HZ27抑制786—O 細胞的遷移實驗研究

1、 本 科 畢 業(yè) 論 文題 目 HZ27抑制786O 細胞的遷移實驗研究學 院 專 業(yè) 化學制藥 班 級 學 號 學生姓名 指導教師 完成日期 摘要：目的 研究HZ27藥物對于腎癌786O細胞遷移的影響。 方法 本實驗通過采用腎癌786O細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)細胞，腎癌786O細胞傳代方法使細胞增殖，腎癌786O細胞的Transwell的實驗觀察細胞的遷移變化以及腎癌786O細胞的免疫印跡等方法檢測細胞中Rac蛋白的變化情況。 結(jié)果 藥物HZ27抑制Rac蛋白的表達，從而抑制腎癌786O細胞的活性，使其細胞轉(zhuǎn)移能力降低。 結(jié)論 通過研究不同劑量的HZ27藥物對細胞中蛋白質(zhì)Rac的表達進行抑制來達到腎

2、癌細胞遷移能力抑制的結(jié)果，證明Rac蛋白可以抑制腎癌786O細胞的遷移。關(guān)鍵詞：腎癌786O細胞；細胞培養(yǎng)；細胞傳代；Transwell實驗；免疫印跡實驗Abstract: Objective to study the effect of HZ27 drug for renal cell carcinoma in 786-O cell migration.Methods of this experiment through 786-O cell culture method of cell, renal

3、cell carcinoma in 786-O method of cell passage cell proliferation,Kidney cancer 786-O Transwell experimental observations of cell migration changes and renal cell carcinoma in 786-O cells immune blotting detection Changes of Rac protein in cells.Results t

4、he expression of HZ27 drugs inhibit Rac expression, thereby inhibiting renal cell carcinoma in 786-O cells, reduce the cell transfer ability. Conclusion inhibition to achieve renal carcinoma cell migration inhibition results throu

5、gh the expression of HZ27 dose of the study drug on protein in Rac cells. Rac protein can inhibit themigration of proven renal cell carcinoma in 786-O cells.Keywords: Kidney786Ocell;Cell culture method;Cell extend the method;Transwell migration experiment;Western blot目錄

6、1 前言12 實驗部分32.1實驗儀器及試劑32.2腎癌786O細胞的培養(yǎng)實驗32.3腎癌786O細胞的傳代實驗 42.4腎癌786O細胞的Transwell遷移試驗 42.5免疫印跡法檢測腎癌786O細胞中蛋白Rac表達實驗43 結(jié)果與討論53.1 Rac轉(zhuǎn)染786O細胞53.2 細胞活性 5 3.3 Transwell遷移試驗 53.3.1細胞遷移定性分析53.3.2細胞遷移定量分析63.4 免疫印跡試驗84 結(jié)論8參考文獻9謝辭10HZ27抑制786O 細胞的遷移實驗研究醫(yī)藥化工學院 化學制藥專業(yè) 學生： 指導教師： 1 前言目前，我國有數(shù)據(jù)統(tǒng)計國家泌尿系統(tǒng)腫瘤患者中，腎細胞癌患者人數(shù)僅

7、低于膀胱癌患者人數(shù)，居于第二位，可以見得我國腎癌患者的發(fā)病率是非常高的。而這些癌癥患者中患惡性腫瘤的成人占到百分之二，小孩患惡性腫瘤概率高達百分之二十，這引起了社會廣大人士的關(guān)注。腎癌的發(fā)病率非常高，所以早在一百年前就有人對腎癌發(fā)病率做了統(tǒng)計。美國的科學家 Katz 等1在他們的報告中記錄了從1935年到1989 年的腎腫瘤發(fā)病人數(shù)。他們發(fā)現(xiàn)10萬患有腎腫瘤的男性中腎癌發(fā)病人數(shù)從1.6萬人次增長到9.6萬人次, 10萬患有腎腫瘤的女性中腎癌發(fā)病人數(shù)從0.7萬人次升至4.2萬人次，相比之下男性患病人數(shù)遠遠高于女性，這五十幾年間腎癌發(fā)病率有著明顯的增長趨勢。而究其原因這也許和科學技術(shù)的不斷進步脫不

