整和素α5、β1在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義

1、整和素5、1在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義 作者:賈京綿，趙瑞力，安英杰，趙偉，趙晶【摘要】 目的 探討整和素5、1在鼻息肉組織中的表達(dá)及其與嗜酸粒細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。方法 采用流式細(xì)胞法檢測(cè)糖皮質(zhì)激素治療前后的鼻息肉組織（13例）中整和素5、1含量及凋亡的嗜酸粒細(xì)胞，并與7例健康人下鼻甲黏膜檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果 鼻息肉組織中有大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，明顯高于下鼻甲黏膜組；整和素5、1主要表達(dá)在嗜酸粒細(xì)胞，其次在血管內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)；鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞表面均有整和素5、1表達(dá)，而下鼻甲黏膜組只有2例有整和素5、1表達(dá)，兩組標(biāo)本嗜酸粒細(xì)胞中整和素5、1的表達(dá)差異有顯著性（P<0.05）

2、；激素治療后鼻息肉中整和素5、1的表達(dá)有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)顯著性（P>0.05）。結(jié)論 整和素5、1在鼻息肉中高表達(dá)，但對(duì)嗜酸粒細(xì)胞凋亡的影響尚不能得出有意義的結(jié)論。 【關(guān)鍵詞】 整和素5、1；鼻息肉；嗜酸粒細(xì)胞；凋亡 鼻息肉是鼻部的常見(jiàn)病，發(fā)病率1%4%1，具體的發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。嗜酸粒細(xì)胞增多是其主要的病理特征，也是發(fā)病的關(guān)鍵。組織對(duì)嗜酸粒細(xì)胞的清除是依靠自身的凋亡作用來(lái)完成的。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)糖皮質(zhì)激素治療前后鼻息肉組織中整和素2 / 125、1表達(dá)情況，并分析其在鼻息肉嗜酸粒細(xì)胞聚集及凋亡過(guò)程中的作用。 1 資料與方法

3、1.1 一般資料 選取2003年9月2005年12月依據(jù)?？跇?biāo)準(zhǔn)2診斷為慢性鼻竇炎伴鼻息肉患者13例，均為型13期。男8例，女5例，年齡1763歲，平均46.7歲。同時(shí)期住院行鼻中隔黏膜下切除術(shù)患者下鼻甲黏膜標(biāo)本7例。男5例，女2例，年齡2139歲，平均29.7歲。 1.2 標(biāo)本收集 所有患者經(jīng)變應(yīng)原試驗(yàn)確定無(wú)變應(yīng)性鼻炎病史，就診前至少1個(gè)月未用過(guò)激素及抗組胺藥物治療。鼻息肉患者一經(jīng)確診，咬取小塊息肉組織備用，然后進(jìn)行激素治療：丙酸氟替卡松噴鼻200g/噴，2噴/次，1次/d，連續(xù)4周。4周后給予鼻息肉摘除手術(shù)，留取息肉組織標(biāo)本備用。下鼻甲黏膜在患者手術(shù)時(shí)取得。所有標(biāo)本均分2份。 1.3 主要

4、試劑和儀器 整和素5、1鼠抗人單克隆抗體購(gòu)自博士德公司，蘇木精-伊紅（HE）染色劑、離心機(jī)（國(guó)產(chǎn)LDZ5-2型）、流式細(xì)胞儀（美國(guó)庫(kù)爾特公司FAScan-420型產(chǎn)品）及其配套軟件均由河北醫(yī)大四院腫瘤研究所提供。 1.4 檢測(cè)方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，按常規(guī)制成石蠟塊保存?zhèn)溆?。檢測(cè)時(shí)一組蠟塊制成5m厚的石蠟切片，常規(guī)HE染色，200倍光鏡下記數(shù)炎癥細(xì)胞高分區(qū)嗜酸粒細(xì)胞的數(shù)量。另一組標(biāo)本常規(guī)脫蠟至水后，取5g組織用眼科剪刀在260目尼龍網(wǎng)上制成單細(xì)胞懸液，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗1次，離心1500r/min， 5min，棄上清液，重復(fù)上述沖洗、離心步驟，復(fù)制體積為0.2ml含1&#

