藥物依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

1、藥物依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則指導(dǎo)原則編號ZH G P T317羥色胺受體.N-膽堿受體.丫-氨基丁酸受體.苯二氮 卓受體等受體的藥物；5 .已知代謝物中有依賴性成份；6 .擬用于戒毒的藥物；7 .原認(rèn)為不具依賴性，而在臨床研究或臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)有依 賴性傾向的藥物。（二）受試物1 .中藥.天然藥物依賴性試驗(yàn)擬用受試物應(yīng)能充分代表擬臨 床試驗(yàn)受試物或擬上市藥品，因此該受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定. 符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，并附有研制單位的自檢報 告。一般采用中試樣品，并注明受試物的名稱.來源.批號.含量 （或規(guī)格）.保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充 分的理由。如果由于給藥容量或給藥

2、方法限制，可采用原料藥進(jìn) 行試驗(yàn)。試驗(yàn)中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明批號.規(guī)格及生產(chǎn)廠 豕。2 .化學(xué)藥物依賴性試驗(yàn)的受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定.符合 臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，并注明受試物的名稱.來源.批號. 含量（或規(guī)格）.保存條件及配制方法等，并附有研制單位的自檢 報告。所用輔料.溶媒等應(yīng)標(biāo)明批號.規(guī)格和生產(chǎn)廠家，并符合試 驗(yàn)要求。（三）試驗(yàn)系統(tǒng)1 .選擇試驗(yàn)系統(tǒng)的依據(jù)為了獲得科學(xué)有效的依賴性信息，應(yīng) 選擇最適合的動物模型或其他試驗(yàn)系統(tǒng)。選擇試驗(yàn)系統(tǒng)的因素包 括試驗(yàn)系統(tǒng)的藥效學(xué)反應(yīng)，如敏感性.特異性和重現(xiàn)性；受試物的 背景資料，如藥效學(xué).藥代動力學(xué)等特點(diǎn)；試驗(yàn)動物的種屬.品系. 性別和年齡等

3、。如果選擇特殊的試驗(yàn)系統(tǒng)，應(yīng)說明原因。2 .實(shí)驗(yàn)動物常用實(shí)驗(yàn)動物包括小鼠.大鼠.猴等，一般情況下 選用雄性動物，必要時增加雌性動物。通常選用大.小鼠，對于高 度懷疑具有致依賴性潛能的藥物，而嚙齒類動物試驗(yàn)結(jié)果為陰 性，則應(yīng)選擇靈長類動物。動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要 求。3 .離體試驗(yàn)系統(tǒng)離體試驗(yàn)系統(tǒng)可用于支持性研究（如研究藥 物的活性特點(diǎn)和作用機(jī)理）。常用離體試驗(yàn)系統(tǒng)主要包括：離體 器官.組織.細(xì)胞.亞細(xì)胞器.受體.離子通道和酶等。（四）給藥劑量依賴性研究應(yīng)在一個較寬的劑量范圍內(nèi)進(jìn) 行，可根據(jù)不同的試驗(yàn)方法和目的選擇不同的給藥劑量。一般采 用主要藥效ED50的倍數(shù)遞增或最小有效劑量的倍數(shù)遞

4、增，同時結(jié) 合藥物的溶解性.毒性及對運(yùn)動功能.學(xué)習(xí)能力和記憶能力的影響 來設(shè)計劑量。每個試驗(yàn)至少應(yīng)設(shè)三個劑量組。（五）給藥途徑原則上給藥途徑應(yīng)和臨床一致，盡可能增加 靜脈給藥途徑。由于模型的選擇或者考慮到以后可能的非臨床濫 用的不同給藥途徑，也可考慮增加其他給藥途徑。（六）對照組 應(yīng)設(shè)立陽性對照和溶媒對照組，如受試物需采 用特殊的溶媒溶解，還應(yīng)增設(shè)空白對照。如果受試物為較純的單 一化合物，與其母核結(jié)構(gòu)類似的化合物具有明顯的依賴性，則還 應(yīng)選擇此化合物為陽性對照藥。（七）試驗(yàn)要求 藥物依賴性研究一般包括神經(jīng)藥理學(xué)試驗(yàn). 軀體依賴性試驗(yàn)和精神依賴性試驗(yàn)三部分內(nèi)容。1 .神經(jīng)藥理學(xué)試驗(yàn)如有早期的體外

