蛋白質(zhì)含量測定——雙縮脲試劑法實驗報告

1、蛋白質(zhì)含量測定一一雙縮胭試 劑法-實驗報告南方眼科上學(xué)生物化學(xué)實驗報告姓 名：學(xué) 號：專業(yè)年級：組 另IJ: 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教學(xué)中心實驗名稱蛋白質(zhì)含量測定雙縮服試劑法實驗日期實驗地點合作者指導(dǎo)老師評分教師簽名批改日期一、實驗?zāi)康亩?、實驗原理三、材料與方法：.實驗試劑：小牛血清；6. Omol/LNaOH溶液；雙縮酥試劑:硫酸酮、酒石酸 鉀鈉、碘化鉀；蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（70g/L）；0.9%NaCl；蒸儲水。.實驗器材：試管；燒杯；容量瓶；加樣槍；刻度吸管；玻璃棒 ;1100分光光度計；電子天平；水浴鍋。/取3支試管，做好標(biāo)記，按下表操作:"X加入物（ml）B （空白）S （標(biāo)準(zhǔn)

2、）U （待測）小牛血清(1:10)0. 9%Nacl雙縮服試劑a.各管混勻T視察各試b,將各試管置于37c水浴鍋中加熱20min,觀察顏色；c,將試管中的液體倒入比色杯中，置于1100分光光度計的樣品槽內(nèi),在波長540nm, 以空白管調(diào)零，測S和U管吸的光度；kd,測定結(jié)束后，將比色杯中的樣品回收進(jìn)試管。)依據(jù)公式算出結(jié)果:血清總蛋白(g/L)= 21x蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度 好L)四、結(jié)果與討論：選取三支潔凈無損的試管，從左往右依次加入0. 9%氯化鈉溶液、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液、 相應(yīng)的小牛血清各0.5mL分別命名為B試管、S試管和U試管，再分別向三支試管內(nèi) 加入如1的雙縮腺試劑，溶液均成藍(lán)色透明狀。將三

3、支試管放入37c水浴鍋中加熱20min,取出后，B試管呈淡藍(lán)色，S試管和U試管均成淺紫色，且S試管的顏色比U試管的顏色深。(如圖一)圖二分光計讀數(shù)圖一水浴后三支試管顏色測定次數(shù)管號平均吸光度1S0.1850.1840.1850.1847U0.1520.1510.1520.1517結(jié)果計算：代入公式：血清總蛋白(g/L) = (Au/As)X蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度(g/L),得 出結(jié)果：血清總蛋白=57.493g/L。經(jīng)查閱資料得：正常成人血清總蛋白含量為6080g/L,而小牛血清總蛋白含量比 正常成人血清總蛋白含量略低一點，本次結(jié)果得出小牛血清總蛋白含量為57. 493g/L, 符合情況。.成功原因

4、：本次試驗的試劑混合水浴后出現(xiàn)了預(yù)期效果：B試管呈淡藍(lán)色，S試管和U試管 均成淺紫色，且S試管的顏色比U試管的顏色深。B試管呈淡藍(lán)色是因為B試管中沒有 發(fā)生任何反應(yīng)，所以呈現(xiàn)雙縮服試劑本來的淡藍(lán)色，而S試管和U試管呈淺紫色是因為 試劑中的蛋白質(zhì)和雙縮服發(fā)生了雙縮服反應(yīng)而呈淺紫色。吸光度測試后得到的數(shù)據(jù),經(jīng)計算后得到了預(yù)期中的結(jié)果,是因為前面操作嚴(yán)謹(jǐn)。,誤差分析三次重復(fù)測定過程中出現(xiàn)了一些浮動數(shù)據(jù)，可能是因為儀器本身存在的可允許的 誤差范圍。第一次嘗試使用分光光度計的時候得到了負(fù)值，經(jīng)查明是因為放置在其內(nèi)的比色 杯將磨面對準(zhǔn)了通光面，經(jīng)調(diào)整后，獲得了正確的數(shù)據(jù)。.什么叫雙縮服試劑？為什么要在雙縮

5、服試劑中加入酒石酸鉀鈉和碘化鉀？答：雙縮服試劑是一個用于鑒定蛋白質(zhì)的分析化學(xué)試劑，遇到蛋白質(zhì)顯紫色。它是 一個堿性的含銅試液，呈藍(lán)色，由O.lg/ml氫氧化鈉或氫氧化鉀、O.Olg/ml硫酸銅和 酒石酸鉀鈉配制。硫酸銅、酒石酸鉀鈉的堿性溶液中會生成紫紅色絡(luò)合物，在這種比例 的堿性水溶液中，本來形成的Cu(OH) 2會與溶液中多余的0H-形成Cu (OH)42-絡(luò)離子, 酒石酸鉀鈉的作用就是保護(hù)這種絡(luò)離子不被析出變?yōu)槌恋?，向試劑中加入碘化?可延 長試劑的使用壽命。.試劑配制過程中，為何NaOH要單獨配制，最后加入？答：先單獨加入NaOH溶液是為了營造一個堿性環(huán)境,在堿性環(huán)境下雙縮服試劑B中 的Cu2+與蛋白質(zhì)肽鍵絡(luò)合產(chǎn)生顏色反應(yīng).如果先將雙縮服試劑A與雙縮腺試劑B混合， 即NaOH與CuS04溶液混在一起,那么就會產(chǎn)生Cu (OH) 2沉淀,藥劑就會失去作用,看不到 效果,也就無法判斷是否存在蛋白質(zhì).簡述血清總蛋白測定的臨床意義。答：臨床上，當(dāng)血清總蛋白濃度降低時，可能代表：血清總蛋白濃度降低