凍干粉針劑凍干工藝研究經(jīng)驗匯總

1、一、冷凍干燥過程研究真空冷凍干燥是先將制品凍結到共晶點溫度以下，使水分變成固態(tài)的冰，然后在適當?shù)臏囟群驼?空度下，使冰升華為水蒸氣。再用真空系統(tǒng)的冷凝器（水汽凝結器）將水蒸氣冷凝，從而獲得干燥制品的技術。該過程主要可分為：制品準備、預凍、一次干燥（升華干燥）、二次干燥（解吸干燥）和密封保存五個步驟。1產品預凍1.1 制品的玻璃化玻璃化的作用。近年來，人們已經(jīng)逐漸地認識到，凡是成功的低溫保存，細胞內的水均以玻璃態(tài) 的形式被固化，在胞內不出現(xiàn)晶態(tài)的冰。玻璃化是指物質以非晶態(tài)形式存在的一種狀態(tài)，其粘度極大， 分子的能動性幾乎為零， 由于這種非晶體結構的擴散系數(shù)很低，故在這種結構中分子運動和分子變性反

2、應非常微弱，不利的化學反應能夠被抑制，從而提高被保存物質的穩(wěn)定性。玻璃化的獲得。在產品預凍時，只要降溫速率足夠快，且達到足夠低的溫度，大部分材料都能從 液體過冷到玻璃態(tài)固體?！白銐蚩臁钡囊馑际窃诮禍剡^程中迅速通過結晶區(qū)而不發(fā)生晶化，“足夠低”指的是必須把溫度降到玻璃化轉變溫度Tg以下。對于具有一定初始濃度的細菌制品，其預凍過程一般通過“兩步法”來完成。第一步是以一般速率進行降溫，讓細胞外的溶液中產生冰， 細胞內的水分通過細胞膜滲向胞外， 胞內溶液的濃度逐漸提高； 第二步是以較高速率進行降溫 ，以實現(xiàn)胞內溶液的玻璃化。此法又稱“部分玻璃化法”。當初始濃度為 A的溶液（A點）從室溫開始冷卻時，隨著

3、溫度的下降，溶液過冷到B點后將開始析出冰，結晶潛熱的釋放又使溶液 局部溫度 升高。溶液將沿著平衡的熔融線不斷析出冰晶，冰晶周圍剩余的未凍溶液隨溫度下降，濃度不斷升高，一直下降到熔融線（Ta）與玻璃化轉變曲線（Tg）的交點（D點）時，溶液中剩余的水分將不再結晶（稱為不可凍水），此時的溶液達到最大凍結濃縮狀，濃度較高，以非晶態(tài)的形式包圍在冰晶周圍，形成鑲嵌著冰晶的玻璃體。1.2 降溫速率與預凍溫度預凍速度決定了制品體積大小、形狀和成品最初晶格及其微孔的特性，其速度可控制在每分鐘降溫1 C左右。對結晶性制劑而言，凍結速度一般不要太慢，凍結速度慢雖然便于形成大塊冰晶體，維持通暢的 升華通道，使升華速度

4、加快，但如果結晶過大、晶核數(shù)量過少、制劑的結晶均勻性差，也不利于升華干 燥。對于一些分子呈無規(guī)則網(wǎng)狀結構的高分子藥物，速凍能使其在藥液中迅速定型，使包裹在其中的溶媒蒸汽在真空條件下迅速逸出，反而能使升華速度加快。因此，溶液的最佳冷凍速度是因制劑本身的特性不同而變化的。如蛋白多肽類藥物的凍干，慢速凍結通常是有利的，而對于病毒、疫苗來說，快速降 溫通常是有利的。20世紀60年代，人們成功地保存了哺乳動物的某些細胞，其降溫程序是：以1 C/min降至U-15C,然后以4-5C/min降到-79C,這一程序與前面所提及的“兩步法”是一致的。但也有降溫更慢和更快的事例，如紅細胞和倉鼠細胞的最佳冷卻速率超

5、過50 C/min,而保存淋巴細胞的降溫速率只有 0.1 C/min。預凍溫度須低于制品的玻璃態(tài)和橡膠態(tài)轉變溫度，以保證箱內所有的制品溫度都低于共熔點，使其全部凝結成固體；對于許多溶液，它們的玻璃化轉變溫度一般要比共晶點低 10-30。至于預凍的最終溫度是控制在低于共晶溫度還是低于玻璃化轉變溫度，這主要取決于我們希望制品在凍結過程中所達到的固化狀態(tài)。對于具有類似膜結構或活性成分制品的冷凍干燥，應盡量使其最終凍結溫度低于玻璃化轉變溫度。一般制品預凍溫度在共熔點以下10-20 C保持2-3h,保證冷凍完全；多數(shù)疫苗的共熔點在-15C到-20C之間，因此預凍溫度要在-25C到-40C。目前最常用的一