5、依賴性試驗(yàn)，所獲陽性試 驗(yàn)結(jié)果還應(yīng)通過體內(nèi)研究來進(jìn)一步確認(rèn)（除1.1 的情況外）?？衫蒙窠?jīng)藥理學(xué)方法，對行為學(xué)效應(yīng)和神 經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行測定，初步判斷受試物有無依賴性傾向，這些內(nèi)容可 通過藥效學(xué)試驗(yàn).一般藥理學(xué)試驗(yàn)或毒理學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行觀察，具體方 法不再列出。1.1 一般情況下，充分揭示藥物的藥理特性之后，還需要進(jìn)行 進(jìn)一步潛在軀體依賴性和精神依賴性的研究。同時出現(xiàn)下述三種 情況除外：（1）在有效濃度范圍內(nèi)，藥物與依賴性相關(guān)的分子 靶點(diǎn)無相互作用，或者雖然觀察到藥物與相關(guān)靶點(diǎn)的結(jié)合，但這 種結(jié)合不會引起相應(yīng)的功能變化。（2）體內(nèi)研究結(jié)果未顯示出潛在依賴性。（3）未發(fā)現(xiàn)此藥物具有可能與依賴有關(guān)的新的作用

6、機(jī)制。第3頁共14頁2 . 2戒斷反應(yīng)觀察主要注意事項(xiàng)a.給藥劑量.頻率和周期應(yīng)該 使動物產(chǎn)生神經(jīng)適應(yīng)性反應(yīng)。b .戒斷反應(yīng)的觀察應(yīng)該有足夠時間 和頻度，并且注意給藥前后的自身比較。c .自然戒斷和催促戒斷 兩種方式都需進(jìn)行，但可在不同動物模型上進(jìn)行。d .盡可能采 用儀器檢測的客觀指標(biāo)。e .有依賴性的藥物在戒斷后往往表現(xiàn) 出反跳現(xiàn)象（急性藥理學(xué)作用相反的癥狀），在選擇觀察指標(biāo)時 加以注意。3 .精神依賴性試驗(yàn)具有精神依賴性的藥物能促使用藥者周期 性或連續(xù)性地出現(xiàn)感受欣快效應(yīng)的用藥渴求，但這是一種主觀體 驗(yàn)，只能間接用藥物所導(dǎo)致的動物行為改變來反映。常選用的方 法有：自身給藥試驗(yàn).藥物辨別試

7、驗(yàn).條件性位置偏愛試驗(yàn).行為敏 化試驗(yàn)。3.1 方法 猴自身給藥試驗(yàn) 大鼠自身給藥試驗(yàn) 大鼠條件性位 置偏愛試驗(yàn)小鼠條件性位置偏愛試驗(yàn)大鼠藥物辨別試驗(yàn)小鼠行 為敏化試驗(yàn) 大鼠行為敏化試驗(yàn) 也可采用其他的方法，但需加以 說明。3 . 2精神依賴性研究主要注意事項(xiàng)：c.在自身給藥試驗(yàn)中需 要注意藥物毒副作用相關(guān)的無應(yīng)答期（動物表現(xiàn)出覓藥行為之前 的一段時間）.增加劑量的時間點(diǎn)和替代的程序。d .自身給藥試 驗(yàn)中，盡可能結(jié)合軀體依賴性試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計合適的劑量，并至 少變換三次劑量。e .在條件性位置偏愛實(shí)驗(yàn)中應(yīng)使用平衡的實(shí)驗(yàn) 設(shè)計，避免動物天然傾向性影響。4 .體外依賴性試驗(yàn)（A）依賴性研究項(xiàng)目的選

