實(shí)驗(yàn)四微生物細(xì)胞大小測(cè)定及顯微鏡下細(xì)胞數(shù)量測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定微生物細(xì)胞大小的測(cè)定及顯微鏡下直接計(jì)數(shù)及顯微鏡下直接計(jì)數(shù)主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1 顯微鏡下細(xì)菌細(xì)胞顯微鏡下細(xì)菌細(xì)胞大小大小的測(cè)定的測(cè)定2 血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞的血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞的數(shù)量數(shù)量 （顯微鏡下直接計(jì)數(shù)）（顯微鏡下直接計(jì)數(shù)） 一一 顯微鏡下細(xì)菌細(xì)胞顯微鏡下細(xì)菌細(xì)胞大小大小的測(cè)定的測(cè)定1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理3 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料4 實(shí)驗(yàn)方法步驟實(shí)驗(yàn)方法步驟5 實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺的方法學(xué)習(xí)用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺的方法 學(xué)習(xí)并掌握用目鏡測(cè)微尺測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞大小學(xué)習(xí)并掌握用目鏡測(cè)

2、微尺測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞大小 的方法的方法 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法鞏固顯微鏡油鏡的使用方法2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 測(cè)定微生物細(xì)胞大小是在顯微鏡下利用測(cè)定微生物細(xì)胞大小是在顯微鏡下利用測(cè)微尺測(cè)微尺進(jìn)行。進(jìn)行。測(cè)微尺可分為測(cè)微尺可分為目鏡測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺和和鏡臺(tái)測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺。目鏡測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺是特是特制的圓形玻片，中央有一刻度尺（制的圓形玻片，中央有一刻度尺（100100等分等分），可放入目），可放入目鏡鏡筒內(nèi)，用于測(cè)定細(xì)胞大小。鏡鏡筒內(nèi)，用于測(cè)定細(xì)胞大小。鏡臺(tái)測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺為一載玻片，為一載玻片，上貼有圓形蓋片，中央有總長(zhǎng)度為上貼有圓形蓋片，中央有總長(zhǎng)度為1 1mm(100mm(100等分等分)

3、 )，每小格，每小格長(zhǎng)長(zhǎng)0.010.01mmmm (10um) (10um) 。目鏡測(cè)微尺每小格大小隨顯微鏡放大目鏡測(cè)微尺每小格大小隨顯微鏡放大倍數(shù)不同而改變，倍數(shù)不同而改變，使用目鏡測(cè)微尺進(jìn)行測(cè)量之前必須用鏡使用目鏡測(cè)微尺進(jìn)行測(cè)量之前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)定臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)定，以求出在某一放大倍數(shù)下目鏡測(cè)微尺每小，以求出在某一放大倍數(shù)下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長(zhǎng)度，然后用標(biāo)定好的目鏡測(cè)微尺進(jìn)行測(cè)量。格所代表的長(zhǎng)度，然后用標(biāo)定好的目鏡測(cè)微尺進(jìn)行測(cè)量。 3 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 枯草桿菌標(biāo)本片枯草桿菌標(biāo)本片4 實(shí)驗(yàn)方法步驟實(shí)驗(yàn)方法步驟（1）用鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)定目鏡測(cè)微尺。）用鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)定目鏡測(cè)微尺。（2）用目鏡

4、測(cè)微尺測(cè)定枯草桿菌大小。）用目鏡測(cè)微尺測(cè)定枯草桿菌大小。（1）用鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)定目鏡測(cè)微尺。）用鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)定目鏡測(cè)微尺。 放置目尺放置目尺：取出目鏡，旋開(kāi)接目鏡，將目尺放在目鏡鏡筒：取出目鏡，旋開(kāi)接目鏡，將目尺放在目鏡鏡筒的中間隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目鏡，并插入的中間隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目鏡，并插入鏡筒。鏡筒。 放置臺(tái)尺放置臺(tái)尺：將臺(tái)尺放置于顯微鏡的載物臺(tái)上，使刻度面朝：將臺(tái)尺放置于顯微鏡的載物臺(tái)上，使刻度面朝上。上。 標(biāo)定目尺標(biāo)定目尺：先用低倍鏡觀察，找到臺(tái)尺刻度，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使：先用低倍鏡觀察，找到臺(tái)尺刻度，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使目尺與臺(tái)尺的刻度軸線(xiàn)相平行，移動(dòng)臺(tái)尺使目尺與臺(tái)尺某

