HIV抗體檢測技術規(guī)程

1、HIV抗體檢測實驗室技術規(guī)程天津市CDC HIV確證中心實驗室 鄭敏娜2013.6.25 HIVHIV病毒感染人體過程及免疫學機制病毒感染人體過程及免疫學機制o明確明確HIV感染者（診斷）感染者（診斷）n控制傳播控制傳播n及早醫(yī)學干預及早醫(yī)學干預n血液篩查血液篩查o流行病學調查、高危人群監(jiān)測流行病學調查、高危人群監(jiān)測o開展開展VCT的基礎的基礎o職業(yè)保護職業(yè)保護主要內容oHIV抗體檢測的相關規(guī)范性文件oHIV抗體檢測的方法和注意事項oHIV抗體確證實驗的相關規(guī)程和結果解釋o目前我市HIV篩查實驗室中存在的問題HIV抗體檢測的相關規(guī)范性文件o醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法衛(wèi)醫(yī)發(fā)200673號 o全國

2、艾滋病檢測工作管理辦法衛(wèi)疾控發(fā)2006218號 o全國艾滋病檢測技術規(guī)范(2009年版)HIV抗體檢測的相關規(guī)范性文件o全國艾滋病檢測工作管理辦法衛(wèi)疾控發(fā)2006218號 o檢測工作要求第十二條艾滋病檢測實驗室應在規(guī)定的職能范圍內開展檢測工作，遵守國家法律、法規(guī)和有關規(guī)范。檢測技術及程序應符合全國艾滋病檢測技術規(guī)范的要求。HIV抗體檢測的方法和注意事項oHIV抗體檢測的主要方法金標準o包括初篩實驗和確證實驗 p初篩實驗:p試劑必須經國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準，在有效期內的，批批檢合格p敏感性和特異性好：p方法包括：ELISA，化學發(fā)光法和快速檢測法（免疫層析，顆粒凝集等方法）p樣本：血清、

3、血漿；干血斑；唾液；尿液 HIV抗體檢測的方法和注意事項快速免疫層析明膠顆粒凝集法（PA）HIV ELISA試劑質量評估：http:/ 在有效期內使用o試驗操作試驗操作 形成良好的操作習慣形成良好的操作習慣：加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。 嚴格按試劑說明書操作嚴格按試劑說明書操作:空白孔不加樣品和酶標試劑 操作過程中集中精力操作過程中集中精力：避免加樣錯誤注意事項注意事項o保證實驗室溫度，室溫過低有可能造成吸光度值偏低。o ELISA試驗的敏感性很高，如果操作不當很容易出現(xiàn)非特異性反應。在操作過程中，尤其應注意洗滌過程。洗滌徹底可減少

4、假陽性的機會。o進行ELISA試驗時，必須用酶標儀進行測定，不得目測結果。使用酶標儀時，要避免酶標孔內產生氣泡，影響判讀結果。ELISA操作中的注意事項操作中的注意事項o試劑準備試劑準備o加樣加樣o溫育溫育o洗板洗板o顯色顯色o比色比色操作示范請看教學片操作示范請看教學片ELISA試驗假陽性產生原因？o樣品加錯位置，標本搞錯樣品加錯位置，標本搞錯o洗板機設置不當，洗板時洗滌液溢出，污染其它孔洗板機設置不當，洗板時洗滌液溢出，污染其它孔o洗板機內部管道有真菌生長洗板機內部管道有真菌生長o實驗中，實際孵育時間過長，溫度過高實驗中，實際孵育時間過長，溫度過高o待測標本溶血或含有血細胞。待測標本溶血或

5、含有血細胞。 o待測標本長菌或其它原因混濁。待測標本長菌或其它原因混濁。o其它原因：與試驗操作無關其它原因：與試驗操作無關HIV抗體篩查和復檢的流程與2004版檢測規(guī)范的不同報告HIV抗體檢測陰性HIV感染產婦所生嬰幼兒的抗體檢測HIVHIV抗體確證實驗的相關規(guī)程和結果解釋抗體確證實驗的相關規(guī)程和結果解釋o復檢陽性或一陰一陽的樣本 確認實驗 送確認前，應核對身份，補充個人信息（姓名，身份證號等）填寫”HIV抗體復檢檢測單”樣本“三級包裝”第一層：帶蓋的試管第二層：防水，防漏第三層：包裝箱（內附緩沖材料）HIV抗體確認實驗o包括： 免疫印跡實驗免疫印跡實驗(WB) 條帶免疫試驗條帶免疫試驗(LI

6、A) 免疫熒光試驗免疫熒光試驗(IFA) 放射免疫沉淀試驗放射免疫沉淀試驗(RIPA)a 強陽性對照（強陽性對照（HIV-1和和HIV-2）b弱陽性對照（弱陽性對照（HIV-1）c陰性對照陰性對照d典型的典型的HIV-2血清陽性反應血清陽性反應HIV抗體確證實驗的流程HIV抗體檢測的樣本保存o用于抗體和抗原檢測的血清和血漿樣本： 1周內 2-8保存 1周 -20 保存o篩查陽性樣本：送確證o篩查陰性樣本：根據(jù)具體情況，至少1-2個月o確證樣品：保存10年以上目前我市HIV篩查實驗室中存在的問題o實驗室布局不合理，沒有嚴格分區(qū)；沒有標識 o個別實驗室設備不全，沒有安全柜o儀器沒有定期校準 o沒有

7、HIV實驗室生物安全管理制度和SOP 目前我市HIV篩查實驗室中存在的問題o沒有質控記錄：很多實驗室都有o人員流動性大，經培訓的專業(yè)技術人員嚴重不足，部分人員未經專業(yè)技術培訓就上崗 保證實驗室負責人和主要技術 人員的穩(wěn)定，o實驗室技術人員生物安全意識淡薄 增強安全意識，做好防護，保護自身安全o實驗室原始記錄不規(guī)范，缺乏可溯源性 目前我市HIV篩查實驗室中存在的問題o復檢陽性結果的報告問題 篩查實驗陰性直接出報告；復檢后為陽性或一陰一陽的樣本報告為“HIV抗體代確證”，用“HIV抗體復檢檢測單”進行報告o送錯樣本 認真核對樣本，補充個人信息，必要時采集第二份血o質控品的使用時限 -20 有效期內均可使用；解凍后的1周內用完o送檢樣本包裝不