8、擇 為了獲得足夠的藥物依賴性信息，藥物依賴性研究內(nèi)容的選擇需要參考藥效學(xué).一般藥理學(xué)及其 他毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果，同時至少應(yīng)進(jìn)行軀體依賴性試驗(yàn)（自然戒斷 和催促戒斷）和一項(xiàng)精神依賴性試驗(yàn)。有強(qiáng)烈精神活性并擬用于 改變精神神經(jīng)活動的藥物，應(yīng)有靈長類動物試驗(yàn)數(shù)據(jù)。（九）依賴性研究的階段性1 .對于可能存在依賴性的單一化合物：體內(nèi)神經(jīng)藥理學(xué)研究 應(yīng)該在I期臨床試驗(yàn)前完成。在早期非臨床或臨床研究中觀察到 的安全性信息可以為進(jìn)一步非臨床依賴性研究提供參考工更進(jìn)一 步的軀體依賴性和精神依賴性試驗(yàn)觀察應(yīng)在II期臨床試驗(yàn)開始前 完成。必要時需進(jìn)行體外試驗(yàn)和依賴性的機(jī)理探討。2 .對于中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑：中藥

9、有效部位或中藥 復(fù)方制劑成份復(fù)雜，作用靶點(diǎn)多，體外試驗(yàn)結(jié)果參考意義有限。 體內(nèi)神經(jīng)藥理學(xué)研究結(jié)果對于判斷是否具有依賴性有一定的意 義，但其結(jié)果的評價往往有較大的難度和局限。體內(nèi)依賴性試驗(yàn) 應(yīng)作為中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑依賴性考察的主要方法。對于需進(jìn)行藥物依賴性研究的中藥有效部位或中藥復(fù)方制 劑，應(yīng)在II期臨床開始前提供全面的體內(nèi)依賴性試驗(yàn)的相關(guān)數(shù) 據(jù)。O結(jié)果分析與評價在對所得到的非臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析 與評價時，一般應(yīng)從以下幾方面進(jìn)行考慮：1 .統(tǒng)計學(xué)差異與生物學(xué)差異的問題。統(tǒng)計學(xué)差異可判斷受試 物對考察的試驗(yàn)結(jié)果是否存在影響，但由于樣本數(shù)的限制，有時 可能掩蓋真正的生物學(xué)差異，故樣本數(shù)應(yīng)足

10、夠充分，同時，還應(yīng) 注意對每個樣本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。對于統(tǒng)計學(xué)上的差異，還應(yīng) 結(jié)合動物的正常反應(yīng)加以分析。2 .陽性藥的選擇。盡可能選擇結(jié)構(gòu)相似和/或作用機(jī)理相似的 合適陽性藥。3 .對動物異常行為出現(xiàn)的時間.持續(xù)時間及作用強(qiáng)度的觀察。4 .所選擇的動物是否合適，模型是否可靠。5 .分析所選擇指標(biāo)的靈敏性.特異性和可靠性。6 .對具體試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評估及整體評估。7 .比較產(chǎn)生依賴性的劑量與有效劑量.中毒劑量的關(guān)系。8 .分析是否存在耐受性，及耐受與依賴的關(guān)系。9 .根據(jù)藥物擬定的適應(yīng)癥.有效性，綜合分析繼續(xù)進(jìn)行臨床研 究的可行性?？傊?，在對藥物潛在依賴性風(fēng)險評估中，應(yīng)充分利用所有的 非臨床研究

