PCR實(shí)驗(yàn)室管理制度

1、PCR實(shí)驗(yàn)室管理制度i.o目的建立PCR實(shí)驗(yàn)室的工作規(guī)范，確保分子診斷室正常工作。2. 0范圍PCR實(shí)驗(yàn)室，包括試劑準(zhǔn)備間、標(biāo)本制備間、擴(kuò)增間的使用及管理。職責(zé)3. 0PCR實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守本文件的規(guī)定。4.0內(nèi)容4.1在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，在隔離臺(tái)戴好頭套口罩，穿上鞋套與實(shí)驗(yàn)服。4. 2試劑準(zhǔn)備間4.1.1 1配電房先打開(kāi)風(fēng)機(jī)（先開(kāi)送風(fēng)機(jī)，再開(kāi)排風(fēng)機(jī)），再把空調(diào)系統(tǒng)打開(kāi)。關(guān) 閉時(shí)的順序相反。4.2.2其它室的用品不得帶入本室。4.2.3 從PCR實(shí)驗(yàn)室1號(hào)入口門(mén)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，到達(dá)試劑準(zhǔn)備間的緩沖間，脫下 白色工作服，掛在緩沖間的左側(cè)，在緩沖間的右側(cè)更換試劑準(zhǔn)備間的專用工作服（藍(lán)色），進(jìn)入試劑

2、準(zhǔn) 備間，實(shí)驗(yàn)中須戴一次性手套，手套常更換。4.2.4 2.4打開(kāi)已滅菌的超凈臺(tái)，通風(fēng)一段時(shí)間，排走臭氧。取出當(dāng)次實(shí)驗(yàn)需配制 和使用的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。4.2.5 操作應(yīng)在冰上進(jìn)行。Taq酶盡量在配液的最后一步加入。應(yīng)減少dNTP反 復(fù)凍融的次數(shù)。每次實(shí)驗(yàn)后將槍調(diào)至最大量程。加模板前打開(kāi)廢液缸蓋，加完模板后務(wù)必蓋上廢液缸的蓋子。4. 2.6實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本 室專用的記錄本和筆，打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。使用過(guò)的離心管、吸頭須置于3%的HC1溶液 中浸泡、消毒后方可棄之。4. 2.7打開(kāi)傳遞窗門(mén)，墊上一次性手套，將配好的試劑放到

3、傳遞窗里，關(guān)上傳 遞窗門(mén)。4.2.8在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。4. 3標(biāo)本制備間1.1.1 3.1在標(biāo)本制備間的緩沖間，脫下白色工作服，換上標(biāo)本制備間專用的工作 服（粉紅色），進(jìn)入標(biāo)本制備間。1.1.2 打開(kāi)傳遞窗的門(mén)，取出配好的試劑，使用本區(qū)專用的加樣器和帶濾芯槍 頭。4. 3.3實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，使用過(guò)的離心管、帶濾芯槍頭 須置于3%的HC1溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.3.4 做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆，打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈旋 鈕到20分鐘處。4.3.5 打開(kāi)傳遞窗門(mén)，墊上一次性手套，將配好的試劑放到傳遞窗里，關(guān)上傳 遞窗門(mén)。4.3.6提取基因

4、組模板，提取過(guò)程中丟棄的槍頭、離心管和廢液請(qǐng)丟棄 在此垃圾袋并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即將垃圾袋扎口丟棄。提取質(zhì)粒可先提取野生型質(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每次 提取工作完成后擦拭臺(tái)面。4. 3.7在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。4.4擴(kuò)增間在擴(kuò)增間的緩沖間，脫下白色工作服，換上擴(kuò)增間專用工作服（綠色）。4.4.14.4.2打開(kāi)傳遞窗門(mén)，取出配好的試劑，關(guān)上傳遞窗門(mén)。1.1.2 3打開(kāi)PCR儀預(yù)熱20mino4.4.4 將反應(yīng)管放入PCR儀中，關(guān)好門(mén)。4.4.5 脫掉手套，設(shè)定程序，并命名。4.4.6 結(jié)束后需待儀器冷卻后方可取出PCR儀里的試劑，取出時(shí)用鐐子將試劑 條夾出，注意勿要使管蓋打開(kāi)，用三個(gè)

