您在為研究蛋白質(zhì)之間相互作用苦惱嗎

1、 您在為研究蛋白質(zhì)之間相互作用苦惱嗎？ 您的文章苦于沒有好的圖片結(jié)果嗎？ 您希望在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方向上走的更遠(yuǎn)嗎？DuolinkÒ專注研究蛋白相互作用顛覆了傳統(tǒng)的蛋白相互作用的研究方法 Duolink®蛋白研究技術(shù)Olink生物科學(xué)來自于瑞典，目前已成為蛋白研究和診斷技術(shù)的全球領(lǐng)先者。Duolink®擴(kuò)展了傳統(tǒng)的免疫功能和免疫組化研究，使用現(xiàn)有的抗體，通過熒光顯微鏡或明視野顯微鏡對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行研究。這項(xiàng)技術(shù)適用于蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)之間相互作用以及蛋白質(zhì)修飾研究，是信號(hào)傳導(dǎo)研究的良好工具，適合于微量復(fù)雜的生物樣品的實(shí)驗(yàn)。鄰位連接技術(shù)和滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)的完美結(jié)合DNA放大 用于未修飾

2、的細(xì)胞和組織可視定量信號(hào)定位您知道PLA （proximity ligation assay）技術(shù)嗎？鄰位連接技術(shù)是近幾年建立的一種可以用于研究蛋白質(zhì)的定量、定位、相互作用、修飾以及功能的新DNA連接技術(shù)。該技術(shù)通過一對(duì)鄰位探針將特異性蛋白質(zhì)檢測(cè)轉(zhuǎn)換為DNA序列分析，可以直接分析復(fù)雜的生物樣品，檢測(cè)靈敏度和精確度高。PLA技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)的核心是一對(duì)鄰位探針。該對(duì)探針將單鏈DNA與一對(duì)蛋白識(shí)別因子相連接，使其可以通過免疫吸附或其他方法同步結(jié)合到一個(gè)待測(cè)蛋白分子上。PLA反應(yīng)分為3步：圖1：一抗，目標(biāo)蛋白和PLA探針共孵育，一抗與目標(biāo)蛋白相結(jié)合，隨后帶寡核苷酸PLA探針與抗體相連接。圖2：加入連接

3、酶溶液，其中含有兩條寡核苷酸鏈和連接酶，雜交的寡核苷酸環(huán)化圖3：加入含有核苷酸和聚合酶的擴(kuò)增溶液。其中的一條PLA探針作為引物，以環(huán)化的產(chǎn)物作為模板向外進(jìn)行擴(kuò)增，隨后加入檢測(cè)溶液，包括熒光素標(biāo)記的寡核苷酸，它能跟環(huán)化的產(chǎn)物雜交。通過熒光顯微鏡或明視野顯微鏡觀察。您知道滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)（Rolling circle amplification ）技術(shù)嗎？  RCA既可進(jìn)行靶核酸擴(kuò)增，也可進(jìn)行信號(hào)放大擴(kuò)增。有線性與指數(shù)兩種形式的RCA。線性RCA是引物結(jié)合到環(huán)狀DNA上后，在DNA聚合酶作用下被延伸。產(chǎn)物是具有大量重復(fù)序列（與環(huán)狀DNA完全互補(bǔ)）的線狀單鏈。線性RCA用于靶核酸擴(kuò)增僅限于一些

4、具有環(huán)狀核酸的病毒、質(zhì)粒和環(huán)狀染色體。    Schwetizetr等人建立了免疫RCA，引物的5´端標(biāo)記有抗體，抗原抗體反應(yīng)后，加入RCA反應(yīng)組分與環(huán)狀DNA模板進(jìn)行RCA，然后標(biāo)記有熒光素的探針與RCA產(chǎn)物原位雜交，最后對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)，該方法的靈敏度可達(dá)0.1pg/ml。Duolink檢測(cè)每一個(gè)蛋白和它的相互作用?？倳?huì)有一款試劑盒符合您的需求。蛋白相互作用的研究可視化，量化。顛覆傳統(tǒng)方法免疫共沉淀/Western blot Duolink是co-IP和 co-localization完美結(jié)合常用研究方法的對(duì)比鑒別單一蛋白定位分析內(nèi)源性蛋白質(zhì)蛋白之

