九免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架_第1頁
九免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架_第2頁
九免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架_第3頁
九免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架_第4頁
九免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架_第5頁
已閱讀5頁，還剩5頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架實驗九實驗?zāi)康呐c要求1. 掌握免疫熒光技術(shù)的基本原理;2. 了解免疫熒光技術(shù)在生命科學中的廣泛應(yīng)用.一、實驗的基本原理 熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學顯微鏡，其基本原理是利用一定波長的激發(fā)光對樣品進行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定波長的熒光，從而用于對樣品結(jié)構(gòu)或其組分進行定性、定位、定量觀察檢測。 抗體能特異性地識別相應(yīng)的抗原，并與之結(jié)合。這種結(jié)合在體外也能發(fā)生，這種特性就是許多免疫檢測方法的基礎(chǔ)。 熒光技術(shù)與免疫技術(shù)的結(jié)合可用于對樣品結(jié)構(gòu)或其組分進行定性、定位、定量觀察檢測。三、試劑與器材人腫瘤細胞涂片甲醇、H2O2、濾紙、PBS、正常羊血清封閉液、一抗、 FITC標記的I

2、gG、甘油/PBS封片劑、蓋玻片熒光顯微鏡玻片細胞置于甲醇中-10固定5min，室溫涼干（或冷丙酮固定5min，室溫涼干）；PBS漂洗2min3次；3% H2O2室溫孵育10min（以去除細胞內(nèi)源性過氧化物酶活性）；PBS漂洗5min3次；10%正常羊血清封閉液（0.1M PBS配制）室溫封閉20min；棄封閉液（此步驟不必PBS洗滌）；四、實驗步驟 用適當比例稀釋的一抗（一般稀釋比為1:100-1:200）37孵育1h（或4孵育過夜）；PBS漂洗5min3次；用適當比例稀釋的二抗（FITC標記的IgG）（一般稀釋比為1:100-1:200，用加有BSA的TBST配制）室溫孵育30min（避光黑暗條件下進行）；PBS漂洗5min3次；甘油/PBS封片劑（PBS: 甘油=1：9，v/v，pH8.0-8.5）封片；熒光顯微鏡或激光共聚焦掃描顯微鏡觀察拍照。五、注意事項1. 注意各級抗體濃度的使用范圍;2. 熒光抗體孵育時要注意避光;3. 注意各步驟的漂洗要充分.六、作業(yè)與思考題試述免疫熒光技術(shù)的基本原理,并描

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論