11、數(shù)據(jù)，并結(jié)合藥學(xué).藥理學(xué)和臨床研究信息，進(jìn)行科學(xué) 客觀的分析和綜合評價，以判斷是否具有潛在依賴性。四.參考文獻(xiàn)藥物依賴性試驗(yàn)，新藥（西藥）臨床前研究指 導(dǎo)原則匯編（藥學(xué).藥理學(xué).毒理學(xué)）。中華人民共和國衛(wèi)生部藥 政局，1993:219-221藥物依賴性試驗(yàn)，徐叔云主編，藥理實(shí)驗(yàn)方 法學(xué)，第三版，人民衛(wèi)生出版社。北京，2002： 251-258Guideline on the Non-Clinical Investigation of DependencePotential of Medicinal Products. EMEA,xx五.附錄（一）軀體依賴性試驗(yàn)1 .小鼠跳躍試驗(yàn)（催促戒斷試驗(yàn)）

12、（1）原理：短期內(nèi)重復(fù)大 劑量給藥，然后注射阿片受體拮抗劑，如受試物屬于阿片類藥 物，則動物發(fā)生跳躍反應(yīng)，跳躍次數(shù)可反應(yīng)依賴性程度。（2）動物：健康小鼠。（3）實(shí)驗(yàn)步驟：藥物劑量常按遞增法，有時也配合采用恒量 法，給藥總量可按鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)計算。連續(xù)給藥數(shù)天（根據(jù)藥 物鎮(zhèn)痛作用的強(qiáng)弱確定給藥時間），末次藥后2h （以嗎啡為例） 腹腔注射納絡(luò)酮，觀察30min內(nèi)的跳躍動物數(shù)及跳躍次數(shù)，還可 觀察lh內(nèi)的小鼠體重減輕程度。2 .大鼠體重減輕試驗(yàn)（自然或催促戒斷試驗(yàn)）（1）原理：阿 片類藥物的戒斷癥狀出現(xiàn)后，大鼠體重減輕，但非阿片類鎮(zhèn)痛藥 和鎮(zhèn)靜催眠藥則無明顯作用。阿片類戒斷后大鼠體重急劇下降，

13、 以戒斷后24-48h最明顯，是考察阿片類身體依賴性的較好指標(biāo)。（2）動物：健康大鼠。（3）實(shí)驗(yàn)步驟：自然戒斷試驗(yàn)每天早.晚相同時間測定大鼠體 重，每次測重后按體重給藥，每天2次，連續(xù)給藥數(shù)周。劑量根 據(jù)LD50和ED50及給藥途徑制定。末次給藥后每隔一定時間測量 體重1次，比較停藥后不同時間的體重變化。（按體重給藥，每 天2-3次，連續(xù)給藥4周。劑量根據(jù)LD50和ED50及給藥途徑制 定。原則低劑量應(yīng)高于藥效學(xué)有效劑量，高劑量應(yīng)盡可能高，但 不能出現(xiàn)毒性反應(yīng)。末次藥后每天測量體重2-3次（與給藥次數(shù) 相同），計算平均值，比較停藥前后不同時間的體重變化。催促 戒斷試驗(yàn)以劑量遞增法給藥，連續(xù)給藥

14、1周，末次藥后2h注射拮 抗劑，在2h內(nèi)每隔30min測量體重1次，比較體重下降百分率。 也可同時觀察大鼠給藥后行為變化和體溫及自發(fā)活動的變化情 況，并以第1次給藥至反復(fù)給藥1周內(nèi)為重要。（4）結(jié)果評價：如戒斷后大鼠體重急劇下降，則反應(yīng)受試藥具 有身體依賴性。3 .大鼠替代試驗(yàn)（替代試驗(yàn).交叉軀體依賴性試驗(yàn)）（1）原 理：阿片類藥物都有基本相同的藥理作用，給動物阿片類藥物并 使之產(chǎn)生身體依賴性后停藥，代之以受試藥，觀察動物是否發(fā)生 戒斷癥狀。（2）動物：健康大鼠。（3）實(shí)驗(yàn)步驟：摻食法連續(xù)給以嗎啡使動物產(chǎn)生身體依賴性， 5天后以生理鹽水.嗎啡或不同劑量受試藥代替，每8h給藥1次， 連續(xù)6次。替

