定性與定量方法（二）

1、定性與定量方法（二） 三、單組分的定量辦法 按照比耳定律，物質在一定波特長的吸光度與濃度之間成線性關系。因此，只要挑選相宜的波特長測定溶液的吸光度，就可求出其濃度。通常應選被測物質汲取光譜中的汲取峰處，以提高敏捷度并削減測定誤差。被測物如有幾個汲取峰，可選不易有其它物質干擾的、較高的汲取峰。普通不選光譜中靠短波長末端的汲取峰。例如維生素b12的汲取光譜中有278、361、550hm三個汲取峰，其百分吸光系數(shù)分離為119、207、63，定量時選用波長毫無疑問為361rim。但維生素b2也有三個汲取峰，267、375、444nm百分汲取系數(shù)大小次序為267nm處最大，第二為444nm處。但267n

2、m處 峰比較窄，444nm峰較寬，簡單測準，所以寧可選444nm為測定波長，損失一些敏捷度，而確保測定的精確性。測定時，應以配制樣品溶液的同批溶劑為空白對比，采納lcm的汲取池，在規(guī)定的汲取峰波長±2nm以內測試幾個點的吸光度，現(xiàn)代儀器可以挺直掃描給出一定波長范圍的吸光度，用以核對樣品的汲取峰波長位置是否正確，汲取峰波長應在規(guī)定波長±l以內，否則應考慮該試樣的同一性，純度以及儀器波長的精確度，并以吸光度最大的波長作為測定波長。吸光度讀數(shù)，普通在02一08之間的誤差較小。 1汲取系數(shù)法 汲取系數(shù)是物質的常數(shù)，只要測定條件(溶液濃度與酸度，單色光純度等)不引起對照耳定律的偏離，

3、即可按照測得的吸光度求濃度。 c=a/el 常用于定量的是百分汲取系數(shù)e，用汲取系數(shù)e值作為換算濃度的因數(shù)舉行定量的辦法，不是任何狀況下都適用的。特殊是在單色光不純的狀況下，測得的吸光度值可以隨所用儀器不同而在一個相當大的幅度內變幻不定，若用汲取系數(shù)換算成濃度，則將產生很大誤差。但若是認定一臺器，固定其工作狀態(tài)和測定條件，則濃度與吸光度之間的關系在無數(shù)狀況下仍然可以是直線關系或近似于直線的關系。 此時，k值已不再是物質的常數(shù)，不能用作定性依據(jù)。k值只是個別詳細條件下的比例常數(shù)，不能相互通用。測定時，將一系列濃度不同的標準溶液在同一條件下測定吸光度，考查在何種條件下，濃度與吸光度成直線關系的范圍

4、，然后以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制ac曲線，稱為標準曲線，或叫工作曲線。也可用直線回來的辦法，求出回來直線方程，再據(jù)樣品溶液所測得的吸光度從標準曲線或按式來計算濃度。在固定儀器和辦法的條件下，標準曲線或回來方程可多次用法。 標準曲線法因為對儀器的要求不高，不但是分光光度法中簡便易行的辦法，尤其適用于比色分析。 3對比法 對比法又稱比較法。在相同條件下配制樣品溶液和標準品溶液，在所選波特長同時測定吸光度。 然后按照樣品的稱量及稀釋狀況計算得樣品的百分含量。為了削減誤差，比較法配制標準液的濃度普通要求與樣品液濃度相臨近。 例3雙氫青蒿素的含量測定取本品約l0mg，精密稱定，置50ral量瓶

5、中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后，靜置2小時，作為供試品溶液；另取雙氫青蒿素對比品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后，靜置2小時，作為對比品溶液。精密量取對比品溶液和供試品溶液各lmi，分離置10ml量瓶中，各精密加乙醇1礎，搖勻，加2氫氧化鈉溶液至刻度，搖勻，置60恒溫水浴中反應30分鐘，取出冷至室溫，以20氫氧化鈉溶液一乙醇(4：1)為空白，照紫外一可見分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄a)，在238nm的波特長分離測定吸光度，計算，即得。 定量分析普通不選光譜中短波長末端的汲取峰。中國藥典在制劑的含量測定中大量地應用了紫外分光光度法，在一些原料

