甘油的檢測(cè)方法匯總

1、甘油的檢測(cè)方法匯總在發(fā)酵行業(yè)中，甘油作為底物，是發(fā)酵液中生物合成的直接前體，會(huì)影響外源蛋白 的啟動(dòng)表達(dá)效率，其含量的高低直接影響產(chǎn)物的發(fā)酵單位，是決定菌種取舍的重要指標(biāo), 是提高工程菌的發(fā)酵密度，提高產(chǎn)品生產(chǎn)率的關(guān)鍵。在生物柴油生產(chǎn)中，它是副產(chǎn)物， 其含量直接影響生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。此外, 甘油能與水結(jié)合以防止紅細(xì)胞的冷凍損傷，能延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存期，被普遍用作細(xì)胞內(nèi) 冷凍保護(hù)劑等。由于甘油用途很廣，因此其含量的測(cè)定具有非常重要的意義。目前國(guó)內(nèi)外甘油含量的測(cè)定方法較多，主要有高碘酸氧化法、Cl? +絡(luò)合比色法、酶比色法法、紫外-可見(jiàn)分光光度法、高效液相色譜法

2、、氣相色譜法、近紅外光譜法以及原 子吸收法等。下面將對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)要概述：、咼碘酸法1.原理：高碘酸氧化法是目前常見(jiàn)用于甘油含量檢測(cè)的方法，利用高碘酸與甘油發(fā)生氧 化還原反應(yīng)，剩余高碘酸及反應(yīng)生成的碘酸與碘化鉀反應(yīng)生成碘，再用硫代硫酸鈉進(jìn)行 滴定，根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉的量來(lái)計(jì)算甘油的含量。2.操作步驟準(zhǔn)確發(fā)酵液10ml于lOOmL小、燒杯中，加少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移至 100mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，靜置。用移液管準(zhǔn)確移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL咼碘酸鈉溶液，混合均勻后，于黑暗中避光靜置 40mi n，然后加入碘化鉀溶液和20%fc酸溶 液各15mL調(diào)節(jié)pH值在0.81.0

3、之間，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，近終點(diǎn)時(shí)， 加入2mL淀粉指示劑溶液，繼續(xù)滴定至溶液藍(lán)色消失。同時(shí)做試樣空白。3.計(jì)算：w（V2 V1）C M 10010/50 4 1000式中：w樣品中甘油的含量，;V1空白試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLV2試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLC硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/ L; M甘油相對(duì)分子質(zhì)量;二、酶比色法1.原理：它是利用酶的特異性催化反應(yīng)建立的測(cè)定甘油的一種酶學(xué)方法，是指甘油在甘 油激酶作用下轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羥丙酮和過(guò)氧 化氫，然后過(guò)氧化氫和4-氨基安普比林、4-氯酚在過(guò)氧化物酶催化下反應(yīng)生

4、成紫蘭色、 能在500 nm左右有特征吸收峰的醌亞胺，通過(guò)顏色深淺即吸光度的變化測(cè)定所生成的 "Q,甘油的含量與生成的 HQ成正比，這樣用比色法就可以測(cè)定甘油的含量。2.操作步驟波長(zhǎng)：500nm?（480-520nm）反映溫度：37C ?比色杯光徑：1cm?取一定量R1（參看R2瓶簽）加入1瓶R2中，溶解后即為工作液，工作液預(yù)先保溫至測(cè)試 溫度。空白管校準(zhǔn)管樣品管工作液1m|1m|1m|蒸餾水0.0100標(biāo)準(zhǔn)品0.01樣品000.01OD值。分別混合均勻，在反應(yīng)溫度保溫10分鐘，以試劑空白管校零，記錄校準(zhǔn)及樣品3.計(jì)算：？甘油濃度=A樣品/A校準(zhǔn)X校準(zhǔn)濃度（mmol/L或mg/dl）

5、 ?三、高效液相色譜法1.原理：高效液相色譜法（HPLC）的原理是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具 有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜 柱，利用色譜柱對(duì)待測(cè)混合物先進(jìn)行分離，然后再進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析， 因而其測(cè)量的準(zhǔn)確性和精確度較高，目前已成為檢測(cè)生化分子較常用的一種方法。2.操作步驟（1）首先用水將發(fā)酵液稀釋2.5倍,然后加HPO調(diào)pH至5.5,在轉(zhuǎn)速8000r/min、溫度4CF離心10min,經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾用于HPLC分析；（2）將甘油標(biāo)準(zhǔn)系列溶液在最佳色譜條件下進(jìn)行 HPL（分析,以峰面積外標(biāo)法定量得到甘 油標(biāo)準(zhǔn)曲線；（3）按