5、一目尺與臺(tái)尺的刻度軸線(xiàn)相平行，移動(dòng)臺(tái)尺使目尺與臺(tái)尺某一區(qū)間的兩對(duì)刻度線(xiàn)完全重合，然后計(jì)數(shù)出兩重合線(xiàn)間各自所區(qū)間的兩對(duì)刻度線(xiàn)完全重合，然后計(jì)數(shù)出兩重合線(xiàn)間各自所占格數(shù)，通過(guò)如下公式計(jì)算：占格數(shù)，通過(guò)如下公式計(jì)算：目尺每小格長(zhǎng)度（目尺每小格長(zhǎng)度（um）=兩對(duì)重合刻度線(xiàn)之間臺(tái)尺所占格數(shù)兩對(duì)重合刻度線(xiàn)之間臺(tái)尺所占格數(shù)1010 兩對(duì)重合刻度線(xiàn)之間目尺所占格數(shù)兩對(duì)重合刻度線(xiàn)之間目尺所占格數(shù) 標(biāo)定低倍鏡目尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度標(biāo)定低倍鏡目尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度 （2）用目鏡測(cè)微尺測(cè)定枯草桿菌大小）用目鏡測(cè)微尺測(cè)定枯草桿菌大小取下臺(tái)尺，將染色片放在載物臺(tái)上，先用低倍鏡取下臺(tái)尺，將染色片放在載物臺(tái)上，先用低

6、倍鏡觀察，后換油鏡觀測(cè)，計(jì)量細(xì)菌觀察，后換油鏡觀測(cè)，計(jì)量細(xì)菌長(zhǎng)和寬長(zhǎng)和寬所占小所占小格數(shù)，將測(cè)得格數(shù)乘以已標(biāo)定的目尺每小格長(zhǎng)，格數(shù)，將測(cè)得格數(shù)乘以已標(biāo)定的目尺每小格長(zhǎng)，即得菌體實(shí)際大小。即得菌體實(shí)際大小。測(cè)定測(cè)定2020個(gè)菌體個(gè)菌體求出平均值。求出平均值。 5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄（1 1） 目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果記錄目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果記錄物鏡物鏡物鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺每格目鏡測(cè)微尺每格代表長(zhǎng)度（代表長(zhǎng)度（umum）低倍鏡低倍鏡10?油鏡油鏡1000.5um只標(biāo)定低倍鏡每格的長(zhǎng)度。高倍鏡和油鏡學(xué)生不要標(biāo)定！只標(biāo)定低倍鏡每格的長(zhǎng)

7、度。高倍鏡和油鏡學(xué)生不要標(biāo)定?。? 2） 在油鏡下測(cè)量枯草桿菌大小結(jié)果記錄在油鏡下測(cè)量枯草桿菌大小結(jié)果記錄 菌體菌體編號(hào)編號(hào)寬寬長(zhǎng)長(zhǎng)菌體大小菌體大?。ㄆ骄担ㄆ骄担拰?長(zhǎng)（長(zhǎng)（umum） 目尺目尺格數(shù)格數(shù)菌體寬菌體寬（um）平均值平均值（um）目尺目尺格數(shù)格數(shù)菌體長(zhǎng)菌體長(zhǎng)（um）平均值平均值（um）1234520.二二 血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞的數(shù)量血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞的數(shù)量1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理3 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料4 實(shí)驗(yàn)方法步驟實(shí)驗(yàn)方法步驟5 實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的原理。掌握血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的原理。

8、學(xué)習(xí)用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法。學(xué)習(xí)用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法。2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，是將菌懸液放入血球計(jì)數(shù)板與蓋玻數(shù)，是將菌懸液放入血球計(jì)數(shù)板與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中，然后在顯微鏡下計(jì)片之間的計(jì)數(shù)室中，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)，因?yàn)橛?jì)數(shù)室容積一定，所以可根據(jù)數(shù)，因?yàn)橛?jì)數(shù)室容積一定，所以可根據(jù)測(cè)定值推算出菌懸液?jiǎn)挝惑w積所含微生測(cè)定值推算出菌懸液?jiǎn)挝惑w積所含微生物的總數(shù)量。物的總數(shù)量。 血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu) 它是特制的厚載玻片，中央?yún)^(qū)域有四條凹槽而形成三它是特制的厚載玻片，中央?yún)^(qū)域有四條凹槽而形成三個(gè)平臺(tái)，中

9、間平臺(tái)較寬，它又被一短橫槽分隔為兩部分，個(gè)平臺(tái)，中間平臺(tái)較寬，它又被一短橫槽分隔為兩部分，每一部分均有一個(gè)方格網(wǎng)。每一部分均有一個(gè)方格網(wǎng)。中間平臺(tái)比兩邊平臺(tái)低中間平臺(tái)比兩邊平臺(tái)低0.1mm0.1mm。每一方格網(wǎng)可分為九個(gè)大方格，每一方格網(wǎng)可分為九個(gè)大方格，中央大方格就是計(jì)數(shù)室中央大方格就是計(jì)數(shù)室。大大方格方格分為分為1616個(gè)中個(gè)中方格，每個(gè)方格，每個(gè)中中方格又方格又可分為可分為2525個(gè)小個(gè)小方格。每個(gè)大方格方格。每個(gè)大方格共含有共含有400400個(gè)小方格。計(jì)數(shù)室大個(gè)小方格。計(jì)數(shù)室大方格邊長(zhǎng)為方格邊長(zhǎng)為1 1mmmm，底面積為底面積為1 1mmmm2 2，高高0.10.1mm,mm,所以所以

