茶黃素的提取與檢測

1、茶黃素的提取與檢測一、試驗(yàn)樣品本次實(shí)驗(yàn)的原料是茶黃素。茶黃素是存在于紅茶中的一種金黃 色色素，是茶葉發(fā)酵的產(chǎn)物。在生物化學(xué)上，茶黃素是一類多酚羥 基具茶駢酚酮結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。茶黃素占干茶重量的0.5%到2%取決于紅茶加工的方法。茶黃素在茶湯中鮮亮的顏色和濃烈的口感方面，起到了一定的作用，是紅茶的一個(gè)重要的質(zhì)量指標(biāo)。茶黃素是第一次從 茶葉中找到具有確切藥理作用的化合物。二、試驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x茶黃素是紅茶的主要成分之一，是多酚類物質(zhì)氧化聚合形成的一 類只有苯并卓酚酮結(jié)構(gòu)的植物酚性色素的總稱。 迄今為止，已從紅茶 及多酚類物質(zhì)氧化聚合物中分離鑒定出 25種茶黃素類物質(zhì)。茶黃素 具有調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防心血管疾病的

2、功效，而且無毒副作用。被譽(yù)為 茶葉中“軟黃金”的茶黃素有降血脂、抗氧化、抗病毒、抗癌的獨(dú)特 功能，茶黃素不但能與腸道中的膽固醇結(jié)合減少食物中膽固醇的吸 收，還能抑制人體自身膽固醇的合成。在食品（著色劑等）、醫(yī)藥和 日用化工等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。是一種極具開發(fā)潛力的茶葉天 然產(chǎn)物。研究開發(fā)茶黃素的提取制備技術(shù)意義重大。三、色素結(jié)構(gòu)特征和性質(zhì)茶黃素是以多酚類物質(zhì)、兒茶素、氨基酸和咖啡堿為主要成分， 還含有氨基酸、維生索C、維生素E、維生素A原、黃酮及黃酮醇等。其分子結(jié)構(gòu)見下:HOH茶黃素耐熱性，抗氧化性好。有人試驗(yàn) 0.2%茶黃色素溶液，置 不同溫度的水浴加熱30分鐘。溫度升高85°

3、 C,色素溶液的色澤及 吸光度變化不大。高于85100° C時(shí)，才發(fā)生變化，色澤變橙黃。用 酸敗測定儀(Ran cimat)測定其油脂氧化誘導(dǎo)期，來表示色素的抗氧 化性，測定結(jié)果表明：茶黃色素對(duì)豬油和菜籽色拉油都表現(xiàn)出較強(qiáng)的 抗氧化性。茶黃色素隨溶液的PH值變化，色澤有點(diǎn)變化。試驗(yàn)結(jié)果為，加 入1%勺茶黃色素，在檸檬酸和Na2HPO4調(diào)PH在暗處放置一小時(shí)， 溶液的色澤從pH=39依次為亮黃-橙黃-橙-橙紅。說明茶黃色素 適用于偏酸性及中性環(huán)境中使用在堿性環(huán)境中易發(fā)生氧化褐變。金屬離子對(duì)茶黃色素也有影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 Cu 2使色素液發(fā) 藍(lán)；Fe3 使溶液發(fā)褐；Sn2使溶液色澤變淺；

4、Mg2'和Al3對(duì)色素沒影 響。四、實(shí)驗(yàn)試劑、儀器和其他輔助材料1試劑：磷酸二氫鈉、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙酸一乙酸鈉緩沖液、 油酸、無水乙醇、IBMK溶液；2. 儀器：鐵架臺(tái)、鐵環(huán)、分液漏斗、研缽、蒸發(fā)皿、石棉網(wǎng)、酒精燈（或電熱套）、燒杯、剪刀、濾紙、漏斗、布氏漏斗、玻璃棒、1cm比色皿、Unicam sp 1800型分光光度計(jì)；3. 其他輔助材料：氧氣五、試驗(yàn)方法和步驟1. 茶黃素粗提物的制備：方法一：體外酶促氧化制備法一一茶鮮葉勻漿懸浮發(fā)酵法茶鮮葉勻漿懸浮發(fā)酵法的工藝流程為：茶鮮葉-破碎-發(fā)酵-過 濾-濃縮稱取0.2g茶鮮葉，用剪刀剪碎，在研缽中充分研磨后加入少量 蒸餾水，配成溶液

