基因工程載體的分類及其特性

1、基因工程載體的分類及其特性田文曉 1343001125按照來源和性質(zhì)分類1、質(zhì)粒載體復制：通常情況下一個質(zhì)粒含有一個與相應的順式作用控制要素結(jié)合在一起的復制起始區(qū)。 在不同的質(zhì)粒中，復制起始區(qū)的組成方式不同，有的可決定復制的方式， 例如滾環(huán)復制和。復制；在大腸桿菌中使用的大多數(shù)載體都帶有一個來源于pMB1質(zhì)?；駽olE1質(zhì)粒的復制起始位點?？截悢?shù)：質(zhì)?？截悢?shù)分為嚴謹型與松馳型。嚴謹型質(zhì)粒每個細胞中拷貝數(shù)大約為1幾個；松馳型質(zhì)粒拷貝數(shù)較多，可達幾百。 不相容性：兩個質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性，它是指在第二個質(zhì)粒導入后，在不涉及DNA限制系統(tǒng)時出現(xiàn)的現(xiàn)象。不相容的質(zhì)粒一般都利用

2、同一復制系統(tǒng)，從而導致不能共存于同一宿主中。兩個不相容性質(zhì)粒在同一個細胞中復制時，在分配到子細胞的過程中會競爭，隨機挑選，微小的差異最終被放大， 從而導致在子細胞中只含有其中一 種質(zhì)粒。 轉(zhuǎn)移性：指在自然條件下，很多質(zhì)?？梢酝ㄟ^稱為細菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。它需要移動基因mob ,轉(zhuǎn)移基因tra ,順式因子bom及其內(nèi)部的轉(zhuǎn)移缺口位點 nic 。2、噬菌體載體包括入噬菌體、M13噬菌體載體1)入噬菌體載體：大的外援插入片段在質(zhì)粒中不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)導是比轉(zhuǎn)化效率更高的過程，防止出 現(xiàn)無插入片段的空載體。2) M13噬菌體載體：可以對任意克隆基因進展 DNA®展誘變，測序方便，可以制備單鏈

3、測序模 板；含有噬菌體 DNA的噬菌體顆粒從轉(zhuǎn)化細胞中分泌出來后，可以在生長平板上收集。超感染免疫性：溶原性細菌在被噬菌體感染并溶原化后，不會被同種噬菌體再次感染。 經(jīng)過假設(shè)干世代后， 溶原性細菌會開場進入溶菌周期，即溶原性細菌的誘發(fā)。 此時，原噬菌體從宿主基因組上切離下來進展增殖。3、粘粒載體柯斯質(zhì)粒具有入噬菌體的特性?？滤官|(zhì)粒載體在克隆了適宜長度的外源DNA并在體外被包裝成噬菌體顆粒之后，可以高效地轉(zhuǎn)導對入噬菌體敏感的大腸桿菌寄主細胞。但該載體不包含入噬菌體的全部必要基因，因此不能夠通過溶菌周期，無法形成子代噬菌體顆粒。 具有質(zhì)粒載體的持性。 柯斯質(zhì)粒載體具有質(zhì)粒復制子，因此在寄主細胞內(nèi)能

4、夠像質(zhì)粒DN樣進展復制，并且在氯霉素作用下， 同樣也會獲得進一步的擴增。此外，柯斯質(zhì)粒載體通常也都具有抗菌素抗性基因，可供作重組體分子表型選擇標記。具有高容量的克隆能力。柯斯質(zhì)粒載體的分子僅具有一個復制起點，一兩個選擇記號和 COS位點等三個組成局部，其分子量較小，一般只有57kb左右。因此，柯斯質(zhì)粒載體的克隆極限可達45kb左右。具有與同源序列的質(zhì)粒進展重組的能力。一旦柯斯質(zhì)粒與一種帶有同源序列的質(zhì)粒共存在同一個寄主細胞當中時， 它們之間便會形成共合體。因此，假假設(shè)柯斯質(zhì)粒與質(zhì)粒各自具有一個互不一樣的抗藥性記號及相容性的復制起點，那么當他們轉(zhuǎn)化到同一寄主細胞之后，便可容易的篩選出含有兩個不同

5、不同選擇記號的共合體分子。4、病毒載體轉(zhuǎn)導效率高、復雜的裝配過程由細胞完成、不同病毒載體具有不同表達特點。根據(jù)病毒載體在主細胞中的存在情況分為瞬時表達病毒載體和穩(wěn)定表達病毒載體。5、人工染色體可以容納更長的DNA片段，用較少的克隆就可以包含特定的基因組全部序列，從而保持了基因組特定序列的完整性，有利于物理圖譜的制作。按照功能和用途分類1、克隆載體又分為質(zhì)粒載體、噬菌體載體、粘粒載體、人工微小染色體特征如上方 的按來源的分類 能在宿主細胞中復制繁殖，而且最好要有較高的自主復制能力。 容易進入宿主細胞，而且進入效率越高越好。容易插入外來核酸片段，插入后不影響其進入宿主細胞和在細胞中的復制。這就要求

6、載體 DNA±要有適宜的限制性核酸內(nèi)切酶位點。容易從宿主細胞中別離純化出來，這才便于重組操作。有容易被識別篩選的標志，當其進入宿主細胞、或攜帶著外來的核酸序列進入宿主細胞都能 容易被識別和別離出來。這才介于克隆操作。2、表達載體包括原核表達載體和真核表達載體1) 原核表達載體：繁殖迅速、培養(yǎng)簡單、操作方便、遺傳穩(wěn)定，基因克隆及表達系統(tǒng)成熟完善， 全基因測序完成，被美國 FDA批準為平安的基因工程受體生物。2) 真核表達載體：基因表達調(diào)控機理比擬清楚，遺傳操作方便，技術(shù)成熟，本錢低廉，不含特異性病毒，不產(chǎn)生內(nèi)毒素，平安性高。表達載體(Expression vectors)就是在克隆載體

7、根本骨架的根底上增加表達元件(如啟動子、RBS終止子等)，使目的基因能夠表達的載體。3、測序載體 測序載體包括單鏈載體、雙鏈載體，如 M13 Puc系列，PGE陳列。測序載體一般含有一段多酶切位點區(qū)，便于外源DNA片段的插入、重組。在插入片段的旁邊，有適宜的測序引物互 補序列。雙鏈 DNA載體，可以從插入片段的兩側(cè)同時測定 DNA鏈的順序，故提高了測序效 率。4、轉(zhuǎn)化載體為了把任何一個基因或DNA序列整合到所要的生物體基因組，把來自所要的生物體的一個基因或DN際列克隆進一個環(huán)狀載體，通過同源重組整合進基因組。用同一種載體克隆外源 DN際列后去轉(zhuǎn)化該生物體，通過轉(zhuǎn)化載體和整合載體之間的同源性而插入，將外源DN附列插入該生物體基因組。5、穿梭載體 這類載體不僅具有細菌質(zhì)粒