8、了關(guān)系，但增長數(shù)據(jù)如此之大也可以見得腎癌問題日益嚴峻。當然，由于各國各族各個地區(qū)的人們生活習性以及生活方式有所不同，腎癌的發(fā)病率也是各有千秋的。曾有數(shù)據(jù)顯示，亞洲人的腎癌發(fā)病率比歐洲美洲非洲等地區(qū)低。近年來，我國對于腎癌患病人數(shù)做了以下統(tǒng)計：男性患病人數(shù)是女性的二倍；由于體檢普及及醫(yī)療水平不斷進步，無癥狀腎癌的比重大大提高。從腎癌的發(fā)病率我們可以得出以下結(jié)論：研究徹底治療腎癌方法刻不容緩。腎癌最可怕之處便是它容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，這就決定了它死亡率的高低。有報告顯示：類似于腎癌發(fā)病率，亞洲人的腎癌死亡率也比歐洲美洲非洲等地區(qū)低，這可能與遺傳因素有關(guān)。由于腎癌患者在腎癌初期很少有發(fā)生臨床癥狀，百分之九十

9、的患者很難察覺到自己患了疾病。一般地，如果患者出現(xiàn)腰背酸痛，肚子脹痛以及尿血等癥狀時，那這個病人也就有可能已經(jīng)是腎癌晚期2。我國2009年做過調(diào)查，在十萬男性患者中死亡人次有2.37萬，十萬女性患者這死亡人次有1.41萬3。此結(jié)果顯示男性患者死亡率略高于女性患者，且腎癌死亡率較高?，F(xiàn)如今，醫(yī)療設(shè)備不斷提高，醫(yī)療手段不斷進步，體檢系統(tǒng)的不斷完善，讓我們喜而樂見的是腎癌死亡率正在不斷下降。對待腎癌，我們應(yīng)該做到早預防，早發(fā)現(xiàn)，早治療。腎癌導致死亡的最主要因素是其非常容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，而它轉(zhuǎn)移的途徑和部位影響了患者的存活。腎癌的第一種傳播途徑是通過直接浸潤來傳播：腎細胞癌在中晚期會不斷變大，刺出腫瘤外膜

10、向周圍擴大，外向突破其包膜壓迫到與腎相近的肝，脾以及腎上腺，結(jié)腸等器官和組織，內(nèi)向則浸潤到腎盂。第二種途徑是通過淋巴途徑來傳播轉(zhuǎn)移，其中約四分之一的腎癌是經(jīng)過這條途徑傳播：腎癌逐漸長大，右側(cè)擴張到腎門周圍、主動脈下腔靜脈前或間淋巴結(jié)，左側(cè)觸及到主動脈前及它左側(cè)的淋巴結(jié)，部分也可到達主動脈前乃至轉(zhuǎn)移到人體肺部。腎癌最重要的傳播途徑便是血液運輸轉(zhuǎn)移：腎癌細胞擴大觸碰到靜脈，沿著毛細血管、腎內(nèi)部靜脈延伸到腎靜脈，它在靜脈中形成瘤栓，從而可以轉(zhuǎn)移到靜脈進入右心房之中，之后從心房中運用血運轉(zhuǎn)移擴散到骨骼，肺以及其他器官。綜上所述：腎癌轉(zhuǎn)移部位有骨，肝，淋巴結(jié)，肺等。對于早期腎癌經(jīng)過手術(shù)治療治愈后復發(fā)率較

11、低，平均百分之二十左右，因此這類患者應(yīng)該多注意復診；經(jīng)調(diào)查中期或晚期的腎癌在治愈之后復發(fā)率比較高，占到一半以上比例，因此這類患者應(yīng)每隔三個月去醫(yī)院復診一次，及時吃醫(yī)生開的藥，注意均衡營養(yǎng)等。致使腎癌發(fā)病的原因多種多樣，至今尚未完全了解。其中吸煙、喝酒、高血壓、肥胖以及遺傳等都是腎癌發(fā)病的病因。下面就抽煙、激素和輸血三種病因?qū)δI癌發(fā)病進行分析。Tavani 等4對1989到1991年間的包括中國，美國等國家的部分癌癥病人進行調(diào)查，吸煙者較容易發(fā)生腎癌，他們患上腎癌的相對危險因素(RR)=2。大多數(shù)報告顯示吸煙導致人們患上腎癌的原因是煙草，大多數(shù)的煙草是可以致癌的，上述報道中男性腎癌患者多于女性最