5、PE手套包好方可棄之。機(jī)器上不允許存放PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，每 次實(shí)驗(yàn)后請(qǐng)自行及時(shí)清理PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。4.4.7 結(jié)束實(shí)驗(yàn)后，到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關(guān)掉，再關(guān)掉排風(fēng)機(jī)，之后關(guān)掉送 風(fēng)機(jī)。4.4.8文件的處理：當(dāng)天所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)天拷到部門(mén)電腦上處理，復(fù)制 一份將文件名改為記錄本上的命名。可將試驗(yàn)結(jié)果導(dǎo)到PPT上，并標(biāo)記。4.4.8 5傳遞窗的使用4. 5.1傳遞窗每天早上滅菌20分鐘一次。當(dāng)天使用可不用再次滅菌。將試劑 放到傳遞窗時(shí);在底下墊上一層手套。4. 6壓力監(jiān)控4. 6.1每天早上空調(diào)運(yùn)行半小時(shí)后，記錄各PCR實(shí)驗(yàn)室的壓力差:試劑準(zhǔn)備 間:5, 10;標(biāo)本制備間：-5, -10;擴(kuò)增間：，-

6、10。各緩沖間的壓力為+5.4.7 超凈臺(tái)的擺放常用的實(shí)驗(yàn)移液槍架消毒試劑 液槍頭盒槍頭盒廢液 放置標(biāo)本的離心管 缸4.8 實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理4. 8.1禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室;參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須在實(shí)驗(yàn)室管理員 協(xié)助下進(jìn)行。4.8.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各工作人員應(yīng)有個(gè)人防護(hù)意識(shí)，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)更 換工作服和鞋子，穿著整潔，不留長(zhǎng)指甲，不佩戴首飾，長(zhǎng)發(fā)應(yīng)束于腦后；禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼 鏡、化妝及儲(chǔ)存食物;禁止將個(gè)人物品帶入實(shí)驗(yàn)室;實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)避免手？口，手?眼，手?鼻接觸， 以防止間接感染。4. 8.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后仍需保留使用的物質(zhì)，應(yīng)移入具塞的容器中，并做好標(biāo)識(shí)標(biāo) 簽，并寫(xiě)清楚名稱、濃度、配

7、制日期、儲(chǔ)存溫度、有效期和配制人，并放置于相應(yīng)保存條件下；勿置室溫 過(guò)夜。4. 8.4每天配制使用濃度的消毒液，放于固定地點(diǎn)，用于污染時(shí)消毒用， 應(yīng)定期更換消毒液品種。4.8.5每天上班8點(diǎn)45分先關(guān)實(shí)驗(yàn)室紫外燈，然后開(kāi)啟 風(fēng)扇，打開(kāi)實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶。每天9點(diǎn)前每間負(fù)責(zé)人填寫(xiě)冰箱溫濕度記錄表。4.8.6下午4點(diǎn)45分每間負(fù)責(zé)人填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)室及冰箱溫濕度記錄表，清理實(shí)驗(yàn) 室衛(wèi)生，檢查實(shí)驗(yàn)室垃圾及廢液缸槍尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶內(nèi)，通知專門(mén)的垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車(chē)進(jìn) 行清除。在生物安全垃圾桶周邊噴灑84消毒液（按1:9或者1:10比例配制）。4.8.7每日衛(wèi)生打掃完后，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)噴灑84消毒液，噴灑完，待2

8、0分鐘過(guò) 后，對(duì)實(shí)驗(yàn)室儀器表面及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要用干布擦拭一遍，再用清水清洗一遍，防止儀器被腐蝕。MX3000P儀器反應(yīng)孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。4. 8.8關(guān)閉風(fēng)扇，開(kāi)啟紫外燈，過(guò)夜。關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶，噴灑84消毒 液。4. 8.9第一、二間實(shí)驗(yàn)室的3%鹽酸在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配制，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4. 8. 10實(shí)驗(yàn)服的清洗時(shí)間為每月的1、2、3、15、16、17日，1、15日洗第一 間實(shí)驗(yàn)服，2、16日洗第二間實(shí)驗(yàn)服，3、17日洗第三間實(shí)驗(yàn)服，遇節(jié)假日順延。4. 8.11每周對(duì)回風(fēng)口過(guò)濾網(wǎng)進(jìn)行清洗，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4.8.12如遇加班，以上由加班人員負(fù)責(zé);若有請(qǐng)假，請(qǐng)假人員需與其他人員協(xié) 商調(diào)整，否則視為未執(zhí)行。4.8.13以上執(zhí)行情況每天都應(yīng)填寫(xiě)記錄表，并由專人檢查確認(rèn)簽字。5. 0注意事項(xiàng)5.1.1 PCR實(shí)驗(yàn)室各室使用、進(jìn)入及單一流向制度，請(qǐng)各位技術(shù)員不要貪方 便，嚴(yán)格按照規(guī)程操作，以免造成嚴(yán)重后果。5 . 1.