高效毛細(xì)管電泳技術(shù)測定肌苷口服液的含量

1、高效毛細(xì)管電泳技術(shù)測定肌苷口服液的含量楊迎迎孫發(fā)山王磊張玉奎(大連醫(yī)科大學(xué)大連116027(中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所大連116011提要介紹了應(yīng)用高效毛細(xì)管電泳技術(shù)測定肌苷口服液含量的方法。實(shí)驗(yàn)是將肌苷口服液直接進(jìn)樣,以硼酸2硼酸鹽為緩沖溶液。實(shí)驗(yàn)的回收率為9510%9918%,相關(guān)系數(shù)019985,精密度的變異系數(shù)小于5%。方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高。關(guān)鍵詞高效毛細(xì)管電泳,肌苷,肌苷口服液分類號(hào)O658 R911前言肌苷是輔酶類藥物,它能參與體內(nèi)能量代謝及蛋白質(zhì)的合成,具有提高各種酶(特別是輔酶A的活性及改善機(jī)體代謝作用。其含量的測定無論是在臨床檢驗(yàn)、藥物分析還是在生產(chǎn)制備等方面都具

2、有重要意義,一般常用紙色譜2紫外法測定,此法重現(xiàn)性差,操作復(fù)雜。近幾年,用高效液相色譜法1,2、反相離子對色譜法3等測定肌苷含量均有報(bào)道。本文參閱文獻(xiàn)4,采用高效毛細(xì)管電泳技術(shù)將肌苷口服液直接注入毛細(xì)管中進(jìn)行測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該法簡便快捷,靈敏可靠。2實(shí)驗(yàn)方法211儀器與試劑21111儀器P A CE5010全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀。Go ld軟件控制儀器的操作和數(shù)據(jù)采集(美國Beck2 m an儀器公司。21112藥品與試劑硼砂、硼酸(均為分析純,二次蒸餾水,肌苷標(biāo)準(zhǔn)對照品(大連白玉山制藥廠,肌苷口服液(大連白玉山制藥廠,批號(hào)9501003,SD S。212電泳條件毛細(xì)管:75m×47

3、c m(有效長度40c m;緩沖液:80mmo l L硼酸2硼酸鹽緩沖液加50mmo l L SD S,pH8.72;電壓:20kV;電流:6813A;檢測: 254nm;進(jìn)樣:315kPa×1s;柱清洗:每次進(jìn)樣前分別用011mo l L N aOH、二次蒸餾水、緩沖液各沖洗1m in。213標(biāo)準(zhǔn)對照品的配制精確稱取肌苷標(biāo)準(zhǔn)對照品100m g,加入二次蒸餾水,制成濃度為10g L的對照品溶液。將此對照品溶液精確配制成濃度為011,012,0125,014,015g L 的標(biāo)準(zhǔn)系列。3結(jié)果與討論311峰面積與濃度的線性關(guān)系按上述方法進(jìn)行測定,回歸方程Y=0.327X-0.1077,r

4、=0.9985,標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),濃度Y(g L與峰面積X(AU×m in呈良好的線性關(guān)系 。圖1肌苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線F ig11Calibration curve of i nosi nu m312精密度測定取標(biāo)準(zhǔn)系列中一種濃度(012g L的溶液,每天重復(fù)測定5次,連測5天,得到峰面積的日內(nèi)及日間差異分別為312%,314%,變異系數(shù)均小于5%,說明本法具有良好的精密度。313回收率測定在上述條件下,在測得的樣品中進(jìn)行了回收實(shí)驗(yàn),重復(fù)4個(gè)樣品測定,數(shù)據(jù)列于表1中。表中X+S =9719+2137,說明本法具有較好的準(zhǔn)確度。第15卷第1期色譜V o l.15N o.1 1

5、997年1月CH I N ESE JOU RNAL O F CHROM A TO GRA PH Y January1997本文收稿日期:1995209201,修回日期:1996201229表1回收率實(shí)驗(yàn)Table 1Recovery of the methodN o .加入量A dded( g L 測得量Found (g L 回收率R ecovery (%平均回收率A verage recovery(%0.5000.49999.897.9圖2肌苷口服液HPCE 譜圖F ig 12Separation of i nosi ne i n oral ton ic1.肌苷(ino sinum 。314

6、樣品的測定取肌苷口服液5瓶,傾出內(nèi)容物,混勻,稀釋25倍進(jìn)樣,譜圖見圖2。肌苷口服液理論標(biāo)示量10g L ,實(shí)驗(yàn)測得1014g L ,百分標(biāo)示量103%。4結(jié)語本方法能快速、簡便、準(zhǔn)確地測定肌苷口服液的含量,測定結(jié)果重現(xiàn)性好,變異系數(shù)均小于5%。實(shí)驗(yàn)證明,方法可行。參考文獻(xiàn)1Grune T il m an ,Siem s W erner G et a l .J Ch rom atogr ,1991;553(122:1932Gam berini G ,Feri o li V ,Zano li P et a l .Ch rom a 2tograph ia ,1992;34(11212:5633L

7、azzarino Giaseppe ,D i P iero Donato ,T avazzi Barbaraet a l .A nal B i ochem ,1991;197(1:1914M iyake M ,Sh ibukaw a A ,N akagaw a T .J H igh R eso 2lut Ch rom atogr ,1991;14:181D eterm i na tion of I nosi ne i n Ora l Ton ic by H igh Performance Cap illary ElectrophoresisYang Y ingying ,Sun Fashan

8、,W ang L ei 3and Zhang Yuku i3(D ep art m ent of Che m istry ,D alian M ed ical U niversity ,1160273(D alian Institu te of Che m ical P hy sics ,the Ch inese A cad e m y of S ciences ,D alian ,116011Abstract T h is paper describes a h igh perfo r m ance cap illary electropho resis m ethod fo r the a

9、ssay of ino sine in o ral tonic .T he m ethod emp loyed a bo ric acid 2bo rate buffer so luti on w ith SD S and UV detecti on at 254nm .T he cap illary w as 47c m ×75m i .d .Calibrati on curve show s good linearity .T he recovery of ino sine ranged from 95.0%299.8%w ith a coefficient of variati on (CV of 2.4%(n =4.T h is m ethod is si m p le