12、主要的原因也是男性吸煙人數(shù)比女性多。也許人們不知道有很多激素在人體中是可以引發(fā)癌癥的，比如說倉鼠用己烯雌酚可形成腎皮質(zhì)癌，人們可以從食物中獲取鈣元素減少腎癌發(fā)生的概率。令人難以理解的便是輸血有可能導致腎癌，雖然這個病因有待肯定，但是瑞典有關(guān)報告出21例的腎癌患者，其中曾有過輸血歷史的人發(fā)生腎癌的危險性提高了百分之二十。Prineas等5對美國多位婦女進行了多變量統(tǒng)計分析, 有輸血史在1993年時隨訪38例腎癌患者五年后RR=2.5，但在八年之后RR=1.5，而不能肯定是否曾經(jīng)有輸血過的患者RR卻更高。所以輸血這個病因還有待確定。腎細胞癌常采取手術(shù)切割法治療。它是一種將原發(fā)腫瘤及它轉(zhuǎn)移灶部位完全

13、切除的方法，目前較適用于腎癌中早期患者，對治療腎癌有著至關(guān)重要的作用。近年來，腎細胞癌治療方法的研究有了一定的進展。其中數(shù)免疫治療腎癌，化學藥物治療腎癌的研究較為突出。由于腎癌細胞具有強大的免疫原性，它可以誘使宿主細胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)，增強患者的機體免疫能力，從而幫助患者緩和腎癌對身體的影響，以抑制腎癌細胞的轉(zhuǎn)移。而使用化學藥物治療腎癌則是采用例如氮芥類，鉑類，抗葉酸抑制劑等細胞毒藥物來治療腎癌。研究表明，將細胞毒藥物聯(lián)合使用，比如采用長春花堿與其他藥物聯(lián)合使用治療腎癌的效果高于細胞毒藥物的單一使用，但其毒性較高，不值得提倡。本文研究的是HZ27抑制腎癌786O細胞的遷移。腎癌786O的相關(guān)蛋白R

14、ac介導腫瘤轉(zhuǎn)移的研究有很多。Itoh 等6研究員曾運用了實時對單細胞進行觀察的單分子技術(shù)研究了 Rac蛋白對細胞移動的影響, 由此觀察到在移動細胞里對于Rac的探測定位正不斷的發(fā)生著改變，而且Rac在細胞膜前面不斷聚集, 當細胞改變移動方向時, Rac1的表達就迅速地減少。這個實驗研究表明它與細胞轉(zhuǎn)移是有一定聯(lián)系的。以下便談?wù)勱P(guān)于它介導腫瘤轉(zhuǎn)移的機制：前文中已描述腫瘤轉(zhuǎn)移是原發(fā)腫瘤不斷長大擴張到其他部位的過程。實驗研究發(fā)現(xiàn)，Rac在多種人類常得的腫瘤中呈現(xiàn)高表達現(xiàn)象，它對于細胞骨架結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)有一定輔助作用，當某些例如是表皮生長因子等生長因子對細胞膜相應(yīng)受體有作用時，它便會活化以致調(diào)節(jié)纖維細胞

15、形成片層偽足(與細胞運動能力有關(guān))7。而形成片層偽足的事件也就是Rac介導腫瘤轉(zhuǎn)移的早期研究過程8。吳明富等9的研究報告證實, Rac1 在人腫瘤轉(zhuǎn)移中有關(guān)鍵影響。綜上所述，研究某種化合物藥物以抑制Rac蛋白的作用，從而阻止它介導腫瘤轉(zhuǎn)移是一種必然趨勢。在本次試驗中采用的化合物是HZ27，前期實驗中已經(jīng)證明了這種化合物可以抑制腫瘤細胞的增殖，控制它的增長速度，但是腫瘤最大的危害就是它是否會發(fā)生轉(zhuǎn)移，即這種藥物是否可以控制惡性腫瘤。那么它是否對于腫瘤細胞遷移有抑制作用呢？這還是一個有待探究的問題，值得深思。藥物抑制腫瘤細胞遷移是一種復雜的過程，需要探究實驗得出結(jié)論，以下通過免疫印跡法與Trans