6、照樣品預(yù)處理方法處理后進(jìn)樣 5微升,記錄峰面積，代入線性方程中，計(jì)算其測(cè)定 值。將計(jì)算值乘以稀釋倍數(shù)后，即得發(fā)酵液中甘油的含量。四、氣相色譜法疋里1.原理：氣相色譜分析法是用于分離分析復(fù)雜樣品中的化合物的一種方法，其原理是一 宀貝的氣體或液體分析物被注入到柱一端的進(jìn)樣口中，在載氣帶動(dòng)下通過(guò)色譜柱，分析 物的分子會(huì)受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的樣品具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)， 與特定的固定相有著不同的相互作用，使得每一種類型的分子都有自己的通過(guò)速率，因 此，分析物中的各種不同組分就會(huì)在不同的時(shí)間到達(dá)柱的末端，從而得到分離。當(dāng)化合 物從柱的末端流出時(shí)，它們被檢測(cè)器檢測(cè)到，產(chǎn)生相應(yīng)的信號(hào)，并被轉(zhuǎn)

7、化為電信號(hào)輸出, 從而確定每一個(gè)組分到達(dá)色譜柱末端的時(shí)間順序以及每一個(gè)組分的含量。2.操作步驟2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容并搖勻，作0、2、4、8、12、20g/L，內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度均為（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 在7個(gè)25mL容量瓶中分別準(zhǔn)確稱入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5g甘油（精確至0.1mg），再分別移入 為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。其中甘油質(zhì)量濃度分別為8g/L 0（2）樣品的制備 在25mL容量瓶中加入 混合溶劑定容至刻度并搖勻。5ml的發(fā)酵液樣品，移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用(3) GC條件X 0.32mm （內(nèi)徑）X 0.25卩m （膜厚）。柱溫:色譜柱：HP-5石英毛細(xì)管

8、柱，30m（柱長(zhǎng)）初始溫度120C,保留5min,以20E/min升至290E，保留10min。進(jìn)樣口溫度：280E， 進(jìn)樣量：0.2卩L,分流比：100 : 1。檢測(cè)器（FID）溫度：300E，氫氣流速：40mL/min, 空氣流速：300mL/mi n。載氣：氮?dú)?，流速?mL/mi n,恒流模式（4）進(jìn)樣，計(jì)算五、酶電極法1、檢測(cè)原理利用生物酶只能催化一種或一類底物的性質(zhì)，將甘油氧化酶進(jìn)行固定化處理，樣本中的 甘油在甘油酶膜的作用下被催化生成過(guò)氧化氫，根據(jù)電化學(xué)的原理，過(guò)氧化氫的濃度與 電壓值正相關(guān)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液、緩沖液的電壓值響應(yīng)值來(lái)確定樣本中甘油濃度。甘油濃度與電壓值相關(guān)性分析2.操作步驟按相關(guān)操作說(shuō)明進(jìn)行。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程不超過(guò)45秒應(yīng)用范圍：發(fā)酵過(guò)程甘油濃度檢測(cè)，食品中 不用預(yù)稀釋樣本就可以檢測(cè)高達(dá) 1甘油濃度的分析的西爾曼科技有限公司國(guó)內(nèi)唯家有能力生產(chǎn)可以制造商。六、總結(jié)甘油的測(cè)定方法很多，最常用的是化學(xué)法。化學(xué)法測(cè)定甘油含量費(fèi)用較低，但操作繁瑣, 試劑用量大，耗時(shí)長(zhǎng)，且有時(shí)誤差極大。酶法測(cè)定甘油專一性強(qiáng)，只與溶液中的甘油特異性地 反應(yīng)，但所需試劑昂貴，不利于工業(yè)應(yīng)用和大量樣品的檢測(cè)。測(cè)定游離甘油最靈敏的方法是 氣相色譜法、液相色譜法，精確度較高，但需對(duì)甘油進(jìn)行硅烷化，操作麻煩，成本也較 高。由于高碘量法受發(fā)酵液中的雜