5、215;105單細(xì)胞懸液，分2管，一管為PE標(biāo)記鼠抗人5、1單克隆抗體，另一管為IgG PE陰性對(duì)照抗體。每管放0.1ml單細(xì)胞懸液充分混勻后室溫暗處?kù)o置15min，每管加20ml PBS，上機(jī)檢測(cè)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)使用激發(fā)波488nm，橫軸為綠熒光，縱軸為90°側(cè)向散射光，記數(shù)5000個(gè)，在直方圖上，以PE標(biāo)記IgG對(duì)照單抗調(diào)整并確定電壓及放大倍數(shù)。 凋亡檢測(cè)采用APO 2.7標(biāo)記法取1×106個(gè)細(xì)胞，加入digitonin（sigma），冰浴20min，用冷PBSF沖洗1遍，加20ml APO2.7-PE，震蕩、混勻，室溫避光15min，用PBSF沖洗1遍，棄上清液，重

6、懸，避光至上機(jī)檢測(cè)。 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用統(tǒng)計(jì)軟件SAS 6.0進(jìn)行分析，用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2 結(jié)果 13例激素治療前鼻息肉標(biāo)本中均有大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，下鼻甲黏膜中雖有嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，但數(shù)量明顯少于鼻息肉組織；激素治療后的鼻息肉標(biāo)本中嗜酸粒細(xì)胞明顯減少，但仍高于下鼻甲黏膜。整和素5、1主要在嗜酸粒細(xì)胞中表達(dá)，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中亦可見(jiàn)整和素5、1表達(dá)；在鼻息肉組織中的表達(dá)明顯高于下鼻甲黏膜，兩者差異有顯著性（P<0.05）；在糖皮質(zhì)激素治療后的鼻息肉組織中整和素5、1的表達(dá)略較治療前的鼻息肉組織中減少，但兩者差異無(wú)顯著性（P>0.05）。見(jiàn)表1。表

7、1 整和素5、1在鼻息肉中的表達(dá)情況 （x±s，%） 本研究發(fā)現(xiàn)，不論激素治療與否，均未見(jiàn)凋亡的嗜酸粒細(xì)胞。 3 討論 鼻息肉是以黏膜炎性病程進(jìn)展及纖維滲出為主，以大量的炎細(xì)胞尤其是嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)為病理特點(diǎn)。本研究結(jié)果證實(shí)鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞含量大大高于下鼻甲黏膜，顯示嗜酸粒細(xì)胞聚集在鼻息肉的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。這與以往的研究結(jié)果一致。嗜酸粒細(xì)胞從外周血跨過(guò)血管壁并定向聚集到鼻黏膜局部，這一過(guò)程需要借助包括整和素、選擇素等多種黏附分子來(lái)介導(dǎo)35。白細(xì)胞從血液進(jìn)入組織的前提是白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附，這一過(guò)程包括白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)選擇素、啟動(dòng)黏附過(guò)程，使白細(xì)胞流動(dòng)減慢并沿

8、血管壁滾動(dòng)；血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子，活化以整和素為代表的黏附分子6；整和素介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞緊密黏附，白細(xì)胞穿越內(nèi)皮細(xì)胞移行進(jìn)入組織。但某種特征性黏附分子表達(dá)失控則引起異常的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致疾病發(fā)生。 大量研究證實(shí)糖皮質(zhì)激素可以通過(guò)抑制多種細(xì)胞因子的表達(dá)來(lái)減少嗜酸粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。張羅等7報(bào)道布地奈德治療可減輕鼻息肉組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，提示糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物可能使鼻息肉組織中細(xì)胞因子IL-5的表達(dá)水平下降。機(jī)體正常狀態(tài)下，整和素5、1呈低表達(dá)，當(dāng)病變局部的細(xì)胞因子如IL-5等釋放時(shí)，整和素5、1等表達(dá)量上調(diào)，使內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)嗜酸粒細(xì)胞的黏附作用增強(qiáng)，進(jìn)而選擇性地聚集于鼻黏膜。本研究中丙酸氟替卡松治療