16、well試驗等考察方法來進行探究。2 實驗部分2.1 實驗儀器及試劑 實驗儀器：無菌培養(yǎng)皿，培養(yǎng)瓶，37，5%二氧化碳培養(yǎng)箱，超凈工作臺，顯微鏡，鑷子，離心機，巴氏吸管，酒精燈，Transwell小室，棉簽，電泳儀，蛋白檢測試劑盒，Odyssey 紅外熒光成像儀 實驗試劑：腎癌786O細胞株，75%酒精，PBS溶液，胰酶，10的胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液，33%的醋酸,結(jié)晶紫，甲醛，5%的脫脂奶粉,抗Rac和GAPDH抗體2.2腎癌786O細胞的培養(yǎng)實驗 在無菌培養(yǎng)皿中迅速加入切除所得的腎癌周圍的新鮮的組織樣本，接種于培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶帶入實驗室放入37攝氏度，體積分數(shù)為5的二氧化碳,95

17、%飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)。打開超凈工作臺的紫外燈照射20分鐘，關(guān)閉燈開關(guān)，打開儀器的排風系統(tǒng)，戴上消毒手套，使用在酒精燈上消過毒的鑷子夾取使用百分之七十五的酒精溶液浸過的棉球反復擦拭操作臺桌面。從冰箱中取出培養(yǎng)液與培養(yǎng)瓶以及消毒滴管放入超凈工作臺開始操作。將用酒精燈消毒過的培養(yǎng)瓶中的液體倒出，用巴氏吸管滴入PBS液并對培養(yǎng)瓶的底表面反復吹打清洗，吸取10ml液體，將其在1000轉(zhuǎn)每分鐘的離心機中離心5分鐘，棄去上清液，在培養(yǎng)瓶中加入百分之零點二十五的胰酶對其消化約2分鐘，在離心機1500轉(zhuǎn)每分鐘離心5分鐘，棄去上清液，將它懸于含有10的胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液中，于37攝氏度，體積分數(shù)為5的

18、二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔24個小時在顯微鏡下對細胞生長情況進行觀察和記錄。2.3腎癌786O細胞的傳代實驗 如上所述，在消毒滅菌之后進行實驗操作。將PBS溶液，培養(yǎng)液等放進工作臺中，取出鋪滿底部的腎癌786O細胞，先在顯微鏡下觀察它的生長狀況，當786O細胞形狀由梭形轉(zhuǎn)變成圓形以后，加入百分之十的100g/mL青霉素和100g/mL鏈霉素胎牛血清高糖RPMI1640培養(yǎng)液2ml終止消化，用巴氏吸管輕吹打培養(yǎng)瓶底部待細胞脫落后將細胞混懸液移入10ml離心管，放入離心機中在1500轉(zhuǎn)每分鐘下離心5min，丟掉上清溶液，加入PBS溶液漂洗一次，并將溶液重新懸浮于剛才配好的高糖RPMI1640含血清培

19、養(yǎng)基中，于37攝氏度，體積分數(shù)為5的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔24個小時在顯微鏡下對細胞生長情況進行觀察和記錄。兩天傳代一次，傳代三次。2.4腎癌786O細胞的Transwell遷移實驗 用五十毫克每升的人工基底膜基質(zhì)經(jīng)過1:5倍的稀釋得到的液體覆蓋在Transwell小室底部膜的上表面，在室內(nèi)溫度下使其完全干燥。在Transwell小試的小孔當中滴入吸取到的100L的無血清高糖RPMI1640DMEM培養(yǎng)液，在三十七攝氏度下放置30分鐘左右。然后我們在上室的聚碳酸酯膜的上方加入已經(jīng)稀釋過的一微升中含有3.9微克的腎癌786O細胞培養(yǎng)液30L，在37下把它放置30min，以便于將人工基底膜基質(zhì)聚

20、合生成凝膠10。使用0.25的胰酶消化細胞消化約2分鐘，停止消化后在1500轉(zhuǎn)每分鐘下離心棄去培養(yǎng)液，之后用PBS溶液清洗洗2次，用無血清培養(yǎng)基重懸，并將細胞密度調(diào)整到5×105每毫升，吸取100微升的細胞懸液到Trallwell遷移上室中，在24孔板下室中滴進HZ27溶液，分別為1.67M低劑量藥物，3.3M中劑量藥物，10M高劑量藥物，另設(shè)一組陰性對照組（不加藥物，只加培養(yǎng)液，其他相同），常溫常壓下培養(yǎng)48個小時，用干凈的棉簽輕輕涂掉孔板中的上室內(nèi)的細胞，加入含量體積分數(shù)為百分之四的多聚甲醛，以至于固定三十分鐘后，使用百分之零點一的結(jié)晶紫溶液染色5分鐘，用棉簽將結(jié)晶紫擦拭，運用正

