實驗三革蘭氏染色

1、實驗三細菌的單染色與革蘭氏 導(dǎo)|_染色法1微生物染色的基本原理微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進 行的。物理因素如細胞及細胞物質(zhì)對染料的毛細現(xiàn)象、滲透、吸附作 用等?；瘜W(xué)因素則是根據(jù)細胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生的各種化 學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣， 堿性物質(zhì)對酸性染料較易于吸附。如酸性物質(zhì)細胞核對于堿性染料就有化學(xué)親和力，易于吸附。細菌的等電點較低，pH值大約在25之間，故在中性、堿性或弱酸 性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負電荷；而堿性染料電離時染料離子帶 正電。因此，帶陰電的細菌常和帶陽電的堿性染料進行結(jié)合。所以，在細菌學(xué)上常用堿性染料進

2、行染色。2染色方法微生物染色方法一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種。前者用一種染 料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染 料，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故亦稱鑒別染色法。常用的復(fù)染色法有 革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細胞各部分結(jié)構(gòu)的（如芽 胞、鞭毛、細胞核等）特殊染色法。實驗三細菌的革蘭氏染色法一、目的要求1學(xué)習(xí)掌握革蘭氏染色法。2 了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。二、基本原理三、器材1菌種大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2溶液和試劑革蘭氏染色液，草酸鞍結(jié)晶紫染液，盧戈氏碘液，番紅復(fù)染液3儀器或用具

3、 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、無菌生理鹽水、載玻片 -夾子、濾紙四、操作步驟1制片涂片:固體培養(yǎng)物,液體培養(yǎng)物。注意事項：載玻片要潔凈無油跡；滴加生理鹽水和取菌不宜過多；涂片均勻，不宜過厚。干燥：室溫自然干燥。固定：涂面朝上，通過火焰23次。熱固定溫度不宜過高,以玻片背面不燙手為宜。氏染色-制片C.固定菌體A.加小滴水B.涂成薄層2初染滴加結(jié)晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜），染色1一2 min,水洗。3媒染用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋菌膜約lmin,水洗。4脫色用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，用滴管流加95%的乙 醇脫色，直至流出的乙醇無紫色時，立即水

4、洗。脫色時間一般 液2030 So脫色不足與過度都會影響和改變?nèi)旧慕Y(jié)果。5復(fù)染用番紅液復(fù)染約2min,水洗。革蘭氏染色-染色6鏡檢干燥后，用油鏡觀察。藍紫色為G+,紅色為G-。7混合涂片染色將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作混合涂片、染色、鏡檢進行 比較。Procedures of Gram StainingPurple dyeIodineAlcoholSafranin(d) Application of safranin (counterstain)(a) Application of crystal violet (purple dye)(b) Application of iodine (m

5、ordant)(c) Alcohol wash(decolorization)Gram positiveGram negative?mm ovijf &.111JOOrv s «ifPy «HOu (F!FtPUuT» hwr»w Icj ibcC3"y p-.a oomdroo <?' O*« W* - OiftfYwrxrT<M> K OOjsX'IwJCimif urti c.二mHz Fc.?c rt itc.ri.amjc-c j|.*c«jwrirwiitirjri.竿驗報告1.說 明 經(jīng)革蘭 氏染色后大腸肝菌和 金黃色葡萄球菌的染色結(jié)果。2.思考題思考題1.現(xiàn)有一株未知桿菌，個體明顯