丙酮酸的測定方法_第1頁
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文檔簡介

1、實驗七 丙酮酸含量的測定一、實驗目的掌握植物組織中丙酮酸含量測定的原理和方法。二、實驗原理 植物樣品中的組織液，用三氯乙酸去蛋白質(zhì)后，其中所含的丙酮酸可與2,4 二硝基苯肼作用，生成丙酮酸 2,4 二硝基苯腙，后者在堿性溶液中呈櫻紅色， 其顏色可用分光光度計測量， 與已知丙酮酸標準曲線進行比較， 即可求得樣品中 丙酮酸的含量。三、實驗器材與試劑1、. 實驗器材分光光度計；研缽；具塞刻度試管：20mLX8;容量瓶：100mL X2移液管：1mLX 15mLX4 ;量筒：10mLXl；離心機；天平；大蒜、大蔥或洋蔥2、試劑（ 1 ） 8%三氯乙酸 （當日配制置冰箱中備用 ）2）1.5mol/L 氫

2、氧化鈉（3）0.1%2,4 二硝基苯肼：稱取2.4 二硝基苯肼100mL溶于2mol/LHCI中配成100mL溶液，盛入棕色試劑瓶，保存于冰箱內(nèi)。（4）丙酮酸鈉四、實驗操作步驟1. 丙酮酸標準曲線的制作:稱取丙酮酸鈉7.5mg于燒杯中，用8%E氯乙酸溶解，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，并 用8%E氯乙酸定容，此液為60卩g /mL的丙酮酸原液。取6支試管，按下表數(shù)據(jù)配制不同濃度的丙酮酸標準液:管？號123456丙酮酸原液量（mL00.61.21.82.43.08%三氯乙酸量（mL3.02.41.81.20.60丙酮酸濃度（卩g/mL）01224364860在上述各試管中分別加入1.0mL0.1%的2

3、,4 二硝基苯肼，搖勻，再加5mL1.5moI/L的氫氧化鈉溶液，搖勻顯色，在 520nm波長下比色。做標準曲線。2. 植物樣品組織液的提取:稱取植物樣品（大蒜、大蔥或洋蔥）5g，于研缽中加入少許石英沙及少量 8%三氯乙酸，仔細研成勻漿，再用8%E氯乙酸洗入100mL容量瓶中（沙留在研缽內(nèi)），定容至刻度。靜置30 min,取10mL勻漿液離心(4000r/min ) 10min,取上清液備用。3. 組織液中丙酮酸的測定取3mL上清液于一刻度試管中，加 2mL8三氯乙酸，力卩I.OmLO.1%的2,4 二硝 基苯肼溶液，搖勻，再加5mL 1.5mol/L氫氧化鈉溶液，搖勻顯色。在 520nm波 長下比色，記錄吸光度，在標準曲線上查得丙酮酸的含量。五、結(jié)果處理樣品中頁酮驗

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