血管增生疾病PPT學習教案

1、會計學1 以血管增生為靶點正成為治療惡性腫瘤和其他血 管增生性疾病的研究熱點 血管生成是一個復雜的過程，包括選擇性降解血 管基膜和周圍的細胞外基質(zhì)、內(nèi)皮細胞增殖和遷 移、最后形成毛細血管芽。 第1頁/共65頁 二、血管增生性疾病腫瘤 血管增生與腫瘤生長 實體性腫瘤的生長依賴于血管增生新生血管長入前呈線性增長（血管前期或浸潤前期） 新生血管長入腫瘤即呈指數(shù)生長（腫瘤血管期） 第2頁/共65頁 新生血管長入不僅提供腫瘤生長需要的營養(yǎng)物質(zhì)和 氧氣以及帶走代謝廢物，還為腫瘤細胞提供生長因 子如FGF-1和FGF-2等機械性阻斷或應用血管增生抑制劑剝奪腫瘤的血供 顯著抑制甚至完全阻止腫瘤的生長 第3頁/

2、共65頁血管增生與腫瘤轉(zhuǎn)移 血管生成不僅是腫瘤生長所必需，而且還是腫瘤細 胞發(fā)生轉(zhuǎn)移所需要新生毛細血管的內(nèi)皮細胞能分泌膠原酶和組織纖溶 酶原激活物，促進基質(zhì)降解，便于腫瘤細胞脫落進 入血管和向鄰近基質(zhì)擴散血管前期，循環(huán)中極少有腫瘤細胞，但在腫瘤血管 化后，腫瘤細胞才持續(xù)出現(xiàn)在循環(huán)中第4頁/共65頁 新生血管性眼病新生血管性眼病 眼表新生血管性病變眼表新生血管性病變 全球全球10001000萬，中國萬，中國100100萬萬 糖尿病性視網(wǎng)膜病變糖尿病性視網(wǎng)膜病變 美國有糖尿病患者近兩千萬人，糖尿病史超過十美國有糖尿病患者近兩千萬人，糖尿病史超過十 年者約年者約50%50%并發(fā)視網(wǎng)膜病并發(fā)視網(wǎng)膜病

3、新生血管性眼病已成為西方國家致盲的首位因素新生血管性眼病已成為西方國家致盲的首位因素第5頁/共65頁 糖尿病性視網(wǎng)膜病變糖尿病性視網(wǎng)膜病變 第6頁/共65頁角膜新生血管角膜新生血管 正常角膜無血管，病理狀態(tài)下，毛細血管會從角膜正常角膜無血管，病理狀態(tài)下，毛細血管會從角膜 緣血管網(wǎng)侵入角膜，引起角膜新生血管緣血管網(wǎng)侵入角膜，引起角膜新生血管 原因：佩戴角膜接觸鏡、眼外傷和既往手術(shù)史、感原因：佩戴角膜接觸鏡、眼外傷和既往手術(shù)史、感 染性和免疫性眼病、堿燒傷等染性和免疫性眼病、堿燒傷等 新生血管對感染的消除、創(chuàng)傷的愈合、抑制免疫反新生血管對感染的消除、創(chuàng)傷的愈合、抑制免疫反 應介導的角膜溶解等有一定

4、作用，但結(jié)構(gòu)脆弱，易應介導的角膜溶解等有一定作用，但結(jié)構(gòu)脆弱，易 滲透，常由于出血滲出及繼發(fā)的纖維化等導致失明滲透，常由于出血滲出及繼發(fā)的纖維化等導致失明 第7頁/共65頁虹膜新生血管 虹膜新生血管并非虹膜的原發(fā)病，它通常繼發(fā)于許虹膜新生血管并非虹膜的原發(fā)病，它通常繼發(fā)于許 多眼其他部位的疾病和全身性疾病多眼其他部位的疾病和全身性疾病 主要的病因有視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞和糖尿病主要的病因有視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞和糖尿病 導致失明和眼球摘除的常見原因?qū)е率骱脱矍蛘某Ｒ娫?在美國，每年約有在美國，每年約有12%-15%12%-15%的眼球摘除病例是由于的眼球摘除病例是由于 虹膜新生血管引起的失明和

