中醫(yī)藥大學開題報告模板

1、廣州中醫(yī)藥大學科學學位碩士研究生學位論文開題報告姓名袁智先院、所研究生進修班2010級學號201001018導師姓名專業(yè)中醫(yī)骨傷研究方向中藥藥效研究擬定學位論文題目麻杏石甘治療過敏性哮喘的藥效研究本研究題目是否屬導師課題的一部分？如果是的話， 屬哪一部分？并注明該課題名稱、編號經(jīng)費來源國家計委，科委項目/國家經(jīng)貿(mào)委項目（）教育部人文、社會科學研究項目（）國家自然科學基金項目（）?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）項目（）學校級項目（）國際合作項目/與港、澳、臺合作項目（）導師課題（V）自選課題（）其它（）學位論文的類型（V）1 基礎研究（V）2 應用基礎（ ）3 應用研究（ ）4 其 他（）一、選題依據(jù)（包括

2、研究目的、意義，國內外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢評述，并附參考文獻）：（一） 研究目的和意義麻杏石甘湯記載于傷寒論辨太陽病脈證并治，原文說”發(fā)汗后，不可更行桂枝湯， 汗出而喘，無大熱者，可與麻黃杏仁甘草石膏湯?！北緱l所指的發(fā)汗后，是指太陽病發(fā)汗不 得法，或發(fā)汗太過，或誤用下法，均可使邪熱內傳，病情轉重。因其邪熱內傳，則表示大熱， 汗出而喘是肺熱壅盛所致。因肺主氣，外合皮毛，熱壅于肺，津液外走毛竅，故汗出；肺司 呼吸，熱盛則氣逆，故喘，由此可見，汗出而喘，癥候已發(fā)生改變，不可再用桂枝湯，而應 以麻杏石甘湯清熱宣肺止喘。其中的麻黃配石膏，清熱透邪，宣肺定喘，且石膏用量多于麻 黃，以制約麻黃辛溫之性而為平?jīng)?/p>

3、之用，故汗出不忌麻黃，無大熱不忌石膏，正所謂治病必 求其本。杏仁宣降肺氣，配麻黃則增強治喘之力，甘草安胃和中，調和諸藥。后世用于風寒 化熱，或風熱犯肺，以及內熱外寒，但是邪熱壅肺之身熱喘咳，口渴脈數(shù)，無論有汗、無汗， 皆可以本方加減而獲效。而風寒咳喘，痰熱壅盛不可用此方。本課題所研究的麻杏石甘湯方由麻黃、杏仁、甘草、甘草、石膏，理研究表明，麻杏甘 石湯臨床上用于治療哮喘、蕁麻疹等疾病，取得較好療效，從現(xiàn)代免疫學角度分析，哮喘和 蕁麻疹均屬第一型變態(tài)反應性疾病，防治第一型變態(tài)反應性疾病，首先要控制其發(fā)生的幾個 主要環(huán)節(jié)，其中防止過敏原進入機體外，在機體方面，可控制 IgE的產(chǎn)生；阻斷IgE與肥大

4、 細胞的嗜酸性粒細胞結合，抑制肥大細胞釋放生物活性物質； 阻止生物活性物質作用于效應 器官以及解除效應器官反應等。本文采用 Schwartz等法進行大白鼠腹腔肥大細胞脫顆粒實 驗，說明麻杏甘石湯有抑制肥大細胞脫顆粒作用，證明本方還有一定的抑制效應器官反應的 作用，可緩解由于抗原刺激而增強的腸管蠕動， 能保護腸管中肥大細胞免受抗原的攻擊。 上 述實驗表明，麻杏甘石湯對肥大細胞脫顆粒、抗原刺激致敏腸管釋放組織胺以及對致敏腸管 蠕動的影響，可在一定程度上說明本方治療第一型變態(tài)反應的機理。國內外研究現(xiàn)狀1中醫(yī)對麻杏石甘湯的認識1.1麻杏石甘湯用法麻黃、杏仁、甘草、石膏四味，以水七升，煮麻黃，減二升，去

