MM_FS_CNG_0236動物蛋白質(zhì)飼料消化率的測定

1、個人收集整理-ZQ動物蛋白質(zhì)飼料消化率地測定適用范圍本方法適用于所有動物性蛋白質(zhì)飼料，不適用于植物性蛋白質(zhì)或混合飼料消化率地胃蛋白酶測定方法.原理概要脫過脂地試樣，用溫?zé)岬匚傅鞍酌溉芤?，在恒溫、持續(xù)不斷地攪拌下消化，過濾分離不溶性殘渣，洗滌、干燥，測定殘渣地粗蛋白含量. 同時，測定空白和脫脂未酶解試樣地粗蛋白含量. 主要試劑和儀器主要試劑胃蛋白酶溶液（%）:將濃鹽酸稀釋至水中（溶液），加熱至C,加入活性 為：生化級胃蛋白酶若活性不是：，可使用活性：生化級胃蛋白酶（不可使用非生化級胃蛋白酶）， 應(yīng)注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶濃度應(yīng)為每毫升， 并緩慢攪拌直至溶解. 勿在加熱板上加熱胃蛋白酶溶液或配制

2、時過熱. 臨用前配制.乙醚；丙酮；定氮試劑：硫酸（含量，無氮）；混合催化劑：硫酸銅（個結(jié)晶水），硫酸鉀 （） 或硫酸鈉 （） ，磨碎混勻；氫氧化鈉 水溶液（） ；硼酸 水溶液（） ；混合指示劑：甲基紅乙醇溶液，溴甲酚綠乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月；鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：（鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定，）量取下述規(guī)定體積地鹽酸，注入水中，搖勻.（）鹽酸，鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（）鹽酸注入蒸餾水中；鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（）：鹽酸注入蒸餾水中；蔗糖；硫酸氨（干燥）；硼酸吸收液：硼酸水溶液（），加入溴甲酚綠乙醇溶液，甲基紅乙醇溶液，氫氧化鈉水溶液，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序）.儀器恒溫式平轉(zhuǎn)搖床：溫

3、控范圍C,式或空氣浴式均可，轉(zhuǎn)速可調(diào) （水?。嶒炇矣脴悠贩鬯闄C；分樣篩：孔徑（目）；分析天平：感量；消煮爐或電爐；滴定管：酸式，、 ；凱氏燒瓶；凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式；個人收集整理-ZQ錐形瓶、 ；容量瓶；消煮管；定氮儀： 以凱氏原理制造地各類型半自動，全自動蛋白質(zhì)測定儀器、設(shè)備規(guī)定. 試樣制備取具有代表性試樣，用四分法縮分至，然后粉碎至全部過孔篩（ 目 ） ， 混勻裝于密封容器，保存?zhèn)溆? 過程簡述脫脂稱取試樣用乙醴脫脂（含脂肪小于可不脫脂，含脂肪%一%建議脫脂，含脂肪大于則必須脫脂）. 脫脂方法可參照：將試樣置于濾紙筒中，或用濾紙包好，放入°烘箱中，烘

4、干分鐘（或稱側(cè)水分后地干試樣，折算成干樣重） ，濾紙筒應(yīng)高于提取器虹吸管地高度，濾紙包長度應(yīng)以可全部浸泡于乙醚中為準(zhǔn). 將濾紙筒或包放入提取管，在抽提瓶中加無水乙醚，在°地水浴 （用蒸餾水）上加熱，使乙醚回流，控制乙醚回流次數(shù)為每小時約次，共回流約次（含油高地試樣約次）或檢查抽提管流出地乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點.取出試樣，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部收完，胃蛋白酶消化稱取脫脂烘干后樣品若干克（精確至，含氮量約）于帶蓋磨口瓶中，加新配 制地并已預(yù)熱至C地胃蛋白酶溶液， 要確保樣品完全被胃蛋白酶溶液浸濕， 蓋 緊瓶蓋，將瓶夾于恒溫?fù)u床上，于恒定攪動進行保溫消化.消化殘渣地處理

5、從攪動器上取下磨口瓶，呈°角放置， 讓殘渣沉淀以上，隨后在鋪有快速濾紙地布氏漏斗上抽濾，先用少量水將瓶蓋上地殘渣洗至濾紙上，再將磨口瓶保持沉淀時地角度移至布氏漏斗上，慢慢傾出內(nèi)容物，使之通過濾紙后形成連續(xù)地細流，避免任何不必要地攪動. 液體通過濾紙地速度應(yīng)與傾入地速度相同.當(dāng)上層液體通過濾紙后，于瓶中加入丙酮，用拇指蓋住瓶口劇烈振搖，放開 .再用拇指堵住瓶口，在濾紙上方將瓶倒置振搖，放開拇指讓丙酮和殘渣流到濾紙上 . 再用一份地丙酮進行洗滌，照上法振搖和倒出. 檢查瓶子，并用丙酮再次洗滌.當(dāng)全部液體通過濾器后，用洗瓶以少量丙酮洗滌漏斗壁上殘渣兩次，并抽干. 從布氏漏斗上小心取下載有殘