5、疼痛所致虹膜新生血管引起的失明和疼痛所致 第8頁/共65頁 第二節(jié) 血管增生的分子機制一、新生血管形成的平衡假說第9頁/共65頁根據(jù)這一理論，抑制新生血管的策略有：根據(jù)這一理論，抑制新生血管的策略有： 拮抗血管生成刺激因子拮抗血管生成刺激因子 應用血管生成抑制因子應用血管生成抑制因子 以糾正病理性平衡失調(diào)以糾正病理性平衡失調(diào)第10頁/共65頁拮抗血管生成刺激因子拮抗血管生成刺激因子拮抗血管增生刺激因子主要圍繞對拮抗血管增生刺激因子主要圍繞對VEGF的阻斷的阻斷中和中和VEGF的單克隆抗體已進入臨床的單克隆抗體已進入臨床II/III期試驗期試驗 獒合獒合VEGF受體受體2的單克隆抗體進入臨床的單

6、克隆抗體進入臨床I期試驗期試驗VEGF抗體、抗體、VEGF受體的螯合蛋白及反義寡核苷酸受體的螯合蛋白及反義寡核苷酸 顯著抑制視網(wǎng)膜和虹膜血管增生顯著抑制視網(wǎng)膜和虹膜血管增生存在問題：只阻斷存在問題：只阻斷VEGF的作用僅能部分抑制腫瘤的作用僅能部分抑制腫瘤 和血管增生性眼病的血管新生；阻斷和血管增生性眼病的血管新生；阻斷VEGF的正常的正常 生理作用生理作用 第11頁/共65頁應用血管生成抑制因子應用血管生成抑制因子目前國外有目前國外有300多種抑制血管增生的藥物處于臨床多種抑制血管增生的藥物處于臨床試驗的不同階段，試驗的不同階段，這類藥物大致可以分為這類藥物大致可以分為5大類：大類：（1）抑

7、制基底膜降解的藥物；）抑制基底膜降解的藥物；（2）直接抑制內(nèi)皮細胞的藥物；）直接抑制內(nèi)皮細胞的藥物；（3）抑制血管生長因子活化的藥物；）抑制血管生長因子活化的藥物；（4）抑制內(nèi)皮細胞特異性整合素）抑制內(nèi)皮細胞特異性整合素/生存信號的生存信號的 藥物；藥物；（5）其他機理不明但有抗血管增生作用的藥物）其他機理不明但有抗血管增生作用的藥物 第12頁/共65頁作用于血管內(nèi)皮細胞，副作用小，不會產(chǎn)生抗藥性作用于血管內(nèi)皮細胞，副作用小，不會產(chǎn)生抗藥性僅作用于增殖的血管內(nèi)皮細胞，抑制新生血管，對僅作用于增殖的血管內(nèi)皮細胞，抑制新生血管，對 已有正常血管無影響已有正常血管無影響AngiostatinAngi

8、ostatin、EndostatinEndostatin成功用于腫瘤生長抑制成功用于腫瘤生長抑制 的實驗研究，的實驗研究，James Watson 預言人類將在兩年內(nèi)治愈癌癥預言人類將在兩年內(nèi)治愈癌癥 第13頁/共65頁 Endostatin作用受到質(zhì)疑：作用受到質(zhì)疑：兩個獨立的課題組將兩個獨立的課題組將Endostatin基因?qū)胄∈篌w內(nèi)，基因?qū)胄∈篌w內(nèi)， 在體內(nèi)得到了高表達，但高表達的在體內(nèi)得到了高表達，但高表達的Endostatin既未既未 能阻斷血管增生也未能抑制腫瘤生長能阻斷血管增生也未能抑制腫瘤生長在美國已進行的不到在美國已進行的不到200例病人中至今無一例治愈或例病人中至今無一

9、例治愈或 效果顯著的報告效果顯著的報告 ，臨床試驗結(jié)果不理想，臨床試驗結(jié)果不理想美國美國FDA取消了擴大取消了擴大Endostatin臨床試驗例數(shù)的計劃臨床試驗例數(shù)的計劃 2002年年3月月Science 發(fā)表評論發(fā)表評論“setbacks for endostatin”， 認為認為Endostatin的作用仍具有不確定性，尚需更多的的作用仍具有不確定性，尚需更多的 研究來明確研究來明確Endostatin自身及其作用自身及其作用 機制機制第14頁/共65頁 現(xiàn)有現(xiàn)有存在問題：存在問題：分子量大，性質(zhì)不穩(wěn)定；原核表達體系多為無活性分子量大，性質(zhì)不穩(wěn)定；原核表達體系多為無活性、 不溶性蛋白沉淀不