5、上沫，內諸藥，煮取二升，去滓。溫服一升（現(xiàn)代用法：水煎溫服）。1.2麻杏石甘湯功用辛涼宣泄，清肺平喘：用于外感風熱，或風寒郁而化熱，熱壅于肺，而見咳嗽、氣急、 鼻煽、口渴、高熱不退，舌紅苔白或黃，脈滑數(shù)者。常用本方配伍魚腥草、黃苓、瓜蔞、貝 母等，治療急慢性支氣管炎、肺炎以及麻疹合并肺炎。1.3麻杏石甘湯方解君藥：麻黃，辛甘溫，宣肺解表而平喘，石膏，辛甘大寒，清泄肺胃之熱以生津兩藥相 配，既能宣肺，又能泄熱。臣藥：杏仁，苦降肺氣，止咳平喘，既助石膏沉降下行，又助麻黃瀉肺熱。 佐使：炙甘草，顧護胃氣，防石膏之大寒傷胃，調和麻黃、石膏之寒溫。1.4配伍特點縱觀全方，藥僅四味，配伍嚴謹，清宣降三法俱

6、備，共奏辛涼宣泄，清肺平喘之功。1.5注意事項本方出自傷寒論，原治太陽病，發(fā)汗未愈，風寒入里化熱， 汗出而喘”者。后世用 于風寒化熱，或風熱犯肺，以及內熱外寒，但見肺中熱盛，身熱喘咳，口渴脈數(shù)，無論有汗、 無汗，便以本方加減治療，都能獲效。對于麻疹已透或未透而出現(xiàn)身熱煩渴，咳嗽氣粗而喘，屬疹毒內陷，肺熱熾盛者，亦可 加味用之。1.6病癥分析風熱襲表，表邪不解而入里，或風寒之邪郁而化熱入里，邪熱充斥風外，故身熱不解、 汗出、口渴、苔黃、脈數(shù)；熱壅于肺，肺失宣降，故咳逆氣急，甚則鼻煽。若表邪未盡，可 在衛(wèi)氣被郁，毛竅閉塞而無汗；苔薄白，脈浮亦是表證未盡之征。1.7文獻摘要醫(yī)宗金鑒 刪補名醫(yī)方論柯琴

7、： 石膏為清火之重劑，青龍、白虎皆賴以建功，然用 之不當，適足以招禍。故青龍以無汗煩躁，得姜桂以宣衛(wèi)外之陽也；白虎以有汗煩渴，須粳 米以存胃中津液也。此但熱無寒，故不用姜桂，喘不在胃而在肺，故于麻黃湯去桂枝之監(jiān)制， 取麻黃之開，杏仁之降，甘草之和，倍石膏之大寒，除內外之實熱，斯溱溱汗出，而內外之 煩熱與喘悉除矣。1.8臨床應用及研究1.8.1辨證要點：本方為治療表邪未解，邪熱壅肺之喘咳的基礎方。因石膏倍麻黃，其 功用重清宣肺熱，不在發(fā)汗，所以臨床應用以發(fā)熱、喘咳、苔薄黃、脈數(shù)為辨證要點。傷 寒論原用本方治療太陽病，發(fā)汗未愈，風寒入里化熱，汗出而喘”者。后世用于風寒化熱， 或風熱犯肺，以及內熱外

8、寒，但見邪熱壅肺之身熱喘咳、口渴脈數(shù)，無論有汗、無汗，皆可 以本方加減而獲效。對于麻疹已透或未透而出現(xiàn)身熱煩躁、咳嗽氣粗而喘屬疹毒內陷，肺 熱熾盛者，亦可以本方加味。1.8.2加減變化：如肺熱甚，壯熱汗出者，宜加重石膏用量，并酌加桑白皮、黃苓、知 母以清泄肺熱；表邪偏重，無汗而惡寒，石膏用量宜減輕，酌加薄荷、蘇葉、桑葉等以助解 表宣肺之力；痰多氣急，可加葶藶子、枇杷葉以降氣化痰；痰黃稠而胸悶者，宜加瓜蔞、貝 母、黃苓、桔梗以清熱化痰，寬胸利膈。1.8.3現(xiàn)代運用：本方常用于感冒、上呼吸道感染、急性支氣管炎、支氣管肺炎、大葉 性肺炎、支氣管哮喘、麻疹合并肺炎等屬表邪未盡，熱邪壅肺者。1.8.5使

