或淡藍(lán)。容易閱讀：透明的背景其他細(xì)菌透明或淡藍(lán)。容易閱讀：透明的背景, 18-24h培養(yǎng)培養(yǎng)后有較大的菌落后有較大的菌落 。經(jīng)過(guò)經(jīng)過(guò)60種食品樣的試驗(yàn)種食品樣的試驗(yàn) 沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒傷寒沙門(mén)菌傷寒沙門(mén)菌CHROMagar顯色培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)基 傷寒沙門(mén)菌在傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上的顯色培養(yǎng)基上的菌落特征：紫色或紫紅色菌落

44、菌落特征：紫色或紫紅色菌落沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基 (陸橋陸橋) 沙門(mén)氏菌的選擇性分離鑒別，沙門(mén)氏菌的選擇性分離鑒別，18-24h可初可初步判定結(jié)果步判定結(jié)果沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌 紅色紅色大腸桿菌大腸桿菌 黃色黃色沙門(mén)菌食物中毒沙門(mén)菌食物中毒變變 形形 桿桿 菌菌 食食 物物 中中 毒毒1.病原學(xué)病原學(xué) 變形桿菌屬隸屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變變形桿菌屬隸屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無(wú)恒變形桿菌形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無(wú)恒變形桿菌5個(gè)種。個(gè)種。引起人類(lèi)食物中毒的主要是引起人類(lèi)食物中毒的主要是

45、普通變形桿菌普通變形桿菌和和奇異變形桿菌奇異變形桿菌。變。變形桿菌在食品中能產(chǎn)生腸毒素，并且可使蛋白質(zhì)中的組氨酸脫形桿菌在食品中能產(chǎn)生腸毒素，并且可使蛋白質(zhì)中的組氨酸脫羧形成組胺，從而引起胃腸炎或過(guò)敏性反應(yīng)。羧形成組胺，從而引起胃腸炎或過(guò)敏性反應(yīng)。 2.流行病學(xué)流行病學(xué)（1）季節(jié)性：夏秋高溫季節(jié)多發(fā)。）季節(jié)性：夏秋高溫季節(jié)多發(fā)。（2）傳染源：引起中毒的食品以）傳染源：引起中毒的食品以動(dòng)物性食品動(dòng)物性食品為主，尤其以為主，尤其以水水產(chǎn)類(lèi)食品產(chǎn)類(lèi)食品更為多見(jiàn)。也見(jiàn)于涼拌萊、剩飯菜和豆制品。更為多見(jiàn)。也見(jiàn)于涼拌萊、剩飯菜和豆制品。3.臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 潛伏期一般為潛伏期一般為3-20小時(shí)，最短小時(shí)，

46、最短2小時(shí)，最長(zhǎng)小時(shí)，最長(zhǎng)30小時(shí)。主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、頭暈、小時(shí)。主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、頭暈、頭痛及發(fā)熱（體溫一般在頭痛及發(fā)熱（體溫一般在39以下以下)、乏力、陣發(fā)性、乏力、陣發(fā)性劇烈腹痛、腹瀉、水樣便，少數(shù)伴有黏液，有惡臭，劇烈腹痛、腹瀉、水樣便，少數(shù)伴有黏液，有惡臭，無(wú)膿血，每日數(shù)次至無(wú)膿血，每日數(shù)次至l0余次。病程余次。病程1-2天，也有天，也有3-4天者，預(yù)后一般良好。天者，預(yù)后一般良好。變形桿菌食物中毒變形桿菌食物中毒 葡萄球菌食物中毒，是由葡萄球菌在繁葡萄球菌食物中毒，是由葡萄球菌在繁殖過(guò)程中分泌到菌細(xì)胞外的殖過(guò)程中分泌到菌細(xì)胞外的腸毒素腸毒素引引起，故

47、僅攝入葡萄球菌并不會(huì)發(fā)生中毒。起，故僅攝入葡萄球菌并不會(huì)發(fā)生中毒。 葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素是一種可溶性蛋葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，耐熱性強(qiáng)。白質(zhì)，耐熱性強(qiáng)。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒傳播途徑傳播途徑：帶菌的食品加工人員的鼻咽部黏膜或手指帶菌的食品加工人員的鼻咽部黏膜或手指污染食物是造成食源性疾病的主要原因污染食物是造成食源性疾病的主要原因。中毒的原因。中毒的原因主要是在較高溫度下保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，如在主要是在較高溫度下保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，如在25-3025-30環(huán)環(huán)境中放置境中放置5-l0h5-l0h，產(chǎn)生足以引起中毒的大量腸毒素所，產(chǎn)生足以引起中毒的大量腸毒素所致。致。 引起中毒的食

