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文檔簡介
1、選考內(nèi)容 選修1 第2講1(2009廣東,38)根據(jù)學(xué)過的知識回答下列問題:(1)商品化植酸酶主要來自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中,常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板,植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生_,可根據(jù)其大小選擇目的菌株,所得菌株需要進一步測定植酸酶活性。活性測定可用植酸鈉作為底物,活性可用一定條件下單位時間_表示。(2)利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖:發(fā)酵液純酶菌體去除透析液()去除中的主要成分為_;中包含多種酸酶等多種蛋白質(zhì)。請寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。_(3)為建設(shè)基因工程菌,可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包含多次循環(huán),
2、每次循環(huán)包括三步:_。反應(yīng)過程中打開模板DNA雙鏈的方法是_。(4)除植酸酶外,微生物還應(yīng)用在_的生產(chǎn)中。答案(1)透明圈植酸鈉的消耗量(肌醇和磷酸的生成量)(2)小分子雜質(zhì)凝膠色譜法,根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小、吸附性質(zhì)等差異進行純化。電泳法,根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷、分子大小等差異進行純化。(3)變性,復(fù)性,延伸加熱(4)蛋白酶,脂肪酶,纖維素酶解析本題考查對微生物的分離和培養(yǎng),蛋白質(zhì)的純化,酶活性鑒定等知識,結(jié)合實際應(yīng)用。2利用纖維素解決能源問題的關(guān)鍵,是高性能纖維素酶的獲取。請完善實驗方案,并回答相關(guān)問題?!緦嶒?zāi)康摹勘容^三種微生物所產(chǎn)生的纖維素酶的活性。【實驗原理】纖維素酶催化纖維素分解為葡萄
3、糖,用葡萄糖的產(chǎn)生速率表示酶活性大?。挥贸噬磻?yīng)表示葡萄糖的生成量。【實驗材料】三種微生物(AC)培養(yǎng)物的纖維素酶提取液,提取液中酶蛋白濃度相同。【實驗步驟】(1)取四支試管,分別編號。(2)在下表各列的一個適當位置,填寫相應(yīng)試劑的體積量,并按表內(nèi)要求完成相關(guān)操作。管號試劑(mL)1234蒸餾水1.41.41.4pH7.5的緩沖液0.20.20.2纖維素懸浮液0.30.30.3微生物A提取液0.1微生物B提取液微生物C提取液0.1總體積2.02.02.02.0(3)將上述四支試管放入37的水浴,保溫1小時。(4)在上述四支試管中分別加入_試劑,搖勻后,進行_處理。(5)觀察比較實驗組的三支試管
4、與對照組試管的顏色及其深淺?!緦嶒灲Y(jié)果】微生物A提取物微生物B提取物微生物C提取物顏色深淺程度【分析討論】(1)該實驗中的對照組是_號試管。(2)實驗組試管均呈現(xiàn)的顏色是_,但深淺不同。(3)上述結(jié)果表明:不同來源的纖維素酶,雖然酶蛋白濃度相同,但活性不同。若不考慮酶的最適pH和最適溫度的差異,其可能原因是_。(4)你認為上述三種微生物中,最具有應(yīng)用開發(fā)價值的是_。(5)從解決能源問題的角度考慮,開發(fā)這種纖維素酶的意義在于_。答案實驗步驟(2)管號試劑(mL)1234蒸餾水1.5pH7.5的緩沖液0.2纖維素懸浮液0.3微生物A提取液微生物B提取液0.1微生物C提取液總體積(4)班氏加熱(加熱
5、至沸騰)【分析討論】(1)4(2)磚紅色(3)不同酶的氨基酸序列不同(不同酶的空間結(jié)構(gòu)不同)(4)微生物B(5)葡萄糖可用作制取酒精的原料;用纖維素代替化石能源(言之有理即給分)解析本題實驗?zāi)康氖潜容^三種微生物所產(chǎn)生的纖維素酶的活性。根據(jù)實驗?zāi)康拇_定自變量為不同微生物提取液,因變量為葡萄糖的生成量,其余無關(guān)因素(如不同微生物的提取液量、pH7.5的緩沖液量、蒸餾水量和纖維素懸浮液量)應(yīng)該等量。實驗結(jié)果通過與班氏試劑共熱生成磚紅色沉淀的顏色深淺程度進行判斷,分析實驗結(jié)果可知,微生物B提取物與班氏試劑發(fā)生顏色反應(yīng)最深,最具有研究價值。該實驗采用的是空白對照,即不加任何微生物提取液的4號試管為對照組
