血漿內(nèi)氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管損傷性疾病中特異性變化的實(shí)驗(yàn)研究

1、血漿內(nèi)氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管損傷性疾病中特異性變化的實(shí)驗(yàn)研究         10-08-31 08:43:00     編輯：studa20                  作者：韓京軍，李星云，尹學(xué)哲【摘要】  目的研究不同種氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）在肺癌（Ca）和動(dòng)脈硬化性血管

2、損傷性疾?。ˋs）病人血液中的特異性變化，探討不同種氧化低密度脂蛋白與腫瘤及動(dòng)脈硬化發(fā)病之間的相互關(guān)系。方法以臨床確診肺癌的16例患者為Ca組，12例患者為As組，選擇健康大學(xué)生20名作為正常對照組。分別檢測血漿內(nèi)LPO含量、SOD活性及各組氧化脂質(zhì)的峰線位置。結(jié)果Ca組、As 組LPO含量與正常組比較差異有顯著性，As組SOD活性與正常組比較差異有顯著性；在薄層層析中Ca組、AS與正常組的過氧化低密度脂蛋白分布均有不同。結(jié)論Ca與As患者和正常人比較其細(xì)胞氧化低密度脂蛋白代謝特征表現(xiàn)為代謝率增強(qiáng)，過氧化低密度脂蛋白具有不同的特異性變化。 【關(guān)鍵詞】  氧化低密度脂蛋白； 肺癌； 動(dòng)

3、脈硬化性血管損傷疾病Abstract：ObjectiveTo study the distinctive change of different peroxidized low density lipoprotein (OX-LDL) in the blood of arteriosclerotic disease (As) and lung cancer (Ca). To investigate the correlation of different OX-LDL in As and Ca.MethodsObjects were divided into three groups: pat

4、ients diagnosed as lung cancer (Ca group); patients diagnosed as arteriosclerosis (As group); 20 healthy students of university (control group). Low density lipoprotein (L-LDL) and high density lipoprotein (H-LDL) were collected from the plasma with ultracentrifuge method. The concentrations of LPO

5、and SOD in plasma were examined. And the top line positions and the rough concentrations of OX-LDL were evaluated.ResultsCompared to control group, the LPO levels in As group and Ca group were significantly increased. The SOD level was significantly higher in As group than in control group. In the R

6、IA, the distribution of Ca group and As group versus control group were different. Compared to control group, significant statistic differences were found in both of Ca group and in As group. But there was no statistic difference between Ca group and As group.ConclusionThe metabolic rates of OX-LDL

7、can significantly increase more both in Ca group and in As group than in control group, and the specific changes can be observed.Key words：Peroxidized low density lipoprotein (OX-LDL);  Lung cancer;  Arteriosclerotic disease    多年來世界各國的科學(xué)家們在研究心血管疾病時(shí)對人體內(nèi)膽固醇（CH）載體血漿內(nèi)低密度脂蛋白（LDL

8、）的變化進(jìn)行了大量詳細(xì)的研究，并發(fā)現(xiàn)了氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）導(dǎo)致血管損傷，誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)生的事實(shí)。但是，對消耗性疾病腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的低密度脂蛋白和氧化低密度脂蛋白的動(dòng)態(tài)變化以及相互影響卻研究甚少。    在本課題的前期工作中發(fā)現(xiàn)氧化低密度脂蛋白在腫瘤病人和動(dòng)脈硬化性血管損傷性病人血液中具有不同變化，為進(jìn)一步研究不同OX-LDL對人體血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷機(jī)理，研究腫瘤患者血漿內(nèi)OX-LDL和動(dòng)脈粥樣硬化病人OX-LDL構(gòu)成的特異性變化，本實(shí)驗(yàn)以肺癌病人和包括糖尿病的血管損傷性病人為對象，對上述各種疾病發(fā)生發(fā)展過程中的低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋

9、白以及超氧化物歧化酶的變化進(jìn)行了研究。同時(shí)，我們還應(yīng)用薄層層析技術(shù)對上述各種疾病的血漿內(nèi)氧化脂質(zhì)進(jìn)行了分析。1  材料與儀器1.1   試劑-LPO由日本協(xié)和株式會(huì)社提供，SOD試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供。1.2  儀器薄層層析板（美國Sigma公司）,超低溫冰箱（日本三洋SIM-F124），高速離心機(jī)（德國Heraeus STRATOS HAS 15.94型），超速離心機(jī)（瑞士Centrikon T-1055型），層析用自動(dòng)部分收集器HELIRAC（瑞士LKB公司）。2  方法2.1  分組以臨床上經(jīng)過各種檢查確定臨床診斷的

10、肺癌患者和包括糖尿病的血管損傷性疾病患者作為研究對象，正常對照選擇了健康、體檢證明肝功能、腎功能、胸部X線及血尿常規(guī)均正常的20名大學(xué)生自愿者。分組如下：肺癌組16例，男9例，女7例，年齡為4268歲，平均51歲；血管損傷組12例，男9例，女3例，平均年齡4772歲，平均56歲；正常組20例，男10例，女10例，年齡2124歲，平均年齡22歲。2.2   標(biāo)本制備每人清晨空腹采血16 ml加入乙二胺四乙酸（終端濃度為0.05 mmol/L）抗凝、抗氧化，以3 500 r/min離心提取血漿，在冰箱0條件下保存?zhèn)溆?。用哈貝爾的重層超速離心分離法，以40 000 r/min離心

