國標(biāo)-菌落總數(shù)測定

1、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法.本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測定.2術(shù)語菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下培養(yǎng)后如培基成分、培養(yǎng)溫度和時(shí)間、pH、需氧性質(zhì)等,所得1mLg瀚樣中所含菌落的總數(shù).本方法規(guī) 定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果,只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧 的菌落總數(shù).菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標(biāo)志,也可以應(yīng)用這一方法觀察 細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài),以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù).3引用標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑4設(shè)備和材料4.1 溫箱：36±C.4.

2、2 冰箱：04C.4.3 恒溫水?。?6 ±£.4.4 天平.4.5 電爐4.6 吸管.4.7 xx瓶或三角瓶：容量為500mL.4.8 玻璃珠:直徑約5mm4.9 平皿：直徑為90mm.4.10 試管.4.11 放大鏡.4.12 菌落計(jì)數(shù)器.4.13 酒精燈.4.14 均質(zhì)器或乳缽.4.15 試管架.4.16 滅菌刀或剪子.4.17 滅菌鐐子.4.18 和試劑5.1 營養(yǎng)xx培養(yǎng)基：按 GB 4789.28xx4.7M定.5.2 磷酸鹽緩沖稀釋液：按 GB 4789.28xx3.2颯定5.3生理鹽水.5.475%乙醇.6檢驗(yàn)程序菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序如下.圖略7操作步驟7.1

3、 檢樣稀釋及培養(yǎng)7.1.1 以無菌操作,將檢樣25g或mL潮碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或 其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分 振搖或研磨做成1 ： 10的均勻稀釋液.固體檢樣在參加稀釋液后,最好置均質(zhì)器中以8000100r/min的速度處理1min,做成1 ： 10的均勻稀釋液.7.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1 ： 10稀釋液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL滅 菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液,振搖試 管,混合均勻,做成1 ： 100的稀釋液.7.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作順序,做 10倍遞增稀釋液,如此每 遞增

4、稀釋一次,即換用1支1mL火菌吸管.7.1.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計(jì),選擇 23個(gè)適宜稀 釋度,分別在做10倍遞增稀釋的同時(shí),即以吸取該稀釋度的吸管移 1mL稀釋液 于滅菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿.7.1.5 稀釋液移入平皿后,應(yīng)及時(shí)將涼至 46c營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基可放置于 46 ± C水浴保溫注入平皿約15mL,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻.同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培 養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照7.1.6 待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,置 36±C溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h7.2 菌落計(jì)數(shù)方法做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí),可用肉眼觀查,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺

5、漏.在 記下各平板的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù).7.3 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告7.3.1 平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn).一個(gè)稀釋度使 用兩個(gè)平板,應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù),其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí), 那么不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù),假設(shè)片狀菌 落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù).平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時(shí)菌落之間無明顯界線,假設(shè)僅有一條鏈,可視為一個(gè)菌落；如果有不同來源的幾條鏈,那么應(yīng)將每條鏈作為一個(gè) 菌落計(jì).7.3.2 稀釋度的選擇7.3.2.1 應(yīng)選擇平均菌落

6、數(shù)在30300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之 見表中例1.7.3.2.2 假設(shè)有兩個(gè)稀釋度,其生長的菌落數(shù)均在30300之間,那么視兩者之比方何來決定.假設(shè)其比值小于或等于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；假設(shè)大于2那么報(bào)告其中較小的數(shù)字見表中例2及3.7.3.2.3 假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300,那么應(yīng)按稀釋度最高的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見表中例4.7.3.2.4 假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30,那么應(yīng)按稀釋度最低的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見表中例5.7.3.2.5 假設(shè)所有稀釋度均無菌落生長,那么以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之見表中例6.7.3.2.6 假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 30300之間,其中一局部大于 300或小于30時(shí),那么以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見 表中例7.7.3.3 菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí),按其實(shí)有數(shù)報(bào)告,大于100時(shí),采用二位有效數(shù) 字,在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計(jì)算.為了縮短數(shù)字后面的 零數(shù),也可用10的指數(shù)來表示見表中 報(bào)告方式