組織切片課程設(shè)計(jì)

1、生物制片技術(shù)課程論文鯉魚脾臟組織結(jié)構(gòu)摘要：組織切片方法是教學(xué)、科研、病理檢驗(yàn)工作中廣泛應(yīng)用的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù),所謂組織切片，即取動(dòng)物某一實(shí)體器官上的組織塊用包埋劑包埋，然后進(jìn)行切片及染色的制片過(guò)程。在整個(gè)制片過(guò)程中，包括有取材與固定，脫水與透明，浸蠟與包埋，切片與粘片，染色與封固五大步驟。石蠟切片是組織切片方法中最為簡(jiǎn)單和常用的切片方法，本實(shí)驗(yàn)選擇石蠟切片法制作鯉魚肝臟組織切片。制作時(shí)需對(duì)每一步都必須認(rèn)真對(duì)待，否則將達(dá)不到預(yù)期效果，甚至導(dǎo)致制片工作的徹底失敗。本文就傳統(tǒng)的石蠟組織切片方法進(jìn)行了全面地改進(jìn)試驗(yàn)研究，使組織固定完全，脫水徹底，透明適度，浸蠟充分，切片較薄，染色良好；不僅縮短時(shí)間，簡(jiǎn)化程

2、序，節(jié)省藥液，而且提高了組織切片的質(zhì)量。關(guān)鍵詞：動(dòng)物組織；HE染色；石蠟切片Production and observation of the spleen tissue of fishAbstract: Tissue slice method is a kind of experimental technology .which widely used in teaching, scientific research and pathological examination. So called tissue slices, that is, the body of a solid orga

3、n on the tissue piece with paraffin embedded, and then slice and dyeing of the production process. In the entire production process, including the material and the fixation, dehydration and the transparency, the immersion wax and the embedding, the slicing and the sticky piece, the dye and the seal

4、five big steps. Production, every step must be taken seriously, otherwise it will not achieve the desired results, and even lead to the failure of the production work. In this paper, the traditional method of tissue slicing has been comprehensively improved, which makes the tissue fixed, dehydrated,

5、 transparent and appropriate, the dip wax is sufficient, the slice is thin, and the dyeing is good.Key words: animal tissue; HE staining; Paraffin slice一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,、通過(guò)對(duì)鯉魚的結(jié)構(gòu)觀察，了解魚類的主要特征以及魚類適應(yīng)于水生生活的形態(tài)特征。2、了解生物制片主要方法；3、掌握石蠟切片和H·E染色技術(shù)?；驹O(shè)備及常用試劑二、基本設(shè)備 1、顯微鏡：光學(xué)顯微鏡2、切片機(jī)：輪轉(zhuǎn)式、滑動(dòng)式（平推式）、冰凍式、 振動(dòng)式。均有三組部件安裝在牢固穩(wěn)

6、定的切片機(jī)身上：刀架。組織塊夾具。微動(dòng)調(diào)節(jié)器。3、恒溫箱或干燥箱恒溫箱是切片不可缺少的設(shè)備，主要供浸蠟、烤片、烘烤清洗后的玻璃器皿及某些需要加溫60以上時(shí)應(yīng)用4、冰箱用于保存染液、試劑和藥品并提供切片用冰5、離心機(jī)可供脫落細(xì)胞及染色體技術(shù)用6、切片刀、天平、酸度計(jì)、定時(shí)鐘、一般手術(shù)器械、染色缸、染色架、載玻片、蓋玻片、常用玻璃器皿、毛筆、酒精燈等。三、常用試劑 1、洗液重鉻酸鉀300g 濃硫酸 300ml 自來(lái)水 3000ml，即重鉻酸鉀、硫酸與自來(lái)水之比為1：1：10。 先將重鉻酸鉀溶于水，如加熱須待冷后，再緩緩加入濃硫酸，邊加邊攪。不準(zhǔn)將水倒入濃硫酸內(nèi)！另外，清潔液只能用于玻璃儀器的清洗，