21、置顯微鏡進行觀察以及拍照并記錄,然后使用33%的醋酸將結(jié)晶紫洗脫，分別測得洗脫液的OD值。平行重復三次試驗。2.5免疫印跡法檢測腎癌786O細胞中蛋白Rac表達實驗 將腎癌786O細胞經(jīng)過靶向中劑量藥物轉(zhuǎn)染四十八小時后，被RIPA裂解液中的蛋白酶抑制劑所裂解，從而將細胞中的蛋白質(zhì)給提取出來。蛋白質(zhì)的濃度我們可以通過使用BCA蛋白檢測試劑盒測定。使用6的十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳進行操作，以三十微克每孔的上樣數(shù)量上樣，把被電泳分離得到的蛋白電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上面，用百分含量為五的脫脂奶粉的TBST隔絕空氣室溫下放置一小時，向其中加入稀釋了一千倍的抗Rac和GAPDH抗體，之后分別滴加進稀

22、釋了一千倍的DyLight800對這兩種物質(zhì)進行熒光二抗標記11，在25攝氏度下反應(yīng)約兩小時。進行洗膜操作并使用 Odyssey 紅外熒光成像儀對圖像進行掃描，最后分析結(jié)果時運用Photoshop軟件12。3 結(jié)果與討論3.1 Rac轉(zhuǎn)染786O細胞 Rac蛋白可以轉(zhuǎn)染腎癌786O細胞這在實驗過程中是十分明顯可以觀察到的，如圖一顯示的圖片，實驗觀察中我們在熒光顯微鏡下可以觀察到轉(zhuǎn)染的細胞呈現(xiàn)綠光，轉(zhuǎn)染的概率非常高。3.2 細胞活性 從實驗結(jié)果得到的照片中可知：藥物對Rac蛋白有所抑制后，它轉(zhuǎn)染抑制了Rac蛋白也在同一時間控制了腎癌786O細胞的生長和繁殖。且藥物劑量越高，對Rac蛋白的抑制力越

23、強，對于細胞遷移抑制力越強。3.3 Transwell遷移試驗3.3.1細胞遷移定性分析以下照片分別記錄了使用1.67M低劑量HZ27藥物，3.3M中劑量HZ27藥物，10 M高劑量HZ27藥物作用于細胞和陰性對照在Transwell小試下室中遷移得到的786O細胞數(shù)目。可知高劑量可有效抑制腎癌786O細胞轉(zhuǎn)移，隨著HZ27藥物劑量越高，腎癌786O細胞的轉(zhuǎn)移能力越弱。 陰性對照（Negative control group） 1.67 M低劑量（Low dose 1.67 M） 3.3M中劑量(The dose 3.3 M） 10M高劑量（High dose 10 M）圖1：不同濃度的HZ2

24、7藥物對腎癌786O細胞遷移影響比較（×200）Fig.1 Different concentration of HZ27 drug effects on kidney cancer cell migratin 786-O(×200)3.3.2細胞遷移定量分析上述圖片我們可以定性地觀察到藥物HZ27對腎癌786O細胞遷移影響，下面我們通過對藥物OD值的比較定性地比較不同濃度藥物HZ27對腎癌786O細胞遷移影響。表1：不同濃度的HZ27藥物OD值的比較Table 1 ：The comparison of different concentrations of HZ27 dr

25、ug OD valueOD值次數(shù)劑量陰性對照低劑量1.67M中劑量 3.3uM高劑量10M第一次1.8581.7420.9270.865第二次1.5131.3980.8640.735第三次1.7401.6380.8350.793計算抑制率公式：抑制率%=(1-劑量濃度OD值/陰性對照OD值)*100%以第一次低劑量藥物為例數(shù)據(jù)處理如下:抑制率%=(1-1.742/1.858)*100%=6.24%標準差計算公式：S=(x1-x)2 +(x2-x)2 +.(xn-x)2/n將每一步的計算結(jié)果記錄下面的表格當中：表2：不同濃度的HZ27藥物對腎癌786O細胞遷移的抑制率Table 1 : Diff