9、用注意：風寒咳喘，痰熱壅盛者，非本方所宜。2、現(xiàn)代醫(yī)學對麻杏石甘湯的認識2.1對免疫功能的影響：中藥由267%麻杏石甘湯口服液加生理鹽水， 按5： 3稀釋而成。 觀察麻杏石甘湯對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響：取健康昆明種小鼠16只，體重18-22g,隨機分為兩組，每組8只，雌、雄各半，中藥組用上藥 0.4ml/日灌胃，對照組用等量生理鹽 水灌胃，均連續(xù)灌胃8日。對小鼠脾指數(shù)的影響：取健康NIH種小鼠20只，體重22-25g, 分組和給藥方法同上，每組均連續(xù)灌胃10日。對小鼠血清溶血素含量的影響：取健康昆明種小鼠20只，體重22-25g,分組及給藥方法同上，連續(xù)灌胃11日。對小鼠皮膚遲發(fā)反 應的影

10、響；取健康NIH種小鼠12只，體重18-22g，分組和經(jīng)藥方法同上，每組可續(xù)灌胃 12日。結果：麻杏石甘湯可提高患兒細胞免疫功能，調整T淋巴細胞亞群間的比例關系，使小白鼠吞噬指數(shù)、脾指數(shù)、血清溶血素增高，使小白鼠皮膚遲發(fā)反應增強。又有報道，采用水煎醇沉法制成 267%制劑，加生理鹽水按5:6稀釋后，置4C冰箱貯 存?zhèn)溆?。取健康小白?6只，體重18-22g，隨機分成中藥組和對照組。中藥組按 0.4ml/ 天劑量灌胃，每日1次，對照組用等量生理鹽水灌胃，各組連續(xù)灌胃7日，第8日采血，分離血清，用瓊脂平板打孔法測定溶菌酶含量，進行組間比較。分組給藥方法同連續(xù)灌胃7日，未次給藥后每只小白鼠腹腔注射

11、5%綿羊紅細胞1ml，并于3小時后腹腔注射生理鹽水2ml，然后處死動物，吸出腹腔液，以2000轉/分鐘離心沉淀10分鐘，棄上清液，涂片并 用瑞氏染液染色，鏡檢計算吞噬率及吞噬指數(shù)。取健康小白鼠20只，體重18-22g,分組及灌胃方法同，連續(xù)灌胃11日，各組均在給藥第4日，用10%新鮮羊紅細胞進行小白鼠 腹腔免疫，0.5ml/只，于實驗第11日摘眼球取血，分離血清，進行血清凝集素試驗，測定抗 體效價，采用RPMI“1640”培養(yǎng)液（1%“ 1640” 20%胎牛血清、青霉素100U，鏈霉素 100卩g/ml，pH7.4，每瓶2.5ml，試驗時每瓶加入兔肝素 0.2ml抗凝血，并分別加入0.15m

12、l， 0.1ml，0.05ml三種劑量的麻杏石甘湯（藥物濃度調至 100%，每瓶1個劑量，同時設陽性對 照組（上海生物化學研究所產(chǎn)品 PHA10滴）和陰性對照組（即不加中藥也不加PHA），經(jīng)37C 孵育70小時后離心沉淀，棄上清液，將沉淀物灌入毛細玻璃管，離心分離白細胞，涂片并 用瑞一姬混合染液染色，鏡檢計算淋巴細胞轉化率。實驗結果：麻杏石甘湯能提高小白鼠巨 噬細胞的吞噬率和血清溶菌酶含量， 促進淋巴細胞轉化，從而使非特異性和特異性免疫功能 均有所提高。2.2退熱作用：實驗以家免為對象、造型、采用灌胃法給藥對麻杏石甘湯、生熟、 石膏的退熱作用進行了對比觀察。結果表明：3者都有不同程序的退熱作用

13、。同時既為本方 為本方中的有機、無機兩類成分的協(xié)同”作用提供了佐證，也會它屬絡合物藥物的實際應用 展示了前景。2.3對蕁麻疹的治療作用：選擇體重 2.5-3.0kg家兔10只，雌雄不拘，分給藥組和對照 組。用20%烏拉坦8ml/kg行腹腔麻醉后，用12號導尿管從口腔插入胃中，將家兔仰位固定。 在頸部正中線切口，插入氣管插管，氣管插管分叉一端與馬氏氣鼓相連，另一端自然呼吸。 在氣管右側的頸A做“V型切口，遠心端結扎，近心端插入與水銀檢壓計相連，含7%枸櫞酸鈉溶液的動脈套管經(jīng)檢壓計連馬氏氣鼓。在腹部正中打開腹腔，找中段空腸一段，在腸壁切1.0cm切口，將可充水小指套緩緩送入腸腔內，荷包縫合腸壁，關