11、26 h分離血漿內(nèi)低密度（d=1.0631.18），以40 000 r/min離心28 h分離血漿內(nèi)高密度脂蛋白(d=1.181.21)。     10-08-31 08:43:00     編輯：studa202.3  血漿內(nèi)LPO的測定八木別法測定各組血漿的低密度脂蛋白內(nèi)過氧化脂蛋白含量。2.4   血漿內(nèi)SOD活性測定用放射免疫法測定各組血漿內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)的活性。2.5   標(biāo)本中各種脂類的薄層層析取標(biāo)本0.8 ml（0.6 ml血漿+0.2 ml

12、蒸餾水）加甲醇2 ml，加三氯甲烷1 ml混勻，加醋酸2滴混勻后再加入三氯甲烷1 ml，加蒸餾水1 ml混勻，高速離心2 000 rmin，10 min。吸取下層在真空泵內(nèi)連續(xù)吸引干燥812 h。展開液由石油乙醚75 ml+乙醚25 ml+乙酸1 ml組成。薄層層析板先用三氯甲烷洗1次，在自然條件下干燥12 h后，在層析板上取一邊打5個(gè)格，用三氯甲烷100 l溶解脂質(zhì)在薄層上滴注，以能吸干為度。將層析板放入含有展開液的展開槽中展開，展開至層析板頂部23 cm時(shí)停止展開，層析板進(jìn)行顯影。析板放入顯影槽（碘化）510 min后取出進(jìn)行攝影。初步判定各組氧化脂質(zhì)的峰線位置和大致濃度。2.6 

13、;  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以±s表示，結(jié)果處理使用配對t檢驗(yàn)。3  結(jié)果3.1   血漿內(nèi)LPO測定如表1所示，正常對照組與血管損傷組比較P<0.01，與肺癌組比較P<0.05，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。氧化低密度脂蛋白含量在肺癌組與血管病變組之間有測定數(shù)值的變化，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表1  血管損傷組和肺癌組血漿內(nèi)LPO測定值（略）3.2   血漿內(nèi)SOD活性測定如表2所示，血管損傷組與正常對照組比較有明顯差別，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明在血管損傷性疾病發(fā)生時(shí)血漿內(nèi)SOD值

14、有明顯上升趨勢。表2  血管損傷組和肺癌組血漿內(nèi)SOD測定值（略）3.3   薄層層析結(jié)果 正常對照組血漿、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和極高密度脂蛋白的薄層層析板中幾乎看不到任何氧化物質(zhì)，而肺癌組和血管損傷組的低密度脂蛋白與正常組有不同分布，可以初步推測在血管病變性疾病和肺癌發(fā)生過程中出現(xiàn)的氧化低密度脂蛋白可能來自不同的物質(zhì)。4  討論    過氧化低密度脂蛋白是低密度脂蛋白(LDL)被氧化修飾后的產(chǎn)物。當(dāng)體內(nèi)產(chǎn)生過多活性氧自由基時(shí)，LDL氧化修飾作用增強(qiáng)，極易轉(zhuǎn)化為氧化低密度脂蛋白，它是動(dòng)脈粥樣硬

15、化最重要的致病因素1，2。同時(shí)，自由基也是導(dǎo)致癌癥發(fā)生的重要因素之一，它既可直接造成DNA鏈損傷致突變。也可通過脂質(zhì)過氧化作用影響DNA，引起基因DNA變化，合成出無活力或功能缺陷的SOD，隨著SOD活性降低，引起自由基進(jìn)一步堆積，最終誘發(fā)癌癥3。在本次實(shí)驗(yàn)中肺癌患者組SOD活性出現(xiàn)增高，推測其原因可能為代償性。本實(shí)驗(yàn)肺癌患者與血管損傷組和正常人比較，其細(xì)胞氧化低密度脂蛋白代謝特征表現(xiàn)為代謝率增強(qiáng)，即單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的氧化低密度脂蛋白結(jié)合、內(nèi)吞和降解量均顯著增加。提示過氧化低密度脂蛋白的增加可能是腫瘤致病或增強(qiáng)致病因素之一。    脂質(zhì)是肺的重要成分,肺組織具有合成

16、與分解血脂及脂蛋白功能,肺泡型上皮細(xì)胞及肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)和表面具有脂蛋白脂酶,提示肺臟具強(qiáng)大脂質(zhì)代謝能力。肺癌時(shí)腫瘤細(xì)胞增生活躍并伴毛細(xì)血管的增多使肺的脂質(zhì)代謝異常活躍。同時(shí)腫瘤組織的某些代謝產(chǎn)物和分泌的某些具有生物活性的物質(zhì)可直接或間接地影響細(xì)胞膜上感受器功能活性,從而形成肺癌時(shí)所特有的血脂及脂蛋白氧化修飾4，5。薄層層析實(shí)驗(yàn)表明，肺癌和血管損傷性疾病形成過程中過氧化低密度脂蛋白具有不同特異性變化，因此推測兩種氧化低密度脂蛋白的產(chǎn)生來源可能不同，具體機(jī)制在進(jìn)一步研究中。【參考文獻(xiàn)】  1尹學(xué)哲，上村継道，金沢武道過酸化LDLPlatelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1（PECAM-1）発現(xiàn)及影響中西醫(yī)結(jié)合動(dòng)脈硬化癥·血拴癥·一次預(yù)防（曲直部壽夫，陣紹武監(jiān)修、都島基夫，金恩源編集），1996：172.2Bonnefont-Rousselot D，Therond P，Beaudeux JL，et al.High density lipoprotein(HDL) and the oxidative hypothesis of atherosckerosisJ.Clinica