細菌總數(shù)測定操作規(guī)程

1、精品文檔細菌總數(shù)檢測操作規(guī)程1原理試樣經(jīng)過處理，稀釋至適當濃度，在一定條件（如使用特定的培養(yǎng)基，在溫度30c 土1C培養(yǎng)72h±3h等）下培養(yǎng)后，所得1g （mL）試樣中所含細菌總數(shù)。2試劑與儀器2.1 所用器具三角燒瓶、玻璃珠、具塞試管、培養(yǎng)皿、1000 nL槍頭、5mL槍頭、稱量勺、接種環(huán)、 接種針、移液器2.2 儀器：分析天平、恒溫培養(yǎng)箱、微型振蕩器、超凈工作臺、高壓滅菌鍋2.3 所用試劑和培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂取營養(yǎng)瓊脂32.0g,加入蒸儲水1L,攪拌加熱 至完全溶解，分裝三角瓶，121c高壓 滅菌15min,備用。3、操作步驟3.1 配制0.85%生理鹽水。稱取氯化鈉8.5g溶于1

2、000mL蒸儲水中。3.2 三角燒瓶加入生理鹽水90mL和玻璃珠，試管中加入生理鹽水 9mL, 121c滅菌30min。 （三角燒瓶個數(shù)與樣品數(shù)量一致，試管數(shù)量與稀釋次數(shù)相關）3.3 將1000仙L槍頭、培養(yǎng)皿、5mL槍頭、稱量勺，121c滅菌30min。（注意計算數(shù)量）3.4 將槍頭、培養(yǎng)皿置于烘箱103c烘干。（1-3步需提前一天完成）3.5 對稱量房間進行紫外滅菌30分鐘，關燈靜置60 min。以無菌操作取樣品10g于含90mL 生理鹽水三角燒瓶中，于振蕩器上振蕩 30min,制成1:10的均勻稀釋液。3.6 用1000仙L槍頭吸取1:10稀釋液1mL,沿管壁慢慢注入含有滅菌生理鹽水 9

3、mL的試管 中，于振蕩器上混合均勻，制成1:100的均勻稀釋液。3.7 另去一只1mL滅菌吸管，按照上述操作方法，彳10倍遞增稀釋，如此每遞增稀釋一次， 即更換一支滅菌吸頭。3.8 選擇2個3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋的吸管移 1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個培養(yǎng)皿。3.9 稀釋液移入培養(yǎng)皿后，及時將涼至46c ±1C的培養(yǎng)基（可放置46C ±1C水浴鍋內(nèi)保 溫）注入培養(yǎng)皿約15mL,小心轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿使試樣與培養(yǎng)基充分混勻 （從稀釋試樣到傾注培精品文檔養(yǎng)時間不能超過30min）。如估計試樣中所含微生物可能在培養(yǎng)基平皿表面生長時，待培

4、養(yǎng)基完全凝固后，可在培養(yǎng)基表面傾注涼至 46 C ±1C的水瓊脂培養(yǎng)基4mL o3.10 待瓊脂凝固后，倒置平皿于30C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h戰(zhàn)h取出，計算平板內(nèi)細菌總數(shù)目，細菌總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即得每克試樣所含細菌總數(shù)。4、細菌總數(shù)計算方法做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察，如菌落形態(tài)較小可借助放大鏡觀察。在計算出各 平板細菌總數(shù)后，求出同稀釋度的兩個平板菌落的平均值。4.1 細菌總數(shù)的報告形式細菌總數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有 效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法修約。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以用 10的指數(shù) 表小。（見表1）4.2 細菌

5、總數(shù)計數(shù)的報告4.2.1 平板細菌總數(shù)的選擇選擇細菌總數(shù)在30-300之間的平板進行細菌總數(shù)測定，每一稀釋度使用兩個平板菌落 的平均數(shù)。兩個平板其中一個平板有較大片狀菌落生長時不宜采用；若片狀菌落不到平板 的一半，而另一半菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全平皿細菌總數(shù)。4.2.2 稀釋度的選擇應選擇平均細菌總數(shù)在3030叱間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例次1）若有兩個稀釋度，其生長的細菌總數(shù)均在 30300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值（高稀釋度數(shù)值：低稀釋度數(shù)值）2,應報告其平均值；若2則報告其中較小的數(shù)字（見表1中例次2及例次3） o若所有稀釋度的平均細菌總

6、數(shù)均大于300,則應按稀釋度最高的平均細菌總數(shù)乘以 稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例次4）。若所有稀釋度的平均細菌總數(shù)均小于30,則應按稀釋度最低的平均細菌總數(shù)乘以稀 釋倍數(shù)報告之（見表1中例次5）。若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋度報告之（見表1中例次6）。若所有稀釋度的平均細菌總數(shù)均不在 30300之間，其中一部分 300,或者小于30 時，則以最接近30或300的平均細菌總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表 1中例次7）。表1稀釋度選擇及細菌總數(shù)報告方式例 次稀釋液及細菌總數(shù)稀釋液 之比稀釋度選擇細菌總數(shù)/CFU/g (mL)報告方式/CFU/g (mL)10-110-210-31多/

7、、 可計16420一取平均細菌總數(shù)在 30300之間 的稀釋度1640016000/1.6 x 1042多不295461.630300 之間，比值(46000:3775038000/3.8 X 104精品文檔可計29500) V 2,報告平均值3多/、 可計271602.230300 之間，比值(60000:27100) > 2,報告較小的數(shù)值2710027000/2.7 X 1044多/、 可計多/、 可計313一所有稀釋度的平均細菌總數(shù)均 大于300,報告稀釋度最高的數(shù)313000310000/3.1 X105527115一所有稀釋度的平均細菌總數(shù)均 小于30,報告稀釋度最低的數(shù)270270/2.7 X 10