10、溶性蛋白沉淀基因治療較直接應用活性多肽的途徑效果差基因治療較直接應用活性多肽的途徑效果差 分子機制不明確：結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系尚需深入研究分子機制不明確：結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系尚需深入研究； 特異性受體尚未分離出來特異性受體尚未分離出來 ；胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路不清；胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路不清第15頁/共65頁二、血管新生刺激因子血管新生刺激因子包括表皮生長因子（EGF），堿 性成纖維生長因子（bFGF），轉(zhuǎn)化生長因子（TGF），血小板源生長因子（PDGF），胰島素樣生 長因子（IGF）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等 VEGF作為最強的內(nèi)皮細胞特異性刺激因子，在多種 血管增生性眼病中起核心作用以VEGF作為刺激因

11、子的代表，介紹其在血管生成中 的作用和分子機制 第16頁/共65頁1. VEGF結(jié)構(gòu)特征VEGF在染色體上定位于6p，為單一基因，長度為 14kb，含8個外顯子和7個內(nèi)含子VEGF通過兩對鏈間二硫鍵形成反平行同型二聚體 轉(zhuǎn)錄時mRNA可剪接成5種異構(gòu)體，分別為VEGF121、 VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206異構(gòu)體之間功能上的差異表現(xiàn)為它們與細胞表面和 細胞外基質(zhì)中肝素結(jié)合活性不同第17頁/共65頁VEGF165具有肝素結(jié)合活性，約50%以可溶性形式分 泌至細胞外，其余的部分和細胞膜或基底膜上含有 肝素或硫酸乙酰肝素的蛋白多糖緊密結(jié)合 VEGF165這種可溶與不溶

12、的形式似乎更符合機體對 血管形式應答調(diào)節(jié)機制，當機體需要時，即以較 大限度的可溶性形式存在；一旦血管形成應答 過度，又以不溶形式結(jié)合到基膜上，減少其危害； VEGF165體內(nèi)表達豐度最高，也是體外研究中主要 的生物學活性形式第18頁/共65頁VEGF121為可溶性分泌蛋白，不與肝素結(jié)合，易自由 擴散 VEGF189和VEGF206活性相同，與肝素結(jié)合活性很高， 幾乎完全與細胞和細胞外基質(zhì)結(jié)合，在細胞外液 中測不到溶解游離形式雖然5種異構(gòu)體均能誘導體內(nèi)的血管生成，但不同 情況下每種異構(gòu)體發(fā)揮不同的優(yōu)勢，何種類型的細 胞產(chǎn)生何種VEGF異構(gòu)體尚待研究第19頁/共65頁2.VEGF受體結(jié)構(gòu)特征 VE

13、GF受體主要有兩種：VEGF受體1（fms-like tyrosine kinase, Flt-1）和VEGF受體2（fetal liver kinase 1/kinase insert domain- containing receptor，F(xiàn)lk-1/KDR）表達基本局限于血管內(nèi)皮細胞上，都為穿膜蛋白， 含有7個細胞外免疫球蛋白樣功能區(qū)，一個跨膜區(qū) 和一個細胞內(nèi)酪氨酸激酶功能區(qū)VEGF與其受體結(jié)合，通過VEGFRs二聚化，受體酪氨 酸激酶激活，促使底物磷酸化而產(chǎn)生化學趨化性、 促進細胞有絲分裂、肌動蛋白重組、促進內(nèi)皮細胞 增殖、提高血管通透性、改變細胞外基質(zhì)的作用第20頁/共65頁VEGF

14、與受體的結(jié)合力與受體是否是聚合形式密切相 關(guān)，聚合是強大親和力產(chǎn)生的重要因素KDR是VEGF發(fā)揮主要功能的受體。VEGF與其受體結(jié) 合的能力依賴于細胞表面肝素或肝素樣分子的存在KDR在與VEGF的親和力、結(jié)合VEGF后所引起的受體 磷酸化作用、結(jié)合后所引起的細胞反應、與肝素的 結(jié)合力等許多方面作用都強于F1t-1 第21頁/共65頁3.低氧對VEGF表達的影響及低氧誘導因子1（HIF-1） 的調(diào)控作用低氧主要通過活化VEGF基因的轉(zhuǎn)錄和增加VEGF mRNA穩(wěn)定性，上調(diào)VEGF基因表達從而促進血管新生 低氧或缺血條件下，HIF-1能增加一些基因如紅細 胞生成素(EPO)和VEGF基因的轉(zhuǎn)錄，增