10、每個(gè)計(jì)數(shù)室固定每個(gè)計(jì)數(shù)室固定容積為容積為0.10.1mmmm3 3。 計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)方法 在計(jì)數(shù)時(shí)，用含在計(jì)數(shù)時(shí)，用含2525個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，要按對(duì)角線(xiàn)方位個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，要按對(duì)角線(xiàn)方位計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下等四個(gè)中方格（計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下等四個(gè)中方格（8080個(gè)小方格）個(gè)小方格）所含有的菌數(shù)；由此可計(jì)算得出每個(gè)小方格所含有的菌數(shù)所含有的菌數(shù)；由此可計(jì)算得出每個(gè)小方格所含有的菌數(shù)的平均值，的平均值，計(jì)數(shù)室每個(gè)小方格容積為：計(jì)數(shù)室每個(gè)小方格容積為： 0.1 0.11010-3-3400400（1 14 4）1010-6-6( (ml)ml)計(jì)算公式：計(jì)算公式：每每mlml菌液含菌數(shù)

11、菌液含菌數(shù) = = N N K K d d N N：每個(gè)小方格含菌數(shù)平均值；每個(gè)小方格含菌數(shù)平均值； d d：菌液稀釋倍數(shù)；菌液稀釋倍數(shù)； K = 4 K = 410106 6 3 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料稀釋稀釋100倍倍的酵母菌菌懸液的酵母菌菌懸液即即 d=1004實(shí)驗(yàn)方法步驟實(shí)驗(yàn)方法步驟1 1 鏡檢計(jì)數(shù)室：鏡檢計(jì)數(shù)室：對(duì)計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢，若內(nèi)有污物，清洗后才能計(jì)對(duì)計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢，若內(nèi)有污物，清洗后才能計(jì) 數(shù)。數(shù)。2 2 加樣液：加樣液：先先在血球計(jì)數(shù)板兩個(gè)計(jì)數(shù)室部位在血球計(jì)數(shù)板兩個(gè)計(jì)數(shù)室部位加蓋玻片加蓋玻片，再用無(wú)菌，再用無(wú)菌 玻棒玻棒或滴管沾取待測(cè)或滴管沾取待測(cè)菌懸液稀釋液菌懸液稀釋液（已搖勻）

12、，從蓋玻片（已搖勻），從蓋玻片邊緣邊緣 滴加滴加，使菌液沿縫隙靠，使菌液沿縫隙靠毛細(xì)作用毛細(xì)作用自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室內(nèi)。自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室內(nèi)。靜置靜置5 5minmin。3 3 顯微鏡計(jì)數(shù)：顯微鏡計(jì)數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板置于載物臺(tái)上，先用將血球計(jì)數(shù)板置于載物臺(tái)上，先用低倍鏡低倍鏡觀察，后觀察，后 換換高倍鏡高倍鏡觀察計(jì)數(shù)。位于格線(xiàn)上菌體只計(jì)觀察計(jì)數(shù)。位于格線(xiàn)上菌體只計(jì)上邊線(xiàn)和左邊線(xiàn)上上邊線(xiàn)和左邊線(xiàn)上的，的， 如果如果出芽酵母芽體大小達(dá)到母細(xì)胞一半時(shí)，可計(jì)作兩個(gè)菌體。出芽酵母芽體大小達(dá)到母細(xì)胞一半時(shí)，可計(jì)作兩個(gè)菌體。選選 擇擇五個(gè)視野五個(gè)視野，在每個(gè)視野內(nèi)任意選擇，在每個(gè)視野內(nèi)任意選擇五個(gè)小方格五個(gè)小方格計(jì)數(shù)，

13、計(jì)數(shù)，求出小方求出小方 格菌體數(shù)量平均值格菌體數(shù)量平均值。4 4 根據(jù)公式計(jì)算每根據(jù)公式計(jì)算每mlml菌液含菌數(shù)。菌液含菌數(shù)。5 5 測(cè)量完畢后，取下蓋玻片用水沖洗血球計(jì)數(shù)板（測(cè)量完畢后，取下蓋玻片用水沖洗血球計(jì)數(shù)板（嚴(yán)禁用硬物刷嚴(yán)禁用硬物刷 洗洗），晾干，放入盒內(nèi)保存。），晾干，放入盒內(nèi)保存。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)（1 1）取待測(cè)稀釋菌懸液向血球計(jì)數(shù)板加樣前，須將菌懸）取待測(cè)稀釋菌懸液向血球計(jì)數(shù)板加樣前，須將菌懸 液充分搖勻。液充分搖勻。（2 2）加樣過(guò)程中，應(yīng)避免將菌液滴在蓋玻片上。）加樣過(guò)程中，應(yīng)避免將菌液滴在蓋玻片上。（3 3）由于菌體在計(jì)數(shù)室中處于不同空間位置，須在不同）由于菌體在計(jì)數(shù)室中處于不同空間位置，須在不同 焦距下才能觀察到，故觀察時(shí)須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)，計(jì)焦距下才能觀察到，故觀察時(shí)須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)，計(jì) 數(shù)菌液中全部菌體，盡量避免遺漏。數(shù)