植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(1)8頁(yè)

1、 實(shí)驗(yàn)一 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖屩参锝M織經(jīng)過(guò)脫分化作用，形成愈傷組織，經(jīng)過(guò)再分化作用，愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織和器官，最終形成完整的植株。二 實(shí)驗(yàn)原理植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以至單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用無(wú)菌操作使其在人工條件下，能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，甚至分化發(fā)育成一完整植株的過(guò)程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來(lái)已經(jīng)分化停止生長(zhǎng)的細(xì)胞，又能重新分裂，形成沒(méi)有組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)，即愈傷組織。這一過(guò)程稱為“脫分化作用”，已經(jīng)“脫分化”的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸導(dǎo)系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過(guò)程稱“再分化作用”。植物激素在此過(guò)程中起著重要的作用，吲哚乙酸（ IAA ）和

2、6 芐基氨基腺嘌呤（ 6 BA ）的比例，決定了根和芽的分化。 三 實(shí)驗(yàn)器材（一）試劑 乙醇、IAA 或 2 ， 4 D 、HgCl 2 （或次氯酸鈉）、6- 芐基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） MS 培養(yǎng)基（二）儀器設(shè)備培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（ 100mL ），燒杯，量筒，培養(yǎng)皿，超凈工作臺(tái)，分析天平，長(zhǎng)鑷子，剪刀，橡皮筋等三 實(shí)驗(yàn)步驟1. 配制培養(yǎng)基（ 1 ）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基： MS 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/L ， 2,4 D 含量為 2 mg/L ，瓊脂 10 g/L ）。 （ 2 ）試驗(yàn)培養(yǎng)基：在 MS 培養(yǎng)基中按表 33 1 加入 IAA 和 6BA 。 吲

3、哚乙酸先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。 2. 培養(yǎng)基滅菌 將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至 pH 5.8 ，趁熱分裝于 100 mL 三角燒瓶中，每瓶約 20 mL 。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，用兩層稱量紙包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高壓滅菌鍋中 121 （ 1 kg/cm 2 ）下滅菌 20 min 。取出三角燒瓶放在臺(tái)子上，冷卻后備用。接種操作所需的一切用具（如長(zhǎng)鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時(shí)滅菌。3. 誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織 （ 1 ）取健壯的玫瑰、菊花莖數(shù)段，每段約 5

4、 cm 長(zhǎng)，于燒杯中用 0.1% 氯化汞（升汞）浸泡 20 min ，取出用無(wú)菌水洗 3 4 次，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在接種箱中按無(wú)菌操作要求剝?nèi)ネ馄ぃń臃N箱事先用紫外燈滅菌 30 min ），用解剖刀切成 5 mm 厚的圓片（棄去開(kāi)始一片和最后一片），用長(zhǎng)鑷子將它接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，注意圓片的切口朝向培養(yǎng)基，每瓶接種 4 片，接種后扎好瓶口。 （ 2 ）將已接入植物組織（外植體）的三角燒瓶，培養(yǎng)在 25 溫室中，每星期檢查 l 2 次，剔除材料已被雜菌污染的三角燒瓶， 3 4 周后產(chǎn)生愈傷組織。（ 3 ）選取愈傷組織生長(zhǎng)良好的三角燒瓶，用解剖刀將愈傷組織切下，轉(zhuǎn)移到含有不同激素的試驗(yàn)培養(yǎng)基中（

5、也可以連同原來(lái)的外植體一起轉(zhuǎn)移），每瓶放 1 2 塊，仍培養(yǎng)在 25 溫室中，每周 1 2 次觀察不同處理的三角燒瓶中，愈傷組織分化情況，直至長(zhǎng)出根和芽。長(zhǎng)成的幼小植株即為“試管苗”，可移栽于花盆中。四 實(shí)驗(yàn)結(jié)果植物分生組織培養(yǎng)室指對(duì)植物體的分生組織進(jìn)行離體培養(yǎng)。 因?yàn)闀r(shí)間有限及實(shí)驗(yàn)嚴(yán)密性等問(wèn)題，大部分都失敗了，但是仍然有小部分分化發(fā)育了出來(lái)。已經(jīng)證明了植物組織能夠經(jīng)過(guò)脫分化作用，形成愈傷組織，經(jīng)過(guò)再分化作用，愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織和器官，最終形成完整的植株。實(shí)驗(yàn) 二 三 植物葉片與莖尖培養(yǎng)一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康碾x體葉培養(yǎng)是指包括幼葉片成熟葉片葉柄子葉葉鞘夜間組織葉原基等葉組織作為外植體的無(wú)

6、菌培養(yǎng)。由于葉片是植物進(jìn)行光合作用的重要器官，又是某些植物的繁殖器官，因此離體培養(yǎng)在植物器官培養(yǎng)中占有重要地位。 二 實(shí)驗(yàn)原理 很多植物的葉具有強(qiáng)大的再生能力能從葉片產(chǎn)生不定牙，在離體培養(yǎng)基中，水稻小麥油菜番茄楊樹(shù)菊花百合獼猴桃等百余種作物的葉組織已經(jīng)再生并形成完整植株。離體葉培養(yǎng)是指包括幼葉片成熟葉片葉柄子葉葉鞘夜間組織葉原基等葉組織作為外植體的無(wú)菌培養(yǎng)。三 實(shí)驗(yàn)材料要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)，個(gè)體發(fā)育的早期幼嫩葉片較成熟葉片分化能力較高。例如，煙草成株期葉組織分化和再分化需要的時(shí)間較長(zhǎng)，而且葉片膨大體積較大，多在刀口處形成大量的愈傷組織和分生細(xì)胞團(tuán)。四 實(shí)驗(yàn)步驟1 外植體的選取及預(yù)處理（1） 外植體的選取選取生長(zhǎng)健壯 已發(fā)芽 長(zhǎng)勢(shì)較好 無(wú)病害的生姜根莖作為外植體。（2） 材料的預(yù)處理取帶牙的枝條或鱗莖球莖，洗衣粉適量沖洗，然后用清潔剪刀剪取帶牙部分，頂芽和腋芽 大芽和小芽分開(kāi)，繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘，清洗時(shí)旭不停的晃動(dòng)。再用自來(lái)水沖洗干凈，置空培養(yǎng)瓶備用。2 超干凈工作臺(tái)無(wú)菌操作準(zhǔn)備3 外植體消毒4 材料的處理5 接入培養(yǎng)基培養(yǎng)基瓶放入工作臺(tái)中，將剝奪的材料分別用消毒的鑷子放入培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶蓋，置培養(yǎng)藍(lán)內(nèi)，寫(xiě)上培養(yǎng)時(shí)間操作人及培養(yǎng)品