5、間的相互作用組織機(jī)構(gòu)分析未修飾的細(xì)胞FRETBRETBiFCCo-immunoprecipitationCo-localizationPLA細(xì)胞經(jīng)過生長(zhǎng)因子的刺激后，定量研究PDGF和VEGF受體的相互作用紅色： PDGF/VEGF 受體相互作用藍(lán)色： Hoechst染核綠色： Alexa 488-鬼比環(huán)肽染細(xì)胞質(zhì)（細(xì)胞骨架）特異性的結(jié)合靶蛋白，精確定量 輸入來源于顯微鏡里的原始數(shù)據(jù)。顯微鏡廠商Olympus, Leica, Nikon and Zeiss 自動(dòng)的檢測(cè)胞核和胞質(zhì)y 對(duì)細(xì)胞群體中單個(gè)細(xì)胞逐一分析 精確的定位您感興趣的區(qū)域 可以靈活方便的輸出excel表格高敏感度檢出siRNA檢出

6、效果：AB表明在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞中RNAi沉默SMAD4基因表達(dá)。A圖表明使用RNAi干擾的小鼠細(xì)胞。B圖表明未處理的細(xì)胞，藍(lán)色表示用Hoechst 33342 染核，紅色表示PLA信號(hào)單個(gè)細(xì)胞檢出經(jīng)過處理的細(xì)胞PLA信號(hào)減弱，達(dá)到一個(gè)細(xì)胞僅僅只有0-10 PLA信號(hào)使用western blot檢出A表示未處理的細(xì)胞SMAD4基因的表達(dá)，B表示處理過后SMAD4的表達(dá)SiRNA研究Duolink的優(yōu)勢(shì)：方法精確定量蛋白水平定位單一細(xì)胞微量樣品Real-time PCR××××Western blotting×××免疫染色&

7、#215;Duolink亞細(xì)胞的原位檢測(cè) 準(zhǔn)確定位 還原細(xì)胞最真實(shí)的狀態(tài)l 無需細(xì)胞裂解l 無需過表達(dá)l 不受傳統(tǒng)Tag標(biāo)簽的限制 僅僅需要少量細(xì)胞客戶反饋“we were able to confirm data from a 2-hybrid screen and from co-immunoprecipitation experiments that demonstrated a dynamic interaction between a membrane receptor and a transcription factor.”Roxana Pincheira PhD, Univers

8、ity of California San Francisco“ allows visualization of the cellular compartment (nucleus, cytoplasm, etc) in which protein-protein interactions take place”Mark Wade, PhD, Gene Expression Laboratory (Wahl Lab), The Salk Institute, San Diego, USA“ a state of the art quantitative protein technology t

9、hat has furthered our research on human brain tumors above and beyond classical protein techniques.”Markus Bredel, MD, PhD, Northwestern University, Chicago“ may ultimately prove to be equivalent to FRET, but with the significant benefit of detecting endogenous protein-protein interactions.”David A.

10、 Cheresh, Ph.D., Professor and Vice Chair of Pathology, University of California, San Diego, Moores Cancer Center“ an important tool for visualization of novel protein-protein interactions in cell lines and primary cells from different species.”Hans Matsson, PhD, Dept. of Biosciences and Nutrition,

11、Karolinska Institute, Sweden“ a state of the art quantitative protein technology that has furthered our research on human brain tumors above and beyond classical protein techniques.”Markus Bredel, MD, PhD, Northwestern University, Chicago“ may ultimately prove to be equivalent to FRET, but with the significant benefit o