7、不能浸泡金屬器械。 2、蛋白甘油：蛋清打泡，靜置、過(guò)慮，加入等量甘油，充分混合，加入1%麝香草酚或樟腦防腐。 3、鹽酸-酒精：作分色用，100ml的70%酒精加入0.5或1ml濃鹽酸。 4、酒精稀釋液：用95%酒精稀釋使用。如將95%酒精稀為70%酒精時(shí)，可取70ml的95%酒精加水至95ml即成，依次類推。 5、堿性水：0.1%氨水或1%碳酸鋰水溶液 6、10%福爾馬林： 商品甲醛 10ml 水 90ml 7、蘇木精溶液： 甲液：蘇木精2g 無(wú)水酒精20ml 乙液：甲礬40g 蒸餾水400ml 丙液：高錳酸鉀1g 蒸餾水16ml 三液分別溶化，然后將甲液注入乙液，再加丙液6ml，時(shí)時(shí)攪拌，加

8、溫至煮沸0.5-1 min，使速冷卻后即可使用。四、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)材料：新鮮的鯉魚一條1. 殺死與取材：用手術(shù)刀和鑷子按要求迅速找到魚的脾臟，然后取出，要求動(dòng)作迅速。2. 固定：使用小塊組織固定法，取下的小塊組織，立即置入10%福爾馬林固定液中進(jìn)行固定。3. 洗滌：因?yàn)樾〗M織可不沖洗，所以本實(shí)驗(yàn)需要多次換水浸泡即可。4. 脫水：先放入70%酒精中30min，然后80%酒精30min，95%酒精30min, 95%酒精30min, 無(wú)水酒精30min, 無(wú)水酒精30min，5. 透明：比例為1:1的無(wú)水酒精和二甲苯混合（30min），二甲苯20min, 二甲苯10min.6. 浸蠟與包埋：比例比1

9、:1二甲苯和石蠟（30min）,石蠟30min，石蠟30min，包埋。7. 切片：將熔化好的石蠟倒入包埋框或包埋盒，用加溫的鑷子將組織塊切面朝下放入，做好標(biāo)記，冷卻。完全凝固后，修整蠟塊。將切片機(jī)準(zhǔn)備好，調(diào)整好角度，固定好刀架、刀片和蠟塊，切片厚度：6-8m；轉(zhuǎn)速：40至50次/min。8. 染色：二甲苯（5 ' ）1:1二甲苯+無(wú)水酒精（5'）無(wú)水酒精（2'）95%酒精（2'）80%酒精（2'）70%酒精（2'）蘇木精（15'）自來(lái)水洗（2'）1%鹽酸酒精（30''）自來(lái)水藍(lán)化（15'）蒸餾水（2'

10、;） 70%酒精（2'）80%酒精（2'）伊紅（1'）95%酒精（2'）95%酒精（2'）無(wú)水酒精（2'）無(wú)水酒精（2'）二甲苯（2'） 二甲苯（2'）9. 封固：切片經(jīng)染色透明后，取出切片，滴一滴中性樹膠，將蓋玻片蓋于切片上。貼上標(biāo)簽注明名稱、編號(hào)。10. 觀察五、總結(jié)與討論 石蠟切片實(shí)驗(yàn)是細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要部分，迄今為止石蠟切片仍然是疾病診斷，尤其是病變性質(zhì)判斷的重要手段。石蠟切片過(guò)程中，最易受到操作人員實(shí)驗(yàn)技術(shù)影響的步驟是浸蠟、包埋，而且包埋效果直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的好壞。正確應(yīng)用動(dòng)物組織切片技術(shù)與完成動(dòng)物組織切片染色標(biāo)本的制作好壞關(guān)系重大。六、參考文獻(xiàn)1 劉育艷.制作優(yōu)質(zhì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織切片的有效方法. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2001，21（3）：275-276.2 任成林，田勇，梁淑珍.動(dòng)物組織HE染色石蠟切片技術(shù)的改進(jìn), 河北北方學(xué)院學(xué)報(bào).2007，23（1）:41-45.3 袁廣明，胡黎平，李燕，陳大堤，謝富康. 成年斑馬魚石蠟連續(xù)切片的制作和蘇木精-伊紅染色. 解剖學(xué)研究, 2006，28（1）:73-74.4 李華. 淺談制作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織石蠟切片的方法和體會(huì). 2011年全國(guó)病理技術(shù)新進(jìn)展研討會(huì)論文匯編 .2011:171-173.5 何書海，陳宏智，焦鳳超. 動(dòng)物病理組