14、閉腹腔，通過一段 橡皮管將腸內指套連接在馬氏氣鼓上， 將腸內指套充滿水，腸蠕動推動描記波型。而后開動 煙鼓，記錄一段正常血壓、呼吸、腸蠕動波，然后通過胃管灌藥（麻黃、杏仁、石膏、甘草， 各約成人量的1/2,按常規(guī)煎藥法，煎成50ml），繼續(xù)觀察波型。結果發(fā)現(xiàn)：給藥組家兔血 壓有明顯升高趨勢，心率減慢，呼吸變淺減慢，腸蠕動增強。而對照組給與等量水50ml，結果對家兔血壓、呼吸、腸蠕動均無影響。證明麻杏石甘湯對蕁麻疹之血管變態(tài)反應之病理 有拮抗作用。參考文獻1 李興，王廣生，張德清.中西醫(yī)結合治療小兒支氣管肺炎64例河南中醫(yī)學院學報，2006, 21(4): 5354.2 袁壯.小兒支原體肺炎診斷

15、治療中的幾個問題.中國實用兒科雜志，2002, 17(8): 449.3 岱明，王曉紅，陸權，等.門冬氨酯阿奇霉素治療兒童肺炎的臨床療效及安全性fJ1_中國實用兒科雜志，2003，18(12): 749.4 Darko Stefa no vskiJoyce M.Richey,et al.Co nsiste ncy of the Dispositi on in dex in the face of diet induced insulin resistance:potential role of FFA.Plos one,2011.6(3):1-8.5 Magda,M.,M.He nn es,a

16、 nd E.Shrago,m Receptor and post receptor effects of free fatty acids(FFA)on hepatocyte insulin dynamicsJ.lnt J Obes,1990.14(10):831-834.二、研究內容（說明課題的具體研究內容，重點解決的問題，預期的研究成果）：（一）具體研究內容1、過敏性哮喘大鼠模型的建立；2、麻杏石甘湯組方對過敏性哮喘大鼠的哮喘治療的功效；3、麻杏石甘湯組方對過敏性哮喘大鼠免疫介質分泌的影響；3、麻杏石甘湯組方對過敏性哮喘大鼠作用機制的探討。（二）重點解決的問題1、過敏性哮喘大鼠模型的制備方

17、法；2、采用Schwartz等法進行大白鼠腹腔肥大細胞脫顆粒實驗;3、電鏡觀察肺泡內免疫反應敏感程度。（三）預期研究成果1、通過實驗評價麻杏石甘湯治療過敏性哮喘的功效，為進一步研究提供依據(jù)。2、將研究成果發(fā)表于核心期刊雜志。三、研究方案設計（包括研究方法，技術路線，理論分析、計算、實驗方法和步驟及其可行性，可能出現(xiàn)的技術問題及解決辦法等）：（一）研究方法1實驗材料1.1實驗動物 SD大鼠，SPF級，雄性，體重160-180g。1.2飼料配方（1）高脂飼料：普通基礎飼料51.8%，蛋黃粉20%，豬油7%，奶粉5%，白糖5%，魚肝油 20d/kg，花生2%,黃豆5%,食鹽1%,麻油0.5%。 普通

18、飼料：大麥粉20%、脫水菜（去除水分的包心菜）10%、豆粉20%、酵母1%、骨 粉5%、玉米粉16%、麩皮16%、魚粉10%、食鹽2%。1.3受試藥物 麻杏石甘湯組方，低劑量為臨床用量的10倍，中劑量為臨床用量的20 倍, 高劑量為臨床用量的30倍。1.4儀器 全自動生化分析儀；TD25 WS多管架自動平衡離心機；分析天平；電子天平； T1000恒溫水浴箱；高溫高壓滅菌器；酶標儀；可調式移液槍；低溫高速離心機；低溫冰箱； 超凈工作臺；勻漿器；渦旋儀；實時熒光定量RT-PCR;核算蛋白檢測儀；掃描電鏡。1.5試劑 葡萄糖試劑盒;TG試劑盒；TC試劑盒；HDL-C試劑盒；LDL-C試劑盒；逆轉錄試