5、后加兩滴乙酸一乙酸鈉緩沖液和兩滴油酸（氧載體） 構(gòu)成懸浮發(fā)酵體系進(jìn)行發(fā)酵（發(fā)酵過程中采取先高溫后逐步降低溫 度、降低pH值和早期充分供氧），發(fā)酵56min后停止發(fā)酵。取出發(fā) 酵后的液體于燒杯中，過濾 23次，收集過濾后濾紙上的物質(zhì)于蒸 發(fā)皿中，用小火蒸到快干時(shí)停止，靜置，自然晾干；或者用布氏漏斗 抽濾。方法二：溶劑浸提法（Ullah ）用適量的磷酸二氫鈉與乙酸乙酯混合萃取，茶紅素能全部被固定在水相中，而茶黃素被固定在有機(jī)相中，紅茶用80°C水溶液浸提5min,過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮，再經(jīng)三氯甲烷萃取，除去咖啡堿等 雜質(zhì)，然后用磷酸二氫鈉和乙酸乙酯混合萃取三次，乙酸乙酯層經(jīng)減壓濃縮干燥，

6、得茶黃素粗提物。該方法簡單，只需一次萃取，但仍然 存在使用有機(jī)溶劑較多的問題。2. 茶黃素的精制：乙酸乙酯萃取 -回收溶劑-茶黃素將茶黃素的粗產(chǎn)品溶于蒸餾水中，在分液漏斗中加入適量的乙酸 乙酯，再將茶黃素的水溶液緩緩倒入分液漏斗中，靜置分層，將下層液體放出到小燒杯中，在分液漏斗中繼續(xù)加入少量乙酸乙酯，再靜置取下層液體合并萃取液。六、色素的檢測分光光度法：在一只具塞試管中加入萃取液并加入2倍于萃取液體積的IBMK, 起劇烈震蕩1min，分層后取清夜加到2%茶黃素乙 醇溶液和無水乙醇的混合溶液中。將綠色茶黃素一茶黃素試劑絡(luò)合物 放置15min至反應(yīng)完全。以IBMK 茶黃素試劑一乙醇混合液作空 白參

7、比液用Uni cam sp 1800 型分光光度計(jì)，1cm比色皿及625波 長測定吸光度根據(jù)Beer定律方程式計(jì)算茶黃素含量：Tf 'mmol= fnA 937 0.024 fnA (1)式中，n表示提取稀釋因數(shù)，f=47.9，是n=1時(shí)的摩爾換算因數(shù)。七、預(yù)測結(jié)果和分析在供試的茶鮮葉中，蘋云較好，櫧葉齊次之，在以蘋云冷凍葉為酶 源制取的茶黃素含量達(dá)33.737 %，制率達(dá)42.22 %，非冷凍葉的茶黃素 達(dá)14.5 %，制率為72.22 % .雙液相試驗(yàn)研究表明，不同的酶源對(duì)雙液相 體系的試驗(yàn)效果不同，就茶鮮葉而言，采用雙液相效果明顯比單液相 顯著.在雙液相系統(tǒng)中，非冷凍葉制取茶黃素其總含量達(dá)49.308 %，制率為59.44 %.不同緩沖液試驗(yàn)研究表明，在利用茶鮮葉制取茶黃素時(shí)， 從茶黃素含量來看，乙酸一乙酸鈉緩沖液要比檸檬酸一磷酸氫二鈉緩 沖液好些，但從得率來看，前者比后者要低預(yù)計(jì)此次試驗(yàn)提取出的茶 黃素含量應(yīng)為42%49%，即稱量的0.2g茶鮮葉可提取出的茶黃素 為8498mg，最終只有85%茶黃素與茶黃素試劑生成綠色絡(luò)合物， 產(chǎn)量只有71.483.3mg。八、參考文獻(xiàn)1. 劉仲華，黃建安；茶黃素兒茶素生物制備酶促氧化單液相雙液相學(xué)位論文碩士 ; 20042. 夏濤,蕭偉祥;茶鮮葉勻漿懸浮發(fā)酵工藝學(xué)研究期刊論文；安徽農(nóng) 業(yè)大學(xué)學(xué)