26、erent concentrations of HZ27 drugs for kidney cancer inhibition rate of 786-O cell migration抑制率次數(shù)劑量低劑量1.67M（%）中劑量3.3M（%）高劑量10M（%）第一次6.2450.153.4第二次7.6042.951.4第三次5.8652.054.4平均值6.5748.3 53.1標準偏差0.750.400.13 以上表格對于不同濃度的HZ27藥物對腎癌786O細胞遷移的抑制率做了定量分析，從中我們可以從不同濃度抑制率的平均值中了解到隨著藥物劑量的不斷增多，對腎癌786O細胞遷移的抑制率不斷變大，

27、在1.67M3.3M之間的HZ27藥物濃度對腎癌786O細胞遷移的抑制急劇增長，而在3.3M到10M之間的HZ27藥物濃度對腎癌786O細胞遷移的抑制增長緩慢。用平均值計算其標準偏差可見在相同濃度下測得的抑制率有所不同，而在3.3M下的抑制率偏差最大，可見藥物對于細胞轉(zhuǎn)移的控制并不是十分穩(wěn)定。下面對以上數(shù)據(jù)進行定性分析，繪制圖表如下：圖2：不同濃度的HZ27藥物對腎癌786O細胞遷移的抑制率Table 2 : Different concentrations of HZ27 drugs for kidney cancer inhibition rate of 786-O cell migrat

28、ion圖3：不同濃度的HZ27藥物對腎癌786O細胞遷移的抑制率Table 3 : Different concentrations of HZ27 drugs for kidney cancer inhibition rate of 786-O cell migration 上述柱狀圖與折線圖可以定性得表現(xiàn)出從1.67M到3.3M濃度的HZ27劑量對于腎癌786O細胞轉(zhuǎn)移抑制率的影響最大，中劑量藥物濃度與高劑量藥物濃相比度對細胞轉(zhuǎn)移的抑制率差異不明顯。如要選用此種藥物抑制腎癌786O細胞轉(zhuǎn)移，則可以選用中劑量。3.4免疫印跡試驗 10表三：3.3M的HZ27藥物對Rac蛋白表達的影響比較Fi

29、g. 4 : 3.3M HZ27 drugs affect the Rac protein expression蛋白免疫印跡陰性對照組中劑量組RacGAPDH 本次試驗的第一步是將SDSPSGE蛋白樣品Rac與GAPDH兩種蛋白經(jīng)過SDS處理后使得蛋白樣品帶有陰極電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極涌動，第二步是電泳的蛋白質(zhì)Rac與GAPDH使用電轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移到硝酸纖維固體膜上，第三步酶免疫定位將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜分別和特異性抗體和酶標第二抗體作用，加入顯色底物使其染色。由實驗結(jié)果可以看出：1、Rac蛋白在陰性對照組和中劑量組的免疫印跡明顯比GAPDH蛋白淡；2、GAPDH的陰性對照組和

30、中劑量組免疫印跡濃度差不多；3、Rac蛋白陰性對照組免疫印跡比中劑量組濃。從上所述，對于實驗結(jié)果分析如下：第一種結(jié)果的原因是在細胞中蛋白樣品GAPDH的表達強過Rac的表達；第二種結(jié)果發(fā)生的原因是HZ27藥物不能抑制GAPDH 蛋白的表達，所以其陰性對照組和中劑量組的實驗結(jié)果相同；出現(xiàn)第三種結(jié)果的原因是HZ27藥物可以作用于Rac蛋白，以抑制Rac蛋白的表達，使中劑量組的免疫印跡比陰性對照組淡。4 結(jié)論 （一）HZ27可以有效抑制Rac蛋白的表達，以抑制腎癌786O細胞的遷移。 （二）中劑量3.3M的HZ27適用于抑制腎癌786O細胞的遷移。參考文獻：1Katz DL , Zheng T , Holford TR, et al.Time trends in the incidence of renal carcinoma:analysis of Connecticut Tumor Registry data , 1935-1989.Int J Cancer, 1994, 5857-63.2Decastro GJ,McKiernan JM. Epidemiology,clinical staging,and presentation of renal cell carcinoma.Urol Clin North Am,2008,35:581-592.3張永貞,楊國慶,