19、劑盒；RT-PCR試劑盒；葡萄糖；生理鹽水；氯仿；異丙醇；乙醇；DEPC； TE buffer ； Trizol。2實驗方法2.1支氣管哮喘大鼠模型的制備SD大鼠，隨機分為正常組和支氣管哮喘組，每天定量給予飼料，正常組給予普通飼料，支氣管哮喘組給予麻杏石甘湯混合飼料，自由飲水，造模時間6周，每周稱重一次。2.2動物分組及給藥方法造模6周后，支氣管哮喘組大鼠體重顯著高于正常組大鼠體重提示為造模成功，將高脂組大鼠隨機分成 4組，分別為模型組，支氣管哮喘組分為高、中、低劑 量組，每組10只。從第7周開始灌胃給藥，正常組、模型組給予蒸餾水，灌胃體積為1ml/100g， 給藥組按高、中、低劑量給予受試藥

20、物，每天給藥 1次，連續(xù)6周，每天記錄攝食量，每周稱 重一次，計算食物利用率。2.3檢測指標及方法（1）攝食量、食物利用率：每天定量給予飼料，稱取剩余飼料，計算攝食量；每周稱重一次，計算一次食物利用率，食物利用率=(同期內體重的增量/同期內的攝食量)X100%(2) 體重、體長、Lee's指數(shù)：每周稱重一次，觀察各組體重變化；連續(xù)給予受試樣品 6周 后，禁食不禁水12h，稱取體重，乙醚麻醉后測定大鼠的體長(鼻尖至肛門的長度，cm),計 算Lee'指數(shù)，Lee'指數(shù)二體重1/3(g) >1000/體長(cm)。(3) 脂肪重量、脂體比：連續(xù)給予受試樣品 6周后，禁食

21、不禁水12h，稱取體重，解剖取腎臟和生殖器周圍的脂肪稱取脂肪濕重，計算脂體比，脂體比=脂肪重量(g)/體重(100g)。(4) 血清生化指標：給予受試樣品6周后，禁食不禁水12h小時，乙醚麻醉后眼眶靜脈采血3ml，分離血清，用全自動生化分析儀測定各組動物血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量。(5) 糖耐量測定：連續(xù)給予受試樣品6周后，禁食不禁水12h，乙醚麻醉，眼眶取血測定空腹 血糖值(0h)，然后灌服葡萄糖溶液(2.5g/kg),分別于給糖后1 h、2 h取血測血糖值，血糖測定按 葡萄糖氧化酶-過氧化酶法，操作方法及步驟按試劑盒上要求進行。(6) 血清瘦素、神經(jīng)肽丫、游離脂肪酸、肝

22、酯酶、脂蛋白酯酶含量測定：乙醚麻醉，眼眶取 血，2000rpm離心10min，血清-20C保存，按各試劑盒要求測定。(7) 肝系數(shù)、肝組織電鏡：給予受試樣品6周后，禁食不禁水12h小時，解剖取肝臟，稱重， 置于冰上剪取50mg肝組織，修剪成1mm*1mm大小，放入預冷的固定液中，經(jīng)預處理、切片后 掃描電鏡觀察。(8) 下丘腦瘦素受體基因、神經(jīng)肽丫 mRNA表達水平測定：給予受試樣品6周后，禁食不禁 水12h小時，解剖取腎及睪丸周圍脂肪組織，稱重，剪取 50mg放入預冷的PCR管中，迅速放入 液氮中，速凍后放入-80E，用實時熒光定量RT-PCR僉測瘦素、脂聯(lián)素mRNA表達水平。2.4統(tǒng)計方法 實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，各組測定值用均數(shù)土標準差(x_s)表示，采用t檢驗，多組間比較用方差分析。（二）技術路線廠減肥作用：攝食量、 食物利用率、體重、 體長、李氏指數(shù)、脂 肪濕重、脂體比'調脂作用:、肝臟系數(shù)肝組織電鏡L）血糖調節(jié)作用： 空腹血糖含量測定 糖耐量實驗<J血清瘦素、神經(jīng)肽清游離脂肪酸、Y含量測定； 下丘腦瘦素受體、含量測定；血清肝酯酶、脂蛋白酯酶活性測定神經(jīng)肽Y基因表 達水平測定； 脂肪組織HE染色四、可行性分析1理論基礎：本課題實驗方法在國內外文獻中均有報