6、藥的雜質檢查中也應用了紫外分光光度法，例如腎上腺素中酮體的檢查，對乙酰氨基酚及制劑的含量測定辦法為汲取系數(shù)法，尼爾雌醇片的含量測定辦法則采納對比法。 例4對乙酰氨基酚及制劑的含量取對乙酰氨基酚40mg(制劑取相當于對乙酰氨基酚40mg的量)，用04氫氧化鈉溶液溶解并定量稀釋成每lml中含對乙酰氨基酚8g的溶液(制劑需過濾)，在257z，m的波特長測定吸光度，按c8h9no2的汲取系數(shù)為715計算，即得。 例5尼爾雌醇片的含量測定取尼爾雌醇片的細粉適量(約相當于尼爾雌醇10mg)，加無水乙醇溶解并定容至100ml，濾過，取續(xù)濾液在280nm的波特長測定吸光度；另取尼爾雌醇對比品，同法操作，計算，

7、即得。 紫外一可見分光光度法作為含量測定辦法，因為操作容易，儀器用法便利，價格也比較適中，所以在藥物分析中應用比較廣泛，但是在挑選分光光度法作為某藥物的含量測定辦法時，要注重到該藥物中雜質有元或共有成分的干擾。如在某測定波長，藥物有很強的汲取，所含雜質在此波特長無汲取或汲取很弱，這樣用紫外一可見分光光度法的測定結果會比較精確，但有些藥物中所含的雜質也具有較強的汲取，或共有成分也在所測波特長有汲取，此時就要考慮此辦法的可行性了。 四、多組分測定 可利用分光光度法測定樣品中兩種或多種組分的疊量，因為不需復雜的分別，所以辦法比較簡便。利用分光光度法舉行多組分測定，要求被測組分彼此不發(fā)生反應；同時每個

8、組分須在某一波長范圍內符合比耳定律。假如符合上述條件，那么在任一波長，溶液的總吸光度等于各組分吸光度之和，即符合吸光度的加和性原則。以溶液中同時存在兩組分a和b舉行研究，按照其汲取峰的相互干擾程度，可分為下述三種狀況。 對比品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含o一4mg的溶液，精密量取此溶液10ml、20ml、30ral、40ml、50ml，分離置l00ml量瓶中，各加01moll氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，以01moll氫氧化鈉溶液為空白，在200250nrn的波長區(qū)繪制一階導數(shù)光譜，量取峰零振幅d值，求得d值與濃度c的同歸方程。然后精密量取供試品溶液5oml置loml量瓶中，加o1

9、mobl氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，照標準曲線項下的辦法測定，量取振幅值，從標準曲線的回來方程計算。 例7雙波長法測定復方磺胺甲嘿唑片中磺胺甲嘿唑和甲氧芐啶的含量測定 磺胺甲嘿唑：精密稱取樣品細粉適量(約相當于磺胺甲嚼唑50rng與甲氧芐啶l0mg)，用乙醇溶解并稀釋至l00ml，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另精密稱取在105干燥至恒重的磺胺甲嚼唑對比品50mg和甲氧芐啶對比品l0mg，分離用乙醇溶解并稀釋至l00rnl，作為對比品溶液(1)和對比品溶液(2)。精密量取供試品溶液和對比品溶液(1)、(2)各2ml，分離加o4氫氧化鈉溶液稀釋至100ml，取對比品溶液(2)的稀釋液，以257

10、nm為測定波長(a：)，在304nm波長附近(每間隔05nm)挑選等汲取點波長為參比波長(a)，要波特長分離測定供試品溶液和對比品溶液(1)的稀釋液的汲取度，求出各自的汲取度差值(a)，計算。 甲氧芐啶：精密量取供試品溶液和對比品溶液(1)、(2)各5ml，分離加鹽酸一氯化鉀溶液稀釋至looml，取對比品溶液(1)的稀釋液，以239onto為測定波長(az)，在295nm波長附近(每間隔o2ntn)挑選等汲取點波長為參比波長汲取度，求出各自的汲取度差值(a)，計算。測定時需注重儀器參數(shù)的設定，規(guī)定儀器狹縫不得大于1nm。 中國藥典附錄j為維生素a測定法，因為維生素a制劑中含有稀釋用油和維生素a