48、品引起中毒的食品：國(guó)內(nèi)報(bào)道以：國(guó)內(nèi)報(bào)道以奶及其制品奶及其制品如奶油糕點(diǎn)如奶油糕點(diǎn)（奶油花蛋糕等）、（奶油花蛋糕等）、冰淇淋冰淇淋最為常見(jiàn)。最為常見(jiàn)。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒 引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品必須具以下條件：引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品必須具以下條件：（1）食物中污染大量）食物中污染大量產(chǎn)腸毒素產(chǎn)腸毒素的葡萄球菌的葡萄球菌（2）污染后的食品放置于適合產(chǎn)毒的溫度下）污染后的食品放置于適合產(chǎn)毒的溫度下（3）有足夠的潛伏期）有足夠的潛伏期（4）食物的成分和性質(zhì)適于細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)毒）食物的成分和性質(zhì)適于細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)毒 產(chǎn)毒條件：產(chǎn)毒條件：（1）pH 68，溫度在，溫度在20以上

49、以上（2）含水分、淀粉、蛋白質(zhì)豐富的食品）含水分、淀粉、蛋白質(zhì)豐富的食品（3）實(shí)驗(yàn)室在）實(shí)驗(yàn)室在10%CO2，半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)易產(chǎn)生腸毒素，半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)易產(chǎn)生腸毒素（4）細(xì)菌在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期毒素合成活躍）細(xì)菌在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期毒素合成活躍 流行特點(diǎn)：流行特點(diǎn)：多見(jiàn)于夏秋季節(jié)。多見(jiàn)于夏秋季節(jié)。 潛伏期：一般潛伏期：一般24小時(shí)小時(shí)，最短，最短1小時(shí)，最長(zhǎng)為小時(shí)，最長(zhǎng)為6小時(shí)。小時(shí)。 臨床癥狀：主要癥狀為臨床癥狀：主要癥狀為惡心、劇烈而頻繁嘔吐惡心、劇烈而頻繁嘔吐，吐物，吐物中常有膽汁、粘液和血，同時(shí)伴有上腹部劇烈地疼痛。中常有膽汁、粘液和血，同時(shí)伴有上腹部劇烈地疼痛。腹瀉為腹瀉為水樣便水樣便。體溫一般

50、正常。體溫一般正常。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒 （1）符合葡萄球菌食源性疾病的流行病學(xué)特點(diǎn)和臨床表）符合葡萄球菌食源性疾病的流行病學(xué)特點(diǎn)和臨床表現(xiàn)?，F(xiàn)。 （2）從可疑食品中直接檢測(cè)出有毒力的腸毒素，并確定）從可疑食品中直接檢測(cè)出有毒力的腸毒素，并確定其型別。其型別。 （3）從可疑食品、患者嘔吐物、糞便中經(jīng)培養(yǎng)分離出金）從可疑食品、患者嘔吐物、糞便中經(jīng)培養(yǎng)分離出金黃色葡萄球菌，并從分離的菌株培養(yǎng)物檢測(cè)出與食品中同一黃色葡萄球菌，并從分離的菌株培養(yǎng)物檢測(cè)出與食品中同一型別的腸毒素。型別的腸毒素。 （4）如已無(wú)可疑食品或在可疑食品、病人吐瀉物中均未）如已無(wú)可疑食品或在可疑食品、病人吐瀉物中均未

51、檢出本菌或腸毒素但符合本菌的流行病學(xué)特點(diǎn)與中毒表現(xiàn)，檢出本菌或腸毒素但符合本菌的流行病學(xué)特點(diǎn)與中毒表現(xiàn)，則按則按GBl4938食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理原則執(zhí)行。食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理原則執(zhí)行。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒 增菌：增菌：多采用傳統(tǒng)增菌肉湯，多采用傳統(tǒng)增菌肉湯，F(xiàn)DA標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn):LETHEEN肉湯肉湯 。 增菌后可以采用增菌后可以采用ELISA進(jìn)行初步篩選。進(jìn)行初步篩選。PCR法檢測(cè)金黃色葡法檢測(cè)金黃色葡萄球菌特異基因，比如耐熱核酸酶萄球菌特異基因，比如耐熱核酸酶nuc基因。基因。 顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)：BairdParker培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 梅里埃公司通過(guò)