15、代前（基礎(chǔ)值）及替代后每隔4h測定體重1次，計 算各組大鼠的體重變化，比較替代藥物組和嗎啡依賴組之間的差 異。（4）結(jié)果評價：按等效鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)計，比較達(dá)到同樣替 代程度的受試藥的劑量和嗎啡的劑量，可以確定受試藥物的身體 依賴性潛力的強(qiáng)弱程度。對體內(nèi)代謝迅速.皮下給藥不易形成依賴 性的藥物，用摻食法誘發(fā)依賴性可以獲得較明確的結(jié)果。4 .大鼠攻擊試驗(yàn)（自然或催促戒斷試驗(yàn)）（1）原理：大鼠對 阿片類藥物形成依賴性后停藥或用拮抗劑催促，可發(fā)生戒斷癥 狀，易與同籠大鼠發(fā)生相互攻擊（一般停藥后72h最明顯，24h時 極不明顯；具有間斷性的特點(diǎn)，可連續(xù)幾小時甚至幾天）。（2）動物：健康大鼠。（3）實(shí)

16、驗(yàn)步驟：按遞增劑量給藥，連續(xù)數(shù)天，如有依賴性， 則停藥后大鼠出現(xiàn)體重減輕.搖體.眼瞼下垂及扭體等戒斷癥狀； 此時如將大鼠同居一籠，則出現(xiàn)嘶叫.對陣和相互攻擊現(xiàn)象，甚至 受傷致死。一般于停藥后第3天進(jìn)行試驗(yàn)（將動物同居一籠）， 觀察lh,記錄對陣時程和嘶叫，以及攻擊和互咬次數(shù)。（4）結(jié)果評價：本試驗(yàn)可反應(yīng)嗎啡成癮后腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)系 統(tǒng)的功能。停藥后戒斷癥狀是多巴胺功能亢進(jìn)的表現(xiàn)，多巴胺受 體激動劑可增強(qiáng)攻擊反應(yīng)。所以注意排除藥物對多巴胺功能的干 擾所產(chǎn)生的假陽性或假陰性。5 .戒斷癥狀的記分評定（自然或催促戒斷試驗(yàn)）（1）原理： 動物長期獲得阿片類藥物后，其中樞神經(jīng)系統(tǒng)能產(chǎn)生一種適應(yīng)狀 態(tài)，停

17、藥或注射拮抗劑后機(jī)體出現(xiàn)一系列生理干擾現(xiàn)象即戒斷癥 狀。對這些戒斷癥狀的輕重程度進(jìn)行綜合評分即可判斷藥物的身 體依賴性潛力。(2)動物：常用大鼠和猴。其中阿片類藥物在猴上的依賴性表 現(xiàn)與人較接近，戒斷癥狀比較明顯且易于觀察。(3)實(shí)驗(yàn)步驟：按劑量遞增法并配合恒量法給藥，也可用拮抗 劑納絡(luò)酮催促戒斷。自然戒斷或催促戒斷后觀察一系列戒斷癥 狀，根據(jù)戒斷癥狀的嚴(yán)重程度和持續(xù)時間進(jìn)行綜合評分。(4)結(jié)果評價：戒斷癥狀的綜合評分目前尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，可 對戒斷癥狀進(jìn)行全面綜合評分，也可對其中主要戒斷癥狀進(jìn)行綜 合評分。猴戒斷癥狀可分為輕.中.重.極重4個等級，每一等級的 評分可根據(jù)癥狀種類的多少和出現(xiàn)的頻率

