HSP70和MGMT在乳腺腫瘤中的表達和意義

1、HSP70和MGMT在乳腺腫瘤中的表達和意義 作者：吳榮薇 薄愛華 王發(fā)亮 蘆廣萍【摘要】 目的：探討乳腺腫瘤組織中熱休克蛋白HSP70和DNA修復(fù)酶O6甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（O6methyguanineDNA methytransferase,MGMT）的表達及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測65例乳腺腫瘤組織中HSP70和MGMT的表達情況。結(jié)果：乳腺腫瘤中HSP70的陽性率為80.00%（52/65），MGMT的陽性率為60.00%（39/65），二者呈中度相關(guān)性（r=0.46）。其中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性率高于無轉(zhuǎn)移組（P<0.05）。結(jié)論：HSP70

2、和MGMT的表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。檢測HSP70與MGMT對乳腺腫瘤預(yù)后和化療方案的選擇有指導(dǎo)意義。 【關(guān)鍵詞】 乳腺腫瘤；HSP70熱休克蛋白質(zhì)類；免疫組織化學(xué) 【ABSTRACT】 Objective:To investigate the expression and clinical significance of HSP70 and MGMT in human breast cancer.Methods:The expression of HSP70 and MGMT in the 65 cases with breast cancer was examined by SABC

3、immunohistochemistry.Results:The positive rate of HSP70 was 80.00%(52/65)and the positive rate of MGMT was 60.00%(39/65)in the human breast cancer,and the relationship between HSP70 and MGMT was in the middle degree(r=0.46).The positive rates of HSP70 and MGMT in lymph node metastasis group were hig

4、her than that in group without lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion:The expressions of HSP70 and MGMT are related with lymph node metastasis,and analyzing them clinically has an important guiding significance in the chemotherapy strategy. 【KEY WORDS】 Breast Neoplasms, HSP70 HeatShock Prot

5、eins,Immunohistochemistry 近年來，乳腺癌的發(fā)病率逐年升高，已成為損害女性健康的主要惡性腫瘤之一。目前，主要以手術(shù)切除為主，化療或放療為輔。HSP70和MGMT在腫瘤治療過程中有較大的臨床意義，本文通過檢測65例乳腺癌患者中HSP70和MGMT的表達情況及相關(guān)性，旨在為臨床治療及預(yù)后提供有效的指導(dǎo)方案。 1 材料與方法 1.1 一般資料 河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2004.72007.6月手術(shù)切除乳腺癌標本65例，均為女性，年齡為2172歲，平均年齡為49歲，中位年齡為50歲；左乳36例，右乳29例；浸潤性導(dǎo)管癌40例，浸潤性小葉癌10例（合稱浸潤性乳腺癌共計50例），導(dǎo)

6、管原位癌13例，小葉原位癌2例（合稱非浸潤性乳腺癌共計15例）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例。 1.2 主要試劑 兔抗人HSP70多克隆抗體、兔抗人MGMT多克隆抗體及SABC免疫組織化學(xué)試劑盒均購自武漢博士德生物有限公司。DAB顯色試劑由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。 1.3 方法 常規(guī)免疫組織化學(xué)SABC方法。嚴格按照試劑盒說明書要求進行。每次實驗均以公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。 1.4 結(jié)果判斷 HSP70和MGMT的陽性物質(zhì)均呈棕黃色，分布于癌細胞胞質(zhì)中，近胞膜處著色深。在光鏡視野（×400）下，10個視野平均陽性細胞10%為陽

7、性病例，10%為陰性病例。 1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用2檢驗。以P0.05為組間比較有顯著性差異。相關(guān)性分析采用四格法，相關(guān)系數(shù)0.4r0.7為中度相關(guān)。 2 結(jié)果 HSP70和MGMT在乳腺癌中的陽性率分別80.00%(52/65)和60.00%(39/65),二者的表達與年齡、病理類型和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系見表1，HSP70和MGMT的相關(guān)性見表2。2008年6月吳榮薇等：HSP70和MGMT在乳腺腫瘤中的表達和意義第3期2008年6月河北北方學(xué)院學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）第3期表1 HSP70和MGMT在乳腺癌中的表達與生物學(xué)特性的關(guān)系表2 HSP70和MGMT在乳腺癌中表達的相關(guān)性注：HSP70和