6、。不同來源的纖維素酶,雖然酶蛋白濃度相同,但活性不同。若不考慮酶的最適pH和最適溫度的差異,其可能原因是不同酶的空間結(jié)構(gòu)不同。開發(fā)纖維素酶的意義在于葡萄糖可用作制取酒精的原料;用纖維素代替化石能源,只要合理即可。3(2011山東理綜,34)生物柴油是一種可再生的清潔能源,其應(yīng)用在一定程度上能夠減緩人類對化石燃料的消耗??茖W(xué)家發(fā)現(xiàn),在微生物M產(chǎn)生的脂肪酶作用下,植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油(如下圖)。(1)用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā),宜選用_、_方法從油料作物中提取。(2)篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時,選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供_,培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是_法。(3)測定培
7、養(yǎng)液中微生物數(shù)量,可選用_法直接計數(shù);從微生物M分離提取的脂肪酶通常需要檢測_,以確定其應(yīng)用價值,為降低生物柴油生產(chǎn)成本,可利用_技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。(4)若需克隆脂肪酶基因,可應(yīng)用耐熱DNA聚合酶催化的_技術(shù)。答案(1)壓榨;萃取。(注:兩空順序無先后)(2)碳源;高壓蒸汽滅菌。(3)顯微鏡直接計數(shù);酶活性(或:酶活力);固定化酶(或:固定化細胞)。(4)PCR(或:多聚酶鏈式反應(yīng),聚合酶鏈式反應(yīng))解析本題考查了植物油的提取、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用及基因的克隆技術(shù)。對于不易揮發(fā)的植物油,一般采用壓榨法或萃取法;植物油由C、H、O三種元素構(gòu)成,微生物通常以此作為碳源,培養(yǎng)基常規(guī)的滅菌方法是高
8、壓蒸汽滅菌;測定微生物生長的方法很多,常用的是平皿菌落計數(shù)法、計數(shù)器法和比濁法,其中計數(shù)法常用計數(shù)器測定法,可利用顯微鏡進行觀察計數(shù);固定化酶是用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的,酶固定化后一般穩(wěn)定性增加,易從反應(yīng)系統(tǒng)中分離,且易于控制,能反復(fù)多次使用,便于運輸和貯存,有利于自動化生產(chǎn);基因的擴增通常采用PCR技術(shù)。4發(fā)酵法生產(chǎn)酒精后的廢液(pH 4.3)含有大量有機物,可用于培養(yǎng)、獲得白地霉菌體,生產(chǎn)高蛋白飼料。培養(yǎng)、制取白地霉菌體的實驗過程示意圖:請據(jù)圖分析回答問題:(1)實驗過程中培養(yǎng)白地霉的培養(yǎng)基是_。培養(yǎng)基定量分裝前,先調(diào)
9、節(jié)_,分裝后用棉塞封瓶口,最后_處理。(2)圖中過程稱為_,從甲到乙的培養(yǎng)過程是為了_。白地霉的代謝類型為_。(3)為確定菌體產(chǎn)量,圖中操作之前,應(yīng)先稱量_的質(zhì)量。過濾后需反復(fù)烘干稱量,直至_。所獲菌體干重等于_。答案(1)廢液上清液pH滅菌(2)接種擴大培養(yǎng)異養(yǎng)需氧型(3)濾紙恒重(質(zhì)量基本不變)恒重時質(zhì)量與濾紙質(zhì)量之差(答案合理均給分)解析(1)培養(yǎng)基制備的流程是:確定營養(yǎng)成分調(diào)節(jié)pH滅菌處理,該實驗過程中,由圖示信息可知,白地霉的培養(yǎng)基來自廢液沉淀處理后所獲得的廢液上清液。(2)圖示是將白地霉菌種接種到培養(yǎng)基的過程。甲到乙的過程是菌種擴大培養(yǎng)。白地霉的培養(yǎng)基含有大量的有機物,推斷其同化作
