自然科學類標書科技考試

1、皖南醫(yī)學院研究生課程進修班 臨床科研方法學考試卷 請各位學員按要求認真填寫此標書，將紙質版簽字后，統(tǒng)一寄到皖南 醫(yī)學院研究生部，劉曉平， 241001。 科 研 基 金 申 請 書肝內膽管結石患者膽管上皮及膽汁內粘課題名稱的檢測及意P白人劉剛 部門名稱： 池州市人民醫(yī)院 聯(lián)系電話： 起止年限：2012-4-1 至2011-4-1 申請日期：2011-3-10 簡表 項目名稱肝內膽管結石患者膽管上皮及膽汁內粘蛋白的檢測及其意義 研究類型 B A、基礎研究 B、應用基礎研究C、應用研究 D、開發(fā)研究 姓名 負責人 劉剛性別 男 民族 漢 出生日期 1 0-6- 198行政職務 專業(yè)職稱醫(yī)師 科學

2、普通外科學 最后學歷 本科 最后學位 學士研究專長 肝膽外科 研究起止年月 2011-4至2012-4 部門名稱 池州市人民醫(yī)院普外科 聯(lián)系電話2816188 主 要 參 加 者姓 名 性別 年稱 專業(yè)職 齡研究專長 學歷學位 工作部門 劉剛 男 31 醫(yī)師 肝膽外科 本科學士 池州市人民醫(yī)院陳云 男主任醫(yī)47 師 胃腸外科 本科學 士池州市人民醫(yī)院 花庶慶 男 醫(yī)師29 肝膽外科 本科學 士池州市人民醫(yī)院 楊國平 男 30 醫(yī)師胃腸外科 本科 學 士池州市人民醫(yī)院 陳德忠 男主治醫(yī)39 師 微創(chuàng)外科 本科 學 士池州市人民醫(yī)院 詹志林 男 29 醫(yī)師 肝膽外科研究 生碩 士池州市人民醫(yī)院 汪

3、開 貴男 主任醫(yī)41 師 肝膽外科研究生 碩 士池州市人民醫(yī)院 預期成果 膽管上皮細胞表達和分泌粘蛋白及膽汁中膽管上皮細胞內PH值變化和肝內膽管結石形成有直接關系，肝內膽管結石的發(fā)病有免疫學等多方面因素參與。它將強烈提出如何有效控制粘蛋白的高表達，改變膽汁的酸堿環(huán)境將是改善膽石病的治療效果下一個值得研究的課題 ) 單位：元(申請經費50000 一、 國內外研究概況和發(fā)展趨勢，研究目的與意義 肝內膽管結石是我國常見且難治的疾病。目前各種手術和非手術治療總體效果不滿意，結石殘留率復發(fā)率手術并發(fā)癥發(fā)生率和再手術率均高，而且常出現(xiàn)膽道梗阻出血感染和膽源性胰腺炎等并發(fā)癥給患者帶來巨大心理和身體痛苦，它的

4、診療成為家庭和社會的重大負擔。有簽于此肝內膽管結石（hepatolithiasis）的病因學研究對于其診斷和治療具有重大意義。 目前認為其病因復雜，肝內感染，膽汁淤積，膽管解剖異常等病因已獲共識，但其病因學的研究方向在分子生物學的影響下正逐步向膽管局部免疫病理變化轉變。20世紀80年代以來人民普遍注意到粘蛋白在膽石病成因中有重要作用，但關于粘蛋白與肝內膽管結石的關系研究較少，膽汁及膽管上皮的酸堿環(huán)境與肝內膽管結石的關系鮮有報道。我們課題旨在免疫組化等技術的輔助下，對肝內膽管結石與膽管上皮細胞膽汁內粘蛋白及PH值的內在關系進行統(tǒng)計學的研究，為肝內膽管結石病因的流行病學研究做出貢獻。冀希望我們的發(fā)