8、MGMT呈中度正相關(guān)（2 =13.48,P<0.01，r=0.46） 3 討論 3.1 熱休克蛋白（HSP）在許多腫瘤中呈高表達1，它可以調(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)的活性和功能，但又不參與靶細胞的組成。所以我們又將其稱為“分子伴侶”或“伴侶蛋白”2。結(jié)合本研究結(jié)果顯示乳腺癌中HSP70陽性率很高（80.00%），可以推測HSP70與原癌基因、抑癌基因及其產(chǎn)物相互作用，可保護腫瘤細胞，維持其無限增生的能力。本研究還發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組HSP70的陽性率為65.63%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（33.33%）。有報告顯示，在胃癌中HSP70的表達與轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)3。這就提示我們，HSP70是癌

9、細胞浸襲力較強的標志物之一。由于HSP70攜帶多種腫瘤抗原，將HSP抗原肽瘤苗用于免疫機體，抗瘤效果非常好4。Casey等5從鼠黑色素瘤中提取HSP70抗原肽，并將其接種到同系小鼠身上，發(fā)現(xiàn)該瘤苗對瘤細胞的攻擊可產(chǎn)生較強的對抗作用。乳腺癌是HSP70高表達腫瘤，有望從中提取HSP抗原肽復(fù)合物，研制瘤苗用于乳腺癌的治療。已有研究表明，肝癌術(shù)后應(yīng)用HSP70抗原肽復(fù)合物疫苗能夠明顯提高病人免疫力，預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)，可提高遠期生存率6。 3.2 人的MGMT基因定位于10q26,編碼的蛋白質(zhì)由207個氨基酸組成，分子量為22KD。本實驗中MGMT在乳腺癌中的陽性率為60.00%(39/65)，其陽性率與

10、年齡及病理類型的相關(guān)性不明顯，與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)（P0.05)。據(jù)報告7，在胃腸癌、卵巢癌和睪丸癌中MGMT均有高表達。MGMT是種高效的DNA直接修復(fù)酶，可以保護細胞免受烷化劑損害。烷化劑主要作用于DNA鳥嘌呤G形成O6mG，后者在DNA復(fù)制過程中與T配對，導(dǎo)致GC配對轉(zhuǎn)換為AT配對，從而導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生。而MGMT能把DNA上O6mG的甲基轉(zhuǎn)換到自身半胱氨酸殘基上，從而修復(fù)甲基化的DNA，而MGMT修復(fù)烷化劑類型的藥物可使腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥。因此，阻斷MGMT可明顯增加烷化劑的療效。由此可見，MGMT一方面能夠保護正常組織免受烷化劑損傷以及二次癌癥的發(fā)生，另一方面還能引起腫瘤組織對

11、烷化劑的抗藥性。因此，檢測癌組織中MGMT的表達對選擇化療藥物有指導(dǎo)意義。 3.3 經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，本實驗中HSP70與MGMT相關(guān)系數(shù)為r=0.46,呈中度正相關(guān)，而且二者的表達情況均與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。這就提示我們HSP70和MGMT均可作為腫瘤惡性程度的生物學(xué)指標。另外可推測，在HSP70高表達的組織中，MGMT的表達也可能增強，提示我們二者可能共同參與了對腫瘤細胞的保護作用，協(xié)同促進了乳腺癌的形成。【參考文獻】 1 Jones EL,Zhao MJ,Stevenson MA.The 70 kilodalton heat shock protein is an inhibitor of

12、 apoptosis in prostate cancerJ.Int J Hyperthermia,2004,20(8):8358492 左東升，薄愛華，常寶,等.熱休克蛋白70在人胃腺癌發(fā)展過程中的表達作用及意義J.中國老年學(xué)雜志,2006，26（2）：1661673 王小平，王巧俠，王軍,等.人胃癌組織中熱休克蛋白70和糖調(diào)節(jié)蛋白94的表達及其意義J.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2007，15（7）：9639654 傅慶國，郭仁宣，姚振宇,等.腫瘤熱休克蛋白70 多肽復(fù)合物誘導(dǎo)特異性細胞毒T淋巴細胞產(chǎn)生的實驗研究J.中華醫(yī)學(xué)雜志，2000，80（4）：3013035 Casey DG,Lysaght J,James T,et al.Heat shock protein derived from a nonautologous tumor can be used as an antitumor vaccineJ.Immunology,2003,110(7):1051116 趙子粼，鄢莉，崔建東，等.熱休克蛋白抗原肽復(fù)合物疫苗預(yù)防肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)32例J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,20