15、加氧輸送能 力；葡萄糖轉(zhuǎn)運體和糖酵解酶基因的轉(zhuǎn)錄；胰島素 生長因子基因的轉(zhuǎn)錄，促進細胞的生存 HIF-1是由和亞單位組成的異源二聚體，其中 HIF-1是專一調(diào)節(jié)O2的HIF-1亞單位，決定了HIF-1 的活性 第22頁/共65頁調(diào)控VEGF表達的信號通路第23頁/共65頁第24頁/共65頁4. VEGF在細胞內(nèi)信號傳導通路第25頁/共65頁第26頁/共65頁5. VEGF及其受體在血管新生中的作用和機制通過增強血管的滲透性,引起血漿蛋白(主要是纖維 蛋白原)的外滲,為腫瘤細胞的生長和新生毛細血管 網(wǎng)的建立提供了最佳的基質(zhì)與受體結(jié)合,發(fā)揮其特異性的內(nèi)皮細胞分裂原的活 性，誘導血管內(nèi)皮細胞的增殖V

16、EGF提高血漿活化因子和尿激酶類纖維蛋白原活化 因子表達，促進蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶和組織因 子的活化，具有促進血管構(gòu)建作用,誘導血管形成第27頁/共65頁腫瘤細胞分泌的VEGF以旁分泌的形式作用于血管內(nèi) 皮上的特異受體,誘導血管新生促進腫瘤的生長和 轉(zhuǎn)移VEGF可能通過自分泌促進腫瘤細胞自身的生長：某 些腫瘤細胞自身確有一定量的VEGF表達；在Kaposi 肉瘤細胞中檢測到高水平的flt-1和KDR；抑制VEGF 的表達能顯著抑制瘤細胞的生長 第28頁/共65頁三、血管新生抑制因子內(nèi)源性血管生成抑制因子：蛋白質(zhì)家族中的一些成員 絲氨酸蛋白酶抑制劑家族（serine proteinase in

17、hibitor，serpin super family）中的PEDF， KBP，antithrombin，maspin等，以PEDF為例介紹 該類抑制劑的特點蛋白質(zhì)大分子前體的水解產(chǎn)物 angiostatin，K5，endostatin，tumstatin等 以K5為例第29頁/共65頁PEDF（pigment epithelium-derived factor）1989年由Tombran-Tink從胎兒視網(wǎng)膜色素上皮細胞 培養(yǎng)液中分離出來，視網(wǎng)膜基質(zhì)中以較高濃度存在 分子量 50KD，基因位于染色體17p13屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑基因家族, 但不具備抗蛋 白酶活性 神經(jīng)親和保護作用；抑制血管

18、增生第30頁/共65頁1.PEDF的抑制血管增生活性Dawson于1999年首次發(fā)現(xiàn)PEDF具有很強的抑制血管 增生的作用, 是維持角膜，玻璃體等眼內(nèi)組織無血 管形成的主要原因是血管生成最有效的天然抑制劑，比血管抑素、內(nèi) 皮抑素活性更高 Gao等在視網(wǎng)膜新生血管大鼠模型中檢測到視網(wǎng)膜 組織VEGF的含量較正常對照組升高5倍，PEDF的 含量下降了2倍，顯示出在視網(wǎng)膜病理新生血管形 成中，血管抑制劑與血管刺激劑之間的平衡被打破 第31頁/共65頁2. PEDF抗血管增生機制 PEDF促進血管內(nèi)皮細胞凋亡體外實驗,人血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液中凋亡陽性細胞 數(shù)隨PEDF劑量的增加而增加體內(nèi)實驗, PEDF

