加校正因子的主成分自身對(duì)照法精編版

1、加校正因子的主成分自身對(duì)照法一、定義及適用范圍加校正因子的主成分自身對(duì)照法， 即以主成分作為對(duì)照的內(nèi)標(biāo)法 ，校正因子可以在檢測(cè)時(shí)測(cè)定， 但需提供雜質(zhì)對(duì)照品 ，也可在建立方法時(shí)將測(cè)得的校正因子載入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 供以后常規(guī)檢驗(yàn)使用， 無(wú)需長(zhǎng)期提供雜質(zhì)對(duì)照品， 但也僅適用于已知雜質(zhì) 的控制。建議：校正因子在 0.8-1.2 時(shí)可不予校正。校正因子計(jì)算公式：As×Crf=Cs×Ar式中： f校正因子；As雜質(zhì)對(duì)照品峰面積或峰高；Cs雜質(zhì)對(duì)照品濃度；Ar待測(cè)成分對(duì)照品峰面積或峰高；Cr待測(cè)成分對(duì)照品濃度。二、校正因子的測(cè)定在校正因子的研究和使用中，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、色譜條件、溶劑、檢測(cè)波長(zhǎng)等均

2、是重要的影響因素，研究中需要予以關(guān)注。2.1 校正因子的測(cè)定需要用到特定雜質(zhì)及主成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)具備量值準(zhǔn)確的特點(diǎn)，符合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（對(duì)照品）的相關(guān)要求；其次，確定 校正因子的分析方法應(yīng)與最終確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法一致 ，色譜條件等需經(jīng)篩選優(yōu)化后確定，如有變更，需考慮對(duì)校正因子的影響，必要時(shí)重新確定；第三，要關(guān)注影響待測(cè)物 UV 吸收的各種因素， 如溶液制備所用溶劑最好與最終確定的流動(dòng)相相同，檢測(cè)波長(zhǎng)最好在特定雜質(zhì)及主成分 UV 曲線的峰或谷處， 避開吸收值急劇變化波段，以保證測(cè)定方法具有較好的耐用性，并保持測(cè)定結(jié)果的恒定。2.2 一般情況下，校正因子可視具體情況通過(guò)如下幾種方法確定：（

3、 1）單濃度點(diǎn)測(cè)定： 制備適當(dāng)濃度的特定雜質(zhì)對(duì)照品溶液和主成分對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，照上式計(jì)算，得到校正因子。（ 2）多濃度點(diǎn)測(cè)定：制備適當(dāng)?shù)母?、中、低三水平濃度的特定雜質(zhì)對(duì)照品溶液和主成分對(duì)照品溶液（涵蓋定量限、標(biāo)準(zhǔn)限度） ，分別進(jìn)樣測(cè)定，照上式計(jì)算各校正因子，計(jì)算 RSD，求平均值，得到校正因子。（ 3）標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定 ：精密稱取雜質(zhì)對(duì)照品和主成分對(duì)照品，分別制備系列溶液（涵蓋定量限、 標(biāo)準(zhǔn)限度），分別進(jìn)樣后， 按最小二乘法以進(jìn)樣量對(duì)響應(yīng)值 （峰面積等）進(jìn)行線性回歸，求得兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，兩曲線斜率之比即為校正因子。（ 4）吸收系數(shù)比值法：對(duì)于 UV 檢測(cè)器來(lái)講，兩物質(zhì)的相對(duì)校正因子實(shí)際上

4、也1%是兩物質(zhì)以流動(dòng)相為溶劑， 在檢測(cè)波長(zhǎng)處的紫外吸收系數(shù) E 1cm 之比，故可按吸收系數(shù)法測(cè)定法的相關(guān)技術(shù)要求測(cè)定各自吸收系數(shù)，如對(duì)照品級(jí)別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、高中低三水平濃度測(cè)定、 吸收度介于 0.30.8 之間、至少 5 臺(tái)不同型號(hào)的 UV 分1光光度計(jì)、 2 份供試液同時(shí)平行制備測(cè)定、同臺(tái)儀器2 份供試液的平行測(cè)定結(jié)果不超過(guò) ±0.5%等。測(cè)定兩物質(zhì)的吸收系數(shù)后，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析確定兩物質(zhì)吸收系數(shù)，計(jì)算比值，求得校正因子。上述各方法中，（ 1）和（ 2）法較為簡(jiǎn)捷，可以快捷地量化特定雜質(zhì)與主成分紫外吸收特征的差異， 多用于評(píng)估采用主成分自身對(duì)照法定量雜質(zhì)時(shí)是否需要校正。但 如采用加校正因