18、定分，但不能大于級差 分值。依賴性潛力的大小可依據(jù)等效依賴性劑量來判斷，即產(chǎn)生近 似依賴狀態(tài)的劑量來判定，也可按相同的等效鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)劑 量來比較。本方法同時也可進(jìn)行替代試驗(yàn)?？稍谧匀换虼叽俳鋽嘣囼?yàn)中 觀察。附錄(二)精神依賴性試驗(yàn)1 .自身給藥試驗(yàn)(1)原理：藥物的精神依賴性可產(chǎn)生對該藥 的渴求，對覓藥行為和用藥行為具有強(qiáng)化效應(yīng)。本試驗(yàn)?zāi)M人的 行為，通過壓桿方式來獲得藥物，反映藥物的強(qiáng)化效應(yīng)，可信度 較高且可進(jìn)行定量比較。(2)動物：常用大鼠和猴。(3)實(shí)驗(yàn)步驟：動物麻醉后無菌條件下行靜脈插管并用馬甲 背心固定，連接彈簧保護(hù)套及轉(zhuǎn)軸，彈簧套內(nèi)硅膠管與插管相 連，轉(zhuǎn)軸使動物在籠內(nèi)能自由

19、活動，轉(zhuǎn)軸另一端與恒速注射泵及 儲藥系統(tǒng)相連。術(shù)后常規(guī)抗感染，恢復(fù)4-7天后進(jìn)行踏板訓(xùn)練， 使動物形成穩(wěn)定的自身給藥行為。試驗(yàn)過程中注意保持套管暢 通。如藥物具有強(qiáng)化效應(yīng)，動物經(jīng)過短期訓(xùn)練后產(chǎn)生穩(wěn)定的自身 給藥行為，能自動踩壓踏板接通注藥裝置將藥物注入體內(nèi)。(4)結(jié)果評價：通過觀察是否形成自身給藥行為來判斷藥物 是否具有強(qiáng)化效應(yīng)；由于動物個體差異較大，建議將每只動物自 身給藥前后踏板次數(shù)變化的百分率進(jìn)行組間統(tǒng)計。本試驗(yàn)中也可同時進(jìn)行替代試驗(yàn)。通過更換受試藥的劑量，比較它們在等效ED50倍數(shù)劑量條件 下的踏板次數(shù)或比較產(chǎn)生類似踏板模式的藥物劑量，即可反映受 試藥的精神依賴性的強(qiáng)度。本試驗(yàn)設(shè)計適用

20、于靜脈給藥，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意藥物穩(wěn)定性和配 藥時間的關(guān)系。如受試藥為口服給藥，則不需進(jìn)行手術(shù)，而僅將 每次踏板的反應(yīng)變?yōu)榻o一次口服制劑即可。2 .大鼠藥物辨別試驗(yàn)(1)原理：依賴性藥物使人產(chǎn)生的情緒 效應(yīng)如欣快.滿足感等，屬于主觀性效應(yīng)。具有主觀性效應(yīng)的藥物 可以控制動物的行為反應(yīng)，使之產(chǎn)生辨別行為效應(yīng)。本試驗(yàn)可準(zhǔn) 確判斷受試藥是否屬于阿片類藥物，以及產(chǎn)生精神依賴性潛力大 小。(2)動物：常用大鼠。(3)實(shí)驗(yàn)步驟：利用辨別試驗(yàn)箱和訓(xùn)練程序訓(xùn)練動物正確壓 桿，然后通過辨別訓(xùn)練訓(xùn)練動物產(chǎn)生穩(wěn)定準(zhǔn)確地辨別嗎啡和生理 鹽水的能力。最后進(jìn)行替代試驗(yàn)，以不同劑量嗎啡和受試藥進(jìn)行 替代，觀察壓桿正確率與劑量之間的關(guān)系，做出劑量-效應(yīng)曲線， 求得藥物辨別刺激的半數(shù)有效劑量(ED50,值越小精神依賴性潛 力越大)。(4)結(jié)果評價：藥物辨別刺激ED50值越小反映精神依賴性潛 力越大；如替代藥物不產(chǎn)生訓(xùn)練藥物反應(yīng)，則說明該藥不屬于嗎 啡類藥物。本試驗(yàn)不適用于阿片類拮抗劑。由于藥物