19、處理的高氧動物的視網(wǎng)膜凋亡內(nèi)皮 細胞與未處理相比高8倍，對已存在的正常血管內(nèi) 皮細胞無反應，說明PEDF僅對活化的血管內(nèi)皮細胞 起作用第32頁/共65頁PEDF與膠原蛋白和肝素有高度親和性，提示PEDF 可能作用于細胞粘附分子，即靶向細胞外基質(zhì)來調(diào) 節(jié)其抑制血管內(nèi)皮細胞增生的活性與其他血管因子的相互作用：PEDF下調(diào)VEGF表達； K5上調(diào)PEDF、下調(diào)VEGF表達機制尚有許多疑問：是否存在PEDF特異性受體； PEDF抑制內(nèi)皮細胞的信號轉(zhuǎn)導通路等第33頁/共65頁3. PEDF與腫瘤的關(guān)系PEDF抗腫瘤活性：誘導腫瘤細胞分化；抑制血管生 成；促進Schwann 細胞及神經(jīng)節(jié)細胞產(chǎn)生更多的 P

20、EDF，可能是神經(jīng)母細胞瘤自然好轉(zhuǎn)的緣故 前列腺癌組織中PEDF含量顯著下降或缺如在黑色素瘤細胞系中首次檢測到PEDF基因的缺失 PEDF基因和p53基因均位于染色體17p13.1, 腫瘤 發(fā)生與該區(qū)域關(guān)系密切,提示PEDF基因可能是抑癌 基因或是腫瘤相關(guān)基因 第34頁/共65頁4. PEDF治療血管增生性眼病Stellmach等腹腔內(nèi)注射重組PEDF顯著抑制了早產(chǎn) 性視網(wǎng)膜?。≧OP）小鼠模型的視網(wǎng)膜血管增生Mori等在三種不同的眼血管增生模型中眼內(nèi)輸送 AdPEDF取得顯著療效：激光誘導的色素膜損傷所致 脈絡膜新生血管(CNV)鼠模型；rhodopsin/VEGF轉(zhuǎn) 基因鼠；ROP小鼠模型

21、 AdPEDF眼內(nèi)輸送不僅抑制視網(wǎng)膜和脈絡膜新生血 管形成，還可逆轉(zhuǎn)已形成的新生血管FDA批準PEDF基因治療進入期臨床試驗（2003年）第35頁/共65頁K5（plasminogen kringle 5） 1.K5結(jié)構(gòu)特點：第36頁/共65頁第37頁/共65頁人纖溶酶原是分子量為92 kD的糖蛋白，由5個通過 二硫鍵連接的聯(lián)環(huán)結(jié)構(gòu)域（kringle）構(gòu)成，每個 聯(lián)環(huán)結(jié)構(gòu)域由80個氨基酸組成，含3個二硫鍵，形 成雙環(huán)狀構(gòu)象纖溶酶原水解片段 K1、K2、K3、K5、K1-3、K1-4、 K2-3等均能抑制內(nèi)皮細胞增生，K4不具有抗增殖活 性，卻有明顯抑制內(nèi)皮細胞遷移的作用K1-4即血管抑制素，a

22、ngiostatinK5是抑制內(nèi)皮細胞增殖和遷移最有效的纖溶酶原片 斷第38頁/共65頁K5是血纖溶酶原中與血管抑素相連的聯(lián)環(huán)結(jié)構(gòu)域， 由80個氨基酸殘基組成，包含3個二硫鍵，分子量 為16kD 在結(jié)構(gòu)上與其它4個聯(lián)環(huán)區(qū)相似，具有較高的同源 性，其中與K1同源性最高，為 57.5。K5與K1結(jié) 構(gòu)上的相似性可能與它們都有較強的抑制內(nèi)皮細胞 增殖活性相關(guān) 完整的kringle結(jié)構(gòu)是保證血管抑素抗內(nèi)皮細胞增 殖所必需 kringle結(jié)構(gòu)對K5活性的影響則有不同的看法 第39頁/共65頁2. K5作用的分子機制kringle5抗血管增生的研究是建立在血管抑素基礎 之上，二者可能有相似的抗血管增生的分