10、用為異養(yǎng)型。培養(yǎng)瓶開口,且培養(yǎng)過程不斷振蕩,則白地霉異化作用為需氧型。(3)由實驗過程示意圖可知,通過濾紙過濾,再烘干稱重來確定菌體產(chǎn)量,實驗結(jié)束后所稱重量不僅有菌體的,還有濾紙的,所以濾液過濾之前應(yīng)先稱量濾紙的質(zhì)量。菌體的產(chǎn)量是通過菌種干重體現(xiàn)的,所以過濾后需反復(fù)烘干,蒸發(fā)掉水分,直至質(zhì)量基本不變,才能確定為干重,最后求得菌體干重恒重時的質(zhì)量濾紙質(zhì)量。5苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì),自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚,為了降解廢水中的苯酚,研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株,篩選的主要步驟如圖所示,為土壤樣品。請回答下列問題:(1)中培養(yǎng)目的菌株
11、的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入_作為碳源,中不同濃度碳源的培養(yǎng)基_(A.影響;B.不影響)細菌的數(shù)量,如果要測定中活細菌數(shù)量,常采用_法。(2)為對照,微生物在中不生長,在中生長,與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_;使用_法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)?_。(3)如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小?_。(4)實驗過程中如何防止其它微生物的污染?_。答案(1)苯酚A平板菌落計數(shù)(活菌計數(shù)或菌落計數(shù))(2)含除苯酚外的其他碳源,以苯酚作為唯一碳源平板分離(稀釋涂布平板或平板劃線分離)避免培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長(3)用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株,一定時間后,測定培養(yǎng)液中
12、苯酚含量(4)培養(yǎng)基滅菌,接種環(huán)境滅菌,接種過程無菌操作解析考查考生對微生物的分離、培養(yǎng)、數(shù)量測定、無菌操作等基本技術(shù)的掌握和應(yīng)用所學(xué)知識解決實際問題的能力。苯酚作為選擇培養(yǎng)基的特殊碳源,是可降解苯酚的微生物的能源物質(zhì),所以苯酚濃度會影響其生長。測定培養(yǎng)液中活細菌數(shù)目常用平板菌落計數(shù)法。6(2011汕頭)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上,常需要進行微生物的培養(yǎng)和計數(shù)。(1)下圖是利用_法進行微生物接種,把聚集的菌種逐步_分散到培養(yǎng)基的表面,為達到這一目的,操作上應(yīng)注意:(至少答2項)_。(2)分析下面培養(yǎng)基的配方:NaNO3、KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、KCI、H2O。若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)
13、分解尿素的細菌,則應(yīng)除去上述_成分,并加入葡萄糖和_。(3)三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數(shù)量。在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中,得到以下統(tǒng)計結(jié)果:甲同學(xué)涂布了兩個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)是236和260,取平均值248。乙同學(xué)涂布了三個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)是210、240和250,取平均值233。丙同學(xué)涂布了三個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)是210、212和256,取平均值163。在三位同學(xué)的統(tǒng)計中,只有一位同學(xué)的統(tǒng)計是正確的,指出另兩位同學(xué)的統(tǒng)計為什么不正確?_。答案(1)平板劃線稀釋每次劃線前要灼燒;冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃;首尾區(qū)不重疊(2)NaNO3尿素(3)甲同學(xué)只涂布了兩個平板