11、原料藥中混有其他雜質，所測得的汲取度不是維生素a獨有的汲取，非維生素a物質的無關汲取所引起的誤差采納校正公式校正，以便得到正確結果。校正公式系采納三點法，除其中一點是在汲取峰波特長測得外，其他兩點分離在汲取峰兩側的波特長測定，因此儀器波長若不夠精確時，即會有較大誤差，故在測定前，應校正儀器波長。維生素a測定法有兩種，合成維生素a和自然魚肝油中的維生素a是酯式維生素a，如供試品中干擾測定的雜質較少，能符合第一法測定的規(guī)定時，可挺直用溶劑溶解供試品后測定；否則應按其次法，經(jīng)皂化提取，除去干擾后測定。詳細測定辦法及計算公式參見中國藥典品種項下的描述。 例8托吡卡胺滴眼液的含量測定精密量取本品適量(約

12、相當于托吡卡胺25mg)置i00ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取l0ml兩份，各置l00ml量瓶中，分離加01moll硫酸溶液與硼砂標準緩沖液并稀釋至刻度，搖勻，酸溶液在254nm的波特長測定汲取度(a。)，緩沖溶液在296nm的波特長測定汲取度(a一)，計算托毗卡胺在254nm波特長的汲取度(a254一0764a。)，按c。，h。n：0：的汲取系數(shù)e：羔為172計算，即得。 五、光電比色法 測定能汲取可見光的有色溶液的辦法，稱為可見分光光度法，通常又稱為光電比色法。光電比色法還可使許多不汲取可見光的無色物，用顯色反應變成有色物，用光電比色法測定。通過顯色反應，還能提高測定的敏捷度和

13、挑選性。 1顯色反應的要求 顯色反應有各種類型，如絡合反應，氧化還原反應，縮合反應等。其中應用最廣的是絡合反應。同一物質?？膳c多種顯色劑反應，生成不同的有色物質。畢竟選用何種顯色劑較好，應考慮下列因素： (1)敏捷度高光電比色法普通用于微量組分的測定，因此挑選敏捷的顯色反應是首先要考慮的。吸光物質的摩爾汲取系數(shù)的大小是敏捷度大小的主要標記，普通來說，s10。時，可以認為該反應的敏捷度較高。 (2)挑選性好挑選性好是指顯色劑只能與某一個或極少數(shù)組分發(fā)生顯色反應。假如僅與某一個組分發(fā)生反應的試劑稱為特效顯色劑，事實上這種特效顯色劑是沒有的。但是干擾較少或嚴格控制反應的條件可以除去干擾顯色反應的影響

14、，使顯色劑成為挑選性試劑。 (3)顯色劑在測定波長無顯然汲取，這樣，試劑空白小，可以提高測定的精確度。 (4)有色化合物的穩(wěn)定性顯色反應產物必需有足夠的穩(wěn)定性，以保證測得的吸光度有一定的重臨性。 (5)被測物質與生成的有色物質之間，必需有確定的定量關系，才干確保測定的精確度。 2顯色反應的條件 無數(shù)顯色反應需要制造條件或控制在最佳條件下，提高反應的敏捷度、挑選性和穩(wěn)定性，才干滿足光度法測定的要求。因此，必需了解影響顯色反應的平衡及反應速度等各種因素，然后利用其有利因素，充實條件，以便得到精確牢靠的結果。影響顯色反應的因素主要有顯色劑用量、ph、反應溫度和反應時問。 (1)顯色劑用量為了使顯色反應舉行徹低，保證被測組分定量地改變?yōu)橛猩衔?，按照反應的平衡原理，應當有過量的顯色劑。但顯色劑用量并不是愈多愈好，有時往往加入過多的顯色劑，反而生