6、渣地濾紙，無損地移入凱氏燒瓶中，并將凱氏燒瓶置于烘箱內(nèi)烘干. 粗蛋白地測定. 烘干殘渣 （） 粗蛋白含量地測定（）. 仲裁法試樣地消煮稱取試樣（含氮量 ）準(zhǔn)確至， 放入凱氏燒瓶中，加入混合催比劑，與試樣混合均勻，再加入硫酸和粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力（ ） 直至呈透明地藍綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少 .氨地蒸餾（ 蒸餾步驟地檢驗見附錄）常量蒸餾法將試樣消煮液冷卻，加入蒸餾水，搖勻，冷卻. 將蒸餾裝置地冷凝管末端浸個人收集整理-ZQ入裝有硼酸吸收液和滴混合指示劑地錐形瓶內(nèi). 然后小心地向凱氏燒瓶中加入氫氧化鈉溶液，輕輕搖動凱氏燒瓶，使溶液混勻后

7、再加熱蒸餾，直至流出液體積為.降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾，并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾.半微量蒸餾法將試樣消煮液冷卻，加入蒸餾水，轉(zhuǎn)入容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液. 將半微量蒸餾裝置地冷凝管末端浸入裝有硼酸吸收液和滴混合指示劑地錐形瓶內(nèi). 蒸汽發(fā)生器地水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸. 準(zhǔn)確移取試樣分解液注入蒸餾裝置地反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣. 蒸餾降下錐形

8、瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾.注：上述兩種蒸餾法測定結(jié)果相近，可任選一種.蒸餾步驟地檢驗精確稱取硫酸銨，代替試樣，按或步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為土，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確.滴定用上述兩種蒸餾法蒸餾后地吸收液立即用. 或 . 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點.推薦法試樣地消煮稱取試樣 （ 含氮量 ） 準(zhǔn)確至， 放入消化管中，加片消化片（ 儀器自備） 或混合催化劑，硫酸，于下在消煮爐上消化. 取出放涼后加入蒸餾水.氨地蒸餾采用全自動定氮儀時，按儀器本身常量程序進行測定.采用半自動定氮儀時，將帶消化

9、液地管子插在蒸餾裝置上，以硼酸. 為吸收液，加入滴混合指示劑，蒸餾裝置地冷凝管末端要浸入裝有吸收液地錐形瓶內(nèi)，然后向消煮管中加入氫氧化鈉溶液進行蒸餾. 蒸餾時間以吸收液體積達到時為宜降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi).滴定用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點. 空白測定稱取蔗糖，代替試樣，按第七章進行空白測定，消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液地體積不得超過 . 消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積不得超過. 分析結(jié)果地表述計算見下式：式中 : 滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積， ;滴定空白時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積， ；鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，;試樣質(zhì)量， ;試樣分解液總體積，;'試樣分解液蒸

10、餾用體積，;每毫克當(dāng)量氮地克數(shù) ;個人收集整理-ZQ氮換算成蛋白質(zhì)地平均系數(shù) .重復(fù)性每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果.當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在以上時，允許相對偏差為.當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在一之間時，允許相對偏差為.當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在以下時，允許相對偏差為. 脫脂未酶解樣品（）中粗蛋白含量地測定（）. 仲裁法試樣地消煮稱取試樣（ 含氮量 ） 準(zhǔn)確至， 放入凱氏燒瓶中，加入混合催比劑，與試樣混合均勻，再加入硫酸和粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力（ ） 直至呈透明地藍綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少 .氨地蒸餾 （ 蒸餾步驟地檢驗見附錄）常量蒸餾法將試樣

11、消煮液（） 冷卻，加入蒸餾水，搖勻，冷卻. 將蒸餾裝置地冷凝管末端浸入裝有硼酸吸收液和滴混合指示劑地錐形瓶內(nèi). 然后小心地向凱氏燒瓶中加入氫氧化鈉溶液，輕輕搖動凱氏燒瓶，使溶液混勻后再加熱蒸餾，直至流出液體積為 . 降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾，并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾.半微量蒸餾法將試樣消煮液（） 冷卻， 加入蒸餾水，轉(zhuǎn)入容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液. 將半微量蒸餾裝置地冷凝管末端浸入裝有硼酸吸收液和滴混合指示劑地錐形瓶內(nèi). 蒸汽發(fā)生器地水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸

12、. 準(zhǔn)確移取試樣分解液注入蒸餾裝置地反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣. 蒸餾降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾.注：上述兩種蒸餾法測定結(jié)果相近，可任選一種.蒸餾步驟地檢驗精確稱取硫酸銨，代替試樣，按或步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為土，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確.滴定用上述兩種蒸餾法蒸餾后地吸收液立即用. 或 . 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點. 推薦法試樣地消煮稱取試樣 （ 含氮量 ） 準(zhǔn)

13、確至， 放入消化管中，加片消化片（ 儀器自備） 或混合催化劑，硫酸，于下在消煮爐上消化. 取出放涼后加入蒸餾水.氨地蒸餾采用全自動定氮儀. 時，按儀器本身常量程序進行測定.采用半自動定氮儀. 時， 將帶消化液地管子插在蒸餾裝置上，以硼酸 . 為吸收液，加入滴混合指示劑，蒸餾裝置地冷凝管末端要浸入裝有吸收液地錐形瓶內(nèi)，個人收集整理-ZQ然后向消煮管中加入氫氧化鈉溶液進行蒸儲.蒸儲時間以吸收液體積達到時為宜 降下錐形瓶，用蒸儲水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi).滴定用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點 .空白測定稱取蔗糖，代替試樣，按第七章進行空白測定，消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液地體積不 得超過.消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積不得超過.分析結(jié)果地表述計算見下式：式中：滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，滴定空白時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，；鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，；試樣質(zhì)量，；試樣分解液總體積，；試樣分解液蒸儲用體積，； 每毫克當(dāng)量氮地克數(shù)；氮換算成蛋白質(zhì)地平均系數(shù).結(jié)果計算結(jié)果按式()計算()(%)=