52、在該培養(yǎng)基中加入兔血漿（凍干粉保存，避梅里埃公司通過(guò)在該培養(yǎng)基中加入兔血漿（凍干粉保存，避免使用新鮮兔血漿的麻煩），用氯化鋰代替亞碲酸鉀，可使免使用新鮮兔血漿的麻煩），用氯化鋰代替亞碲酸鉀，可使凝固酶陽(yáng)性金黃色葡萄球菌的菌落呈灰黑色，菌落周?chē)幸荒堂戈?yáng)性金黃色葡萄球菌的菌落呈灰黑色，菌落周?chē)幸徊煌腹獾沫h(huán)。不透光的環(huán)。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒 金黃色葡萄球菌在金黃色葡萄球菌在BairdParker平板上的典型菌落。平板上的典型菌落。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒Baird Parker 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 + RPF凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌 : 菌落周?chē)纬沙恋砣渲車(chē)纬?/p>

53、沉淀圈葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒Baird Parker 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 + RPF 操作操作 (表面涂布方法表面涂布方法) 於於 37C 下進(jìn)行孵育下進(jìn)行孵育 24小時(shí)小時(shí)先溶於先溶於 100C 水浴水浴，然后置於，然后置於 45C 保保溫。溫。加加 10ml 無(wú)菌水無(wú)菌水溶解溶解待凝固烘干待凝固烘干后，將后，將0.1 至至 0.4ml 的的樣本液進(jìn)行樣本液進(jìn)行涂布涂布將約將約 20ml 的瓊脂加入的瓊脂加入平皿中，配平皿中，配置平板。置平板。R1 試劑加試劑加入入R2 瓊脂中瓊脂中融化融化葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒 Baird-Parker瓊脂瓊脂+兔血漿兔血漿 (Baird P

54、arker agar+RPF)葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒金葡球菌鑒定培養(yǎng)基金葡球菌鑒定培養(yǎng)基 S. aureus ID 灰綠色菌落為金葡球菌灰綠色菌落為金葡球菌葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒法國(guó)科瑪嘉金黃色葡萄球法國(guó)科瑪嘉金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基菌顯色培養(yǎng)基（CHROMagar Staph aureus）：）：金黃色葡萄球菌：紫色；金黃色葡萄球菌：紫色；其他：藍(lán)色、無(wú)色。其他：藍(lán)色、無(wú)色。葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒蠟樣芽孢桿菌食物中毒蠟樣芽孢桿菌食物中毒 蠟樣芽胞桿菌（蠟樣芽胞桿菌（B B. .cereuscereus）為革蘭氏染）為革蘭氏染色陽(yáng)性芽孢桿菌，需氧或兼性厭氧，有鞭毛

55、，色陽(yáng)性芽孢桿菌，需氧或兼性厭氧，有鞭毛，無(wú)莢膜。該菌生長(zhǎng)無(wú)莢膜。該菌生長(zhǎng)6 6小時(shí)后即可形成芽胞，小時(shí)后即可形成芽胞，是條件致病菌，生長(zhǎng)繁殖最適溫度為是條件致病菌，生長(zhǎng)繁殖最適溫度為28-28-3535，1010以下停止繁殖。其繁殖體不耐熱，以下停止繁殖。其繁殖體不耐熱，100100經(jīng)經(jīng)2020分鐘可被殺死。分鐘可被殺死。 引起中毒的食品：引起中毒的食品種類(lèi)繁多，包括乳及乳制引起中毒的食品：引起中毒的食品種類(lèi)繁多，包括乳及乳制品、肉類(lèi)制品、蔬菜、馬鈴薯、甜點(diǎn)心、調(diào)味汁、涼拌菜、品、肉類(lèi)制品、蔬菜、馬鈴薯、甜點(diǎn)心、調(diào)味汁、涼拌菜、米粉、米飯等。在我國(guó)引起中毒的食品以米粉、米飯等。在我國(guó)引起中毒

56、的食品以米飯、米粉米飯、米粉最為常最為常見(jiàn)。見(jiàn)。蠟樣芽胞桿菌中毒的菌量范圍在蠟樣芽胞桿菌中毒的菌量范圍在106108/g食物，一般認(rèn)為食物，一般認(rèn)為食物中污染菌量大于食物中污染菌量大于105/g時(shí)，有可能發(fā)生食物中毒。時(shí)，有可能發(fā)生食物中毒。引起中毒的食品多數(shù)食前保存溫度較高和放置時(shí)間較長(zhǎng)。引起中毒的食品多數(shù)食前保存溫度較高和放置時(shí)間較長(zhǎng)。 臘樣芽孢桿菌食物中毒臘樣芽孢桿菌食物中毒中中 毒毒 特特 點(diǎn)點(diǎn) 蠟樣芽胞桿菌食物中毒的發(fā)生為大量活菌侵蠟樣芽胞桿菌食物中毒的發(fā)生為大量活菌侵入腸道所產(chǎn)生的入腸道所產(chǎn)生的腸毒素腸毒素所致。其中毒的臨床所致。其中毒的臨床表現(xiàn)因其產(chǎn)生的毒素不同而異。臨床上將其表

