六雙波長分光光度法

1、典型實驗教學(xué)案例簡介案例 x 雙波長分光光度法測定復(fù)方磺胺甲噁唑片中兩組分含量 藥物的含量測定是藥物質(zhì)量控制的重要方面。紫外分光光度法以其準(zhǔn)確 度、靈敏度高，簡便快速等特點(diǎn)，成為藥物含量測定的重要方法。紫外法測定 含量時，常選擇被測組分的最大吸收波長最為測定波長， 以提高檢測的靈敏度。 當(dāng)用紫外法測定復(fù)方制劑多組分中一種組分的含量時，共存組分常常也會有吸 收干擾，此時，消除干擾就成為準(zhǔn)確測定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。雙波長分光光度法作為 計算分光光度法的一種，就是消除干擾、實現(xiàn)多組分含量同時測定的一種有效 手段。本實驗就以復(fù)方磺胺甲噁唑片為實驗對象，通過雙波長分光光度法測定 其兩組分的含量，從而達(dá)到學(xué)習(xí)雙波

2、長法的原理和操作的目的。一、實驗?zāi)康?掌握雙波長分光光度法的測定原理。 2熟悉雙波長分光光度法在復(fù)方制劑分析中的應(yīng)用。二、實驗原理當(dāng)吸收光譜重疊的a b兩組分共存時，若要消除a組分的干擾測定b組分， 可在a組分的吸收光譜上選擇兩個吸收度相等的 刀和0測定混合物的吸光度差 值。然后根據(jù) 從值計算b的含量。SMZ在257nm波長處有最大吸收，TMP在此波長吸收最小并在304nm波長附 近有一等吸收點(diǎn)，故選定257nm為SMZ的測定波長（圖1）,在304nm波長附近 選擇參比波長。TMP在239nm波長處有較大吸收，此波長又是 SMZ的最小吸收峰，并在 295nm波長附近有一等吸收點(diǎn)，故選定239n

3、m為測定波長（圖2），并規(guī)定在此 波長附近選擇供測定的參比波長。由于參比波長對測定影響較大，故采用對照 品溶液來確定。此波長可因儀器不同而異，測定時應(yīng)仔細(xì)選擇。圖I SMZ紫外吸收圖譜1. TMP(0.2 卩 g/ml); 2.SMZ(10.0 卩 g/ml);3. SMZ+TMP; 4.輔料圖2 TMP紫外吸收圖譜1. TMP(5.0 卩 g/ml); 2.SMZ(25.0 卩 g/ml);3. SMZ+TMP; 4.輔料三、儀器與試劑1. 主要儀器：紫外-可見分光光度計；100mL容量瓶2. 主要試劑：磺胺甲噁唑和甲氧芐啶對照品；0.4%氫氧化鈉溶液；0.1mol/L 鹽酸溶液；氯化鉀四、

4、實驗步驟1. 磺胺甲噁唑的含量測定(1) 平均片重測定：10片，精密稱定(2) 供試品溶液配制：片劑精密稱取片粉(約 50mg SM Z, 10mg TMP)過濾溶解、定容100m（3）對照品溶液配制100mL乙醇0.4%NaOH定容 2.00ml對照液（1） L100mL10mg TMP對照品乙醇定容0.4%NaOH2.00ml對照液（2） L（3）取對照品溶液（2）的稀釋液，以257nm為測定波長（在304nm 波長附近（每間隔0.5nm）選擇等吸收點(diǎn)波長為參比波長（入），要求 A= A入2 （2） A入 1（2）= 0,再在22與九兩波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶 液（1）的

5、稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（4A），計算，即得。2. 甲氧芐啶的含量測定（1） 稀釋液配制：取上述供試品溶液與對照品溶液 （1）、（2）各，分 別置于100mL容量瓶中，各加HCI-KCI溶液（0.1mol/LHCI 75mL + 6.9gKCI，力卩 水至1000mL），稀釋至刻度，搖勻。（2）參比波長選定：取對照液（1）的稀釋液，以239nm為測定波長（入2），在 295nm附近（每間隔0.2nm）選擇等吸收點(diǎn)波長為參比波長（入1），使 A=A入2 A /1 = 0。（3）雙波長測定：在 艇與入兩波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照 品溶液（2）的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（4A），計算，即得。3. 結(jié)果計算 ：Auu Cs D 平均片重被測藥物標(biāo)示量= As100W標(biāo)示量式中AAU為供試液的AA值，從為對照液的 從值，Cs為對照液濃度（mg/mL）， D為稀釋倍數(shù)，W為取樣量。五、注意事項1.測定之前應(yīng)先檢查儀器波長是否