14、,實驗數(shù)據(jù)說服力不夠;丙同學(xué)其中一個平板的計數(shù)結(jié)果與另兩個相差太遠,說明操作過程出現(xiàn)錯誤,數(shù)據(jù)缺乏正確性7為了實現(xiàn)燃料供應(yīng)來源多樣化,發(fā)展長期替代化石燃料的產(chǎn)品如燃料酒精、生物柴油、沼氣等已經(jīng)列入了我國未來10年的發(fā)展計劃。廣東省是我國甘蔗的主產(chǎn)區(qū)之一。甘蔗是一種高光效的C4植物,單位面積產(chǎn)量很高,種植面積日益擴大,目前已成為南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為:甘蔗榨汁(蔗糖)酵母發(fā)酵蒸餾成品(燃料酒精)。請根據(jù)上述材料,回答下列問題:(1)簡述甘蔗大規(guī)模快速繁殖技術(shù)的過程。(2)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種,對野生酵母菌進行誘變后通過篩選
15、可以得到具有這些特性的突變菌,誘變及篩選過程如下:步驟1:野生菌液體培養(yǎng)一段時間后接受紫外線照射誘變處理。步驟2:制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,注意_和_,加瓊脂后滅菌,制成固體平板。步驟3:將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。步驟4:根據(jù)_篩選出突變菌。(3)上述步驟2、3和4的依據(jù)分別是_。(4)利用獲得的突變菌和蔗汁進行酒精實驗,除了將培養(yǎng)基滅菌、保持空間潔凈外,發(fā)酵過程中防止外來雜菌入侵還有哪些可行的方法?(列舉兩種)(5)甘蔗榨汁以后還有大量的蔗糖廢棄物,主要成分為木質(zhì)素、纖維素和半纖維素,但是酵母菌無法直接利用,原因是其_。請?zhí)岢鼋鉀Q該問題的方法。(列舉兩種方法)(6)突變菌
16、往往帶有一些特殊的基因。在獲得這些基因的過程中,PCR技術(shù)相當重要。PCR擴增反應(yīng)中加入引物和DNA聚合酶的作用分別是什么?答案(1)選取甘蔗外植體,通過誘導(dǎo)脫分化產(chǎn)生愈傷組織,然后調(diào)整植物激素比例,再分化形成芽和根,獲得大量試管苗(或通過誘導(dǎo)大量形成胚狀體,制成人工種子,適宜條件下萌發(fā)成幼苗)。(2)添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調(diào)低pH值是否能在選擇培養(yǎng)基上生長(3)提供高糖和酸性的篩選環(huán)境獲得單菌落能生長代表該菌落具有耐高糖和耐酸的特性(4)利用突變菌的耐酸特性,降低培養(yǎng)基的pH值達到抑菌目的;利用突變菌的耐高糖特性,通過高滲環(huán)境達到抑菌目的;保持厭氧環(huán)境,達到抑菌目的;在培養(yǎng)基中添加一些抑制
17、物如特殊的維生素,達到抑菌目的;(5)缺乏相應(yīng)的分解酶系(或缺乏纖維素和半纖維素酶)在酵母菌中轉(zhuǎn)入分解酶系相關(guān)基因,利用酶或微生物分解蔗糖渣;利用物理和化學(xué)方法分解蔗渣;將酵母菌與其他能分解蔗渣的微生物混合發(fā)酵。(6)引物的作用是結(jié)合在模板DNA上,提供DNA延伸起始位點;DNA聚合酶的作用是從引物的3端開始催化DNA的延伸。解析(1)快速繁殖甘蔗可采用組織培養(yǎng)的方法。(2)要篩選耐高糖和耐酸的菌種,培養(yǎng)基中必須加入高濃度蔗糖和調(diào)低pH值。能在此選擇培養(yǎng)基上生長的即為所需菌種。(3)步驟2是給其提供高糖或酸性的篩選過程;步驟3是為了獲得單菌落;步驟4是根據(jù)能生長的菌株具有耐高糖和耐酸的特性篩選
18、出突變菌。(4)防止雜菌入侵的辦法有多種,詳見答案。(5)酵母菌不能分解木質(zhì)素、纖維素等物質(zhì),是因為其體內(nèi)缺少相應(yīng)的酶,解決辦法詳見答案。(6)PCR擴增反應(yīng)中加入的產(chǎn)物和DNA聚合酶的作用見答案。8下面是某小組的同學(xué)為證明細菌對植物遺體的分解作用提出的兩種實驗方案,他們將同一種樹的落葉分成甲、乙兩組,實驗過程中不斷地滴加蒸餾水,使葉片保持濕潤。方案一:將甲組放在無菌條件下,乙組放在自然條件下(暴露在空氣中),觀察記錄落葉的變化。方案二:將甲組滅菌后放在無菌條件下,乙組放在自然條件下(暴露在空氣中),觀察記錄落葉變化。(1)上述兩種實驗方案能否達到實驗?zāi)康??說明理由。方案一:_;方案二:_。(2)甲、乙兩組實驗為什么要用相同的落葉?_。(3)現(xiàn)在由你進行實驗設(shè)計,請寫出實驗方案。_。答案(1)方案一:不能。甲、乙均未進行滅菌處理,甲組落葉會被分解從而失去對照作用,在自然條件下,空氣中不僅含細
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