57、現(xiàn)因其產(chǎn)生的毒素不同而異。臨床上將其分為分為腹瀉型腹瀉型和和嘔吐型嘔吐型兩種。兩種。 臘樣芽孢桿菌食物中毒臘樣芽孢桿菌食物中毒 嘔吐型嘔吐型 中毒食物主要是米飯、米粉，以惡中毒食物主要是米飯、米粉，以惡心、嘔吐為主，潛伏期短，為心、嘔吐為主，潛伏期短，為0.5-5小時(shí)小時(shí)。此。此外，亦可見(jiàn)頭暈、四肢無(wú)力、口干等癥狀。外，亦可見(jiàn)頭暈、四肢無(wú)力、口干等癥狀。病程多為病程多為8-10小時(shí)小時(shí)，長(zhǎng)者，長(zhǎng)者1天左右，預(yù)后良好。天左右，預(yù)后良好。 腹瀉型腹瀉型 該型以腹痛、腹瀉為主，潛伏期較該型以腹痛、腹瀉為主，潛伏期較長(zhǎng)，為長(zhǎng)，為8-12小時(shí)小時(shí)。一般不發(fā)熱，可有輕度惡。一般不發(fā)熱，可有輕度惡心，但極少

58、有嘔吐。病程心，但極少有嘔吐。病程16-36小時(shí)小時(shí)，預(yù)后良，預(yù)后良好。好。臘樣芽孢桿菌食物中毒臘樣芽孢桿菌食物中毒 中毒食品中蠟樣芽胞桿菌菌數(shù)測(cè)定：從中毒食品中蠟樣芽胞桿菌菌數(shù)測(cè)定：從中毒食品取樣，經(jīng)稀釋后接種選擇性培中毒食品取樣，經(jīng)稀釋后接種選擇性培養(yǎng)基，其菌落形態(tài)、染色鏡檢、生化特養(yǎng)基，其菌落形態(tài)、染色鏡檢、生化特征等與蠟樣芽胞桿菌相符，菌落計(jì)數(shù)征等與蠟樣芽胞桿菌相符，菌落計(jì)數(shù)105cfu/g，有診斷意義。，有診斷意義。臘樣芽孢桿菌食物中毒臘樣芽孢桿菌食物中毒 患者嘔吐物或糞便中蠟樣芽胞桿菌檢驗(yàn)：患者嘔吐物或糞便中蠟樣芽胞桿菌檢驗(yàn)：所檢出菌株與中毒食品中檢出的菌株，其所檢出菌株與中毒食品

59、中檢出的菌株，其生化性狀與血清型須相同。生化性狀與血清型須相同。 根據(jù)流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床表現(xiàn)及上述實(shí)驗(yàn)根據(jù)流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床表現(xiàn)及上述實(shí)驗(yàn)室診斷可以做出結(jié)論。室診斷可以做出結(jié)論。臘樣芽孢桿菌食物中毒臘樣芽孢桿菌食物中毒快速檢測(cè)：快速檢測(cè)：PCR檢測(cè)檢測(cè)針對(duì)臘樣芽孢桿菌溶血素針對(duì)臘樣芽孢桿菌溶血素hblA基因序列設(shè)計(jì)引基因序列設(shè)計(jì)引物檢測(cè)，該法最低檢出限為物檢測(cè)，該法最低檢出限為9CFU/ml。臘樣芽孢桿菌食物中毒臘樣芽孢桿菌食物中毒致瀉性大腸桿菌食物中毒致瀉性大腸桿菌食物中毒 1.病原學(xué)：病原學(xué)： 致瀉性大腸埃希菌分類(lèi)于腸桿菌科，歸屬于埃希菌屬，致瀉性大腸埃希菌分類(lèi)于腸桿菌科，歸屬于埃希菌屬，

60、包括腸致病性大腸埃希菌（包括腸致病性大腸埃希菌（Enteropathogenic E. coli, EPEC）、腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌（）、腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌（Enterotoxigenic E. coli, ETEC）、腸出血性大腸埃希菌（）、腸出血性大腸埃希菌（Enterohemorrhagic E. coli, EHEC）、腸集聚性黏附大腸埃希菌）、腸集聚性黏附大腸埃希菌（Enteroccggregative E. coli, EAggEC）和產(chǎn)志賀樣毒）和產(chǎn)志賀樣毒素且具有侵襲力的大腸埃希菌（素且具有侵襲力的大腸埃希菌（ESIEC）5種，共有種，共有30多個(gè)多個(gè)血清型。血清型。 EHEC自