23、子機制K5能特異性地作用于血管內(nèi)皮細胞，使細胞周期停 滯，并能誘導內(nèi)皮細胞凋亡K5選擇性抑制內(nèi)皮細胞遷移是其抗血管增生的重要 環(huán)節(jié)第40頁/共65頁K5能通過抑制HIF-1和p42/p44 MAPK的活性下調(diào)內(nèi) 源性血管刺激因子VEGF的表達提高內(nèi)源性血管增生抑制因子PEDF的表達，有利于 已打破的血管增生平衡恢復正常，K5對正負血管因 子的調(diào)節(jié)是其抗血管增生的主要機制 內(nèi)皮細胞上是否存在K5的特異性受體目前看法不一： 有研究表明在培養(yǎng)內(nèi)皮細胞上沒有檢測到K5特異性 受體，同時K5也不能阻止VEGF與VEGF受體的相互作 用 ；最近有報道認為人內(nèi)皮細胞上電壓依賴性陰 離子通道是K5結(jié)合的受體

24、第41頁/共65頁K5和血管抑素抑制內(nèi)皮細胞增殖機制可能通過細胞 外基質(zhì)中某些多糖分子如整合素來發(fā)揮作用，因為 整合素是維持MAPK活性所必需的 K5抑制炎癥細胞分泌細胞因子，如血管內(nèi)皮 細胞生長因子、腫瘤壞死因子及白細胞介素-2等 K5降低血管通透性第42頁/共65頁 研究工作積累研究工作積累 第43頁/共65頁 首次建立了固定氧濃度誘導的大鼠視網(wǎng)膜血首次建立了固定氧濃度誘導的大鼠視網(wǎng)膜血管增生模型，該模型可用于所有以血管增生為管增生模型，該模型可用于所有以血管增生為治療靶點的藥物活性的篩選并進行定性定量分治療靶點的藥物活性的篩選并進行定性定量分析。析。第44頁/共65頁NormalReti

25、nopathy高國全高國全. FEBS Lett, 489,270-276,2001. 第45頁/共65頁NormalRetinopathyGao et al. FEBS Lett, 489,270-276,2001. 第46頁/共65頁高國全高國全. FEBS Lett, 489,270-276,2001. 第47頁/共65頁高國全高國全. FEBS Lett, 489,270-276,2001. 第48頁/共65頁首次發(fā)現(xiàn)大鼠對氧誘導的視網(wǎng)膜血管增生存在首次發(fā)現(xiàn)大鼠對氧誘導的視網(wǎng)膜血管增生存在種系（種系（strain）差異并闡明了這種差異形成的差異并闡明了這種差異形成的分子機制。分子機制。

26、第49頁/共65頁P12P14P18SDBN高國全高國全. Diabetes, 51(4), 1218-1225, 2002. 第50頁/共65頁020040060080010001200VEGF/PEDF Ratio (% of Control) Postnatal DaysP12 P14 P16 BN ratsSD ratsStrain Difference in VEGF:PEDF Ratio高國全高國全. Diabetes, 51(4), 1218-1225, 2002.第51頁/共65頁證明K5在體外實驗中具有特異性抑制血管內(nèi)皮細胞增生的作用并能在視網(wǎng)膜血管增生大鼠模型中預防和阻斷新

27、生血管的形成第52頁/共65頁0 20 40 80 160020 40 60 80100120NormoxiaHypoxiaK5 on HRCECK5 (nM)Viable Cells (x10,000)Zhang et al. Diabetologia, 44,757-765, 2001. 第53頁/共65頁PBS InjectionK5 InjectionZhang et al. Diabetologia, 44,757-765, 2001. 第54頁/共65頁發(fā)現(xiàn)K5具有上調(diào)PEDF并同時下調(diào)VEGF的作用，糾正了病理性低氧狀態(tài)下內(nèi)源性血管增生抑制因子和刺激因子之間的平衡失調(diào)。同時明確了

28、K5下調(diào)VEGF的信號傳導通路通過抑制MAP kinase的活性和HIF1的核轉(zhuǎn)位 第55頁/共65頁b b-actinVEGF N H 40 80 160 320 640H + K5 (nM)050100150200250300VEGF (% of Control)N H 40 80 160 320 640K5 on VEGF and PEDF Expression under HypoxiaN H 40 80 160H + K5 (nM)0100200300400500600PEDFb b-actinN H 40 80 160 K5 (nM) K5 (nM)PEDF (% of Control)第56頁/共65頁 28204933kDaNN+K5 H+K5Hb b-actinVEGF0102030405060N+K5H+K5VEGF (% of Control)78464933kDa N N+K5 H H+K5PEDFb b-actin050