5、子的主成分自身對(duì)照法定量雜質(zhì)，需將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)賦值信息轉(zhuǎn)化為校正因子固化在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，那么校正因子的準(zhǔn)確性非常關(guān)鍵，校正因子的準(zhǔn)確計(jì)算應(yīng)符合更為嚴(yán)格的要求，需要考慮并控制求算校正因子過(guò)程中的各種誤差因素，以及儀器通用性和色譜系統(tǒng)的耐用性等因素，以便使求得的常數(shù)更為準(zhǔn)確并具代表性，此時(shí)采用（ 3）、（4）法更為適宜， 如能考慮到測(cè)定人員、不同試驗(yàn)室因素的影響，會(huì)更加符合常數(shù)求算的基本要求。三、方法驗(yàn)證校正因子的測(cè)定屬于有關(guān)物質(zhì)方法驗(yàn)證中的一個(gè)項(xiàng)目，一般采用有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，雜質(zhì)對(duì)照品和主成分對(duì)照品線性濃度從定量限至限度的120%或150%，一般取 5-6 個(gè)點(diǎn)，使用 3 臺(tái)不同的儀器測(cè)定，按照上述

6、方法（3），計(jì)算平均校正因子。有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證主要包括：系統(tǒng)適用性、方法專屬性、精密度（儀器精密度、方法精密度和中間精密度） 、線性、準(zhǔn)確度（已知雜質(zhì)的回收試驗(yàn)） 、檢測(cè)限和定量限、溶液穩(wěn)定性和耐用性。試驗(yàn)內(nèi)容概念溶液配制份數(shù)進(jìn)樣針數(shù)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)雜質(zhì)峰峰面積系統(tǒng)適用性是RSD2.0%，對(duì)分析設(shè)備、保留時(shí)間 RSD電子儀器與實(shí)空白溶液 1 份進(jìn) 1 針1.0%；雜質(zhì)系統(tǒng)適用性驗(yàn)操作、測(cè)試峰的拖尾因子供試液 1份進(jìn) 6 針樣品等整個(gè)系2.0%，理論統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估的塔板數(shù)應(yīng)符合指標(biāo)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定專屬性系指在空白對(duì)照 1 份空白對(duì)照無(wú)干其他成分（如輔料溶液（或擾；主峰與相方法專屬性 1雜質(zhì)、降解物、 起始原

7、料、中每份各 1針鄰雜質(zhì)峰的分輔料等）可能間體）1份離度 2.0存在下，采用供試液 1份的分析方法能未破壞樣品、每份供試液進(jìn)降解雜質(zhì)峰與方法專屬性 2夠正確鑒定檢光濕熱 10 天1 針；空白溶主峰的分離度出被分析物質(zhì)破壞樣品和酸液、酸堿空白2.02的特性堿氧化破壞樣及氧化空白各品各 1份1針在規(guī)定的測(cè)試條件下， 同一均質(zhì)供試品， 經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列精密度檢測(cè)所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）在同樣的操作條件下，在較儀器精密度短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所方法精密度得結(jié)果的精密度同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，中間精密度如時(shí)間、分析人員、儀器設(shè)備、測(cè)定結(jié)果的精密度在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢

8、測(cè)結(jié)果與供試品線性中被分析物的濃度（量）直接呈線性關(guān)系的程度用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)準(zhǔn)確度或認(rèn)可的參考值之間的接近程度均指試樣中的被分析物能夠檢測(cè)限與定量被檢測(cè)到的最低量；檢測(cè)限限不一定要準(zhǔn)確定量；定量限測(cè)定結(jié)果應(yīng)具1%對(duì)照液儀峰面積 RSD器精密度進(jìn) 6 針2.0%供試液儀器精峰面積 RSD進(jìn) 6 針（同系密度2.0%，保留時(shí)統(tǒng)適用性）間 RSD1.0%供試液 6份雜質(zhì)含量 RSD每份 1針15%12 份供試液響換儀器，換人每份 1 針應(yīng)因子 RSD6 份供試液20%1%對(duì)照線性相關(guān)系數(shù)（ R）0.990，Y 軸溶液 5份截距應(yīng)在每份 1針響應(yīng)值100%已知雜質(zhì)的線的 25%以內(nèi)，響應(yīng)因子

9、RSD性溶液 5份10%對(duì)照液 1 份；每份 2針；平均回收率均應(yīng)在本底供試液 1每份 2針；80%-120%之份；間， 9 個(gè)回收供試液 3份每份 3針率 RSD10%基線 1針；1%對(duì)照檢測(cè)限、定量限檢測(cè)限 2 針；應(yīng)不小于 3應(yīng)不小于 10已知雜質(zhì)對(duì)照定量限 6針雜質(zhì)峰保留時(shí)液檢測(cè)限、定間 2.0%，峰3有一定的準(zhǔn)確量限度和精密度供試液經(jīng) X 小溶液穩(wěn)定性時(shí)放置，含量供試液 1 份的變化調(diào)流動(dòng)相 pH變化± 0.2調(diào)流動(dòng)相配比測(cè)定條件發(fā)生變化± 5%小的變動(dòng)時(shí)，柱溫變化±耐用性測(cè)定結(jié)果不受5影響的承受程檢測(cè)波長(zhǎng)變化度±5nm流速相對(duì)值變化± 20%換色譜柱面積 5.0%主成分的含量變化的絕對(duì)值2.0