9、4周鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞的浸潤(rùn)程度明顯減輕，同時(shí)鼻息肉組織中整和素5、1陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量較未經(jīng)治療的鼻息肉組織有下降趨勢(shì)，但結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？赡苁怯捎冢海?）標(biāo)本不是新鮮組織；（2）藥物本身的作用強(qiáng)度、劑量、作用方式和療程等因素的作用，使糖皮質(zhì)激素對(duì)整和素5、1在鼻息肉組織中表達(dá)的影響顯得不明顯。 本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鼻息肉與正常下鼻甲黏膜中整和素5、1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)鼻息肉組織中的整和素5、1的表達(dá)明顯高于下鼻甲黏膜（P<0.05），提示整和素5、1在鼻息肉形成過(guò)程中起著一定作用。整和素5、1主要在嗜酸粒細(xì)胞中表達(dá)，整和素5、1的高表達(dá)與嗜酸粒細(xì)胞的聚集密切相關(guān)，提示可能在嗜

10、酸粒細(xì)胞黏附于基底膜過(guò)程中起促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)證明整和素5、1可選擇性地介導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附穿內(nèi)皮遷移，繼而促進(jìn)嗜酸粒細(xì)胞在鼻息肉組織中的浸潤(rùn)8。 本研究采用流式細(xì)胞法檢測(cè)鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞的凋亡，不論激素治療與否，均未發(fā)現(xiàn)凋亡的嗜酸粒細(xì)胞，這與張羅等10關(guān)于糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)體內(nèi)鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞凋亡的研究結(jié)果相一致。但張羅等關(guān)于糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)體外鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞凋亡的研究結(jié)果得出與此相反的結(jié)果，而且Davidsson11最近的研究顯示，糖皮質(zhì)激素藥物噴鼻治療后鼻息肉中可檢測(cè)到凋亡嗜酸粒細(xì)胞，肯定了激素類(lèi)藥物在體內(nèi)通過(guò)誘導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞的凋亡，促使炎性反應(yīng)消散的作用。 鼻

11、腔應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物是目前臨床治療鼻息肉的重要輔助手段之一，相關(guān)研究從不同側(cè)面闡述了激素作用的途徑和機(jī)制。本研究關(guān)于嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)的結(jié)果與以往的研究相符，但激素誘導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞凋亡的結(jié)果與以往的結(jié)果有不盡相同之處，有待進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Bachert C，Gevaert P，Holtappels G，et al.Nasal polyposis：from cytokines to growth.Am J Rhinol，2000，14：279-290. 2 中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉科分會(huì)，中華耳鼻咽喉科雜志編委會(huì).慢性鼻竇炎鼻息肉臨床分型分期及內(nèi)窺鏡手術(shù)療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn).中華耳鼻咽喉科雜志，19

12、98，33：134-135. 3 李華斌，許庚，李源，等.P-選擇素在鼻息肉中的表達(dá)和機(jī)制.中華耳鼻咽喉科志，2002，37：356-359. 4 Sneller MC，F(xiàn)auci AS.Pathogenesis of vasculitis syndromes.Adv Rheumatol，1997，81：221-242. 5 Katz AM，Rosenthal D，Sauder DN，et al.Cell adhesion molecules structure.function，and implication in a variety of cutaneous and other patho

13、logic condition.Int J Dermatol，1991，30：153-160. 6 Petruson B，Hansson HA，Petruson K.Insukin growth factor I is a possible pathogenic mechanism in nasal polyps.Acta Otolaryngol，1988，106：156-160. 7 張羅，韓德民，張勇，等.噴鼻激素布地奈德對(duì)鼻息肉組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的影響.耳鼻咽喉-頭頸外科，2000，7：103-108. 8 Coste A，Brugel L，Mastre B.Related articl

14、es inflammatory cells as well as epithelial cells in nasal polyps express vascular endothelial growth factor.Eur Respir J，2000，15：367-372. 9 Hughe J，Lin Y，Van Damme J，et al.Human glomerular mesangial cell phagocytosis of apoptotic neutrophils：mediation by a novel CD36-independent vitronectin/thrombospond inrecognition mechanism that is uncoupled from chemokine secretion.J Immunol，1997，158：