5、現(xiàn)對于肝內膽管結石的防治猶如幽門螺桿菌的發(fā)現(xiàn)對于消化性潰瘍的防治，即肝內膽管結石的治療發(fā)生根本原則的變化，而不是膽管切開取石及病變肝葉切除等手 術的對癥處理，真正做到審因論治。二、研究內容、擬解決的關鍵問題、技術路線及可行性分析 1.研究內容 該項課題研究試圖從免疫學的角度探討肝內膽管結石的病因。通過免疫組化技術檢測肝內膽管結石患者膽管上皮粘蛋白表達分布,免疫比濁法測定膽汁中粘蛋白含量,PH試紙法同步測定膽管上皮及膽汁PH值，以明確膽管上皮細胞表達和分泌粘蛋白及膽汁中膽管上皮細胞內PH值與肝內膽管結石形成的內在聯(lián)系，進而為肝內膽管結石的診斷和治療提供新的病因學依據。 技術路線及可行性分析 21

6、實驗對象分組 ? 對照組：選擇2011 年 月-2012 年4 月間，池州市人民醫(yī)院收治的因肝囊腫或肝血管瘤而行肝葉切除的病例15例，在手術切除的標本中遠離病灶取含肉眼可見的肝內膽管的小塊肝組織。抽取膽管內膽汁 ? 肝內膽管結石組：選擇2011 年 4月-2012 年 4月，池州市人民醫(yī)院收治的原發(fā)性肝內膽管結石而行肝葉切除的病例30例，在手術切除的標本中，經肝斷面切除含結石之肝內膽管，包括其周圍少許肝組織。抽取膽管內膽汁。 2肝內膽管組織常規(guī)病理檢查 采用常規(guī)石臘包埋標本，切片，HE染色，顯微鏡觀察 3免疫組織化學檢測 利用粘蛋白單克隆抗體與粘蛋白核心多肽抗原的特異性結合反應來檢測和定位肝內

7、膽管組織中粘蛋白的表達和分布情況，判定陽性結果的強度登等級。 4膽管內膽汁中粘蛋白定量測定 采用免疫比濁法測定肝內粘蛋白含量。 5肝內測定 值PH膽管上皮細胞及膽汁中采用PH試紙法測定肝內膽管上皮細胞及膽汁中PH值 統(tǒng)計學分析 6 所得數據均用EXCEL錄入計算機，運用SOSS15.0統(tǒng)計軟件中MONTE CARLO確切概率法進行分析，P值<0.05為有顯著性差異的標準。 三、研究進度和預期成果 準備階段 2011年 4月 復習文獻，課題組人員培訓，制定實驗設計方案，購買實驗試劑和藥品。 實施階段 2011年 6月-2012 年 3月 前期 2011年6月2011年8月，完成病例數 6人

8、次 中期 2011年7月2011 年11 月，完成病例數10人次 后期 2011年12月2011 年3 月，完成病例數 14人次 結題階段 20 11年 4月 整理分析資料資數據，撰寫科研論文，迎接驗收 四、目前已具備的條件（技術水平和物質基礎） 1. 工作基礎和優(yōu)勢（主要技術優(yōu)勢、專業(yè)特色及本學科發(fā)展方向） 我院所在的池州市農村患者多，是流行病學上的肝內膽管結石高發(fā)區(qū)，膽道外科是我院優(yōu)勢特色學科，故病歷資料豐富。病理科免疫組化技術成熟，和我科有良好的合作傳統(tǒng)，將為課題研究提供至關重要的技術支持。作為院重點學科，我科對肝內膽管結石診斷治療包括開腹手術，腹腔鏡手術，十二指腸手術，對肝內膽管結石的

9、膽管感染，膽管畸形等病因有深刻認識，在研究中將科學地剔除這些影響因素。多科參加人員技術力量雄厚，本課題有副主任醫(yī)師 位，研究生 位。 2. 預試情況（近3年開展的與本課題研究相關研究工作及其取得的進展和成果，已經發(fā)表的具有代表性的論文、著作） 汪開貴副主任醫(yī)師碩士學位論文粘蛋白MUC1和MUC2在含結石之肝內膽管上皮組織中的表達及意義獲全國優(yōu)秀博士碩士論文。 3. 科研設備和實驗條件 自動組織脫水機 組織切片機 組織漂烘儀 隔水電熱恒溫箱 顯微鏡 五、經費預算支 出 科 目 金額（元） 計 算 根 據 及 理 由 科研業(yè)務費 10000 儀器設備費 15000 協(xié)作費5000 實驗材料費20000 計 合50000 六、既往獲得本基金