6、種冷凍方法是凍干機板層冷凍。2 一次干燥一次干燥（升華干燥）是指低溫下對制品加熱，同時用真空泵抽真空，使其中被凍結成冰的自由水直接升華成水蒸氣。待成品中看不到冰時，則可認為一次干燥已完畢，此時制品溫度迅速上升，接近板溫，制品中最初水分的 90%以上已被除去。2.1 一次干燥中制品溫度的控制在升華干燥過程中，制品吸收熱量后所含水分在真空下升華成水蒸氣，消耗大量熱能，使得制品溫度較板層溫度低十幾甚至幾十度。多數(shù)動物用疫苗一次干燥應在-30C或以上溫度（低于產品塌陷溫度尤其是共熔點溫度）下進行，因此板層溫度一般在-10-3C之間。如果溫度過高，會出現(xiàn)軟化、塌陷等現(xiàn)象，造成凍干失?。蝗绻麥囟冗^低，不僅

7、給制冷系統(tǒng)提出了過高的要求，而且大大降低了升華過 程的速率，費時又耗能。盡管在有些場合下，一次干燥的最大許可溫度由制品的相變溫度或共晶溫度決 定，但更一般的情況下，預凍的制品中都有一定份額的無定形態(tài)，故應當將凍干的一次干燥過程控制在Tg以下進行。在干燥過程中，如制品干燥層溫度上升到一定數(shù)值時，其部分干燥物質所形成的多孔性骨架剛度 降低，干燥層內顆粒出現(xiàn)脫落，直至骨架塌陷，造成已被干燥部分的微孔通道被封閉，阻止升華的進行，使升華速率減慢，最終可導致凍干產品的殘余水分含量過高，產品的復水性與穩(wěn)定性差。 此時的溫度稱為塌陷溫度Tco塌陷溫度Tc是在凍干過程中樣品所特有的特征溫度，是由制品材料及干燥層

8、的多孔性 結構所決定。有人認為，在多數(shù)情況下，塌陷溫度Tc要比玻璃化車專變溫度 Tg高20左右。對于一個特定的凍干制品，其共晶溫度、玻璃化轉變溫度可通過DSC （差式掃描量熱法）測得，而塌陷溫度可通過凍干顯微鏡和介電分析測得。目前大多數(shù)的操作，都是在整個升華干燥過程中保持加熱溫度不變。關于是否應當這樣，存在兩 種不同的觀點。一種觀點認為，在升華干燥階段，隨著水分的升華，使制品濃度升高，其玻璃化轉變溫 度也會提高，這樣升華干燥過程中就可以適當逐漸提高溫度，加快升華進行；另一種觀點認為，在升華 干燥階段，升華的只是游離在網(wǎng)狀結構空隙中的自由水，不會對物料實體的玻璃化轉變溫度產生影響,因此升華干燥過

9、程中的加熱溫度仍應保持不變。實際上這兩種情況都可能出現(xiàn)，是和冷卻固化的情況有關的。2.2 一次干燥中冷阱溫度的控制冷阱位于真空泵進口前，升華產生的水蒸氣靠壓差的作用到達冷阱，重新結成霜，如果沒有冷阱或 其溫度不夠低，就會導致凍干室內水蒸汽壓升高，制品升華界面壓力和溫度都會上升，導致制品融化。 對于多數(shù)制品的冷凍干燥，冷阱表面溫度在 -40 -50 C之間已能滿足要求。2.3 一次干燥中的真空度一次干燥中真空度應維持13.33-26.66pa。一般說來，在升華干燥過程中真空度是維持不變的，但也可以采用循環(huán)壓力法，即控制真空系統(tǒng)的壓力在一定范圍內上下波動，以期提高干燥速度。大量研究表明，在干燥過程

10、中短期地略微提高干燥室壓力（10-20Pa）,同時干燥層表面溫度維持在接近其允許值，可以縮短干燥時間。 但干燥室壓力必須低于升華界面壓力，而升華界面的壓力所對應的升華界面溫度必須低于制品在相應濃度下的玻璃化轉變溫度。在升華過程中，有時可采用向凍干箱內充注氣體，以形成對流傳熱，但這一部分空氣量會降低真空度，因此，要對真空度進行控制，使其既能形成恰當?shù)膶α鱾鳠?，又能使制劑表面始終處于勻速干燥的壓力狀態(tài)。2.4 影響干燥效率的因素在一次干燥過程中，除了制品溫度、冷阱溫度、干燥室壓力影響干燥快慢以外，預凍速度也影響著 升華效率。慢凍形成大冰晶，升華后形成大的孔隙，有利于升華進行，干燥速度快；速凍形成細

11、小的冰 晶，升華后留下細小的通道， 干燥速度慢。但慢凍時，溶質可能發(fā)生遷移， 以至于在表面形成一層硬殼， 阻止升華進行。近年來發(fā)現(xiàn)，在凍干配方中加入5%左右叔丁醇后，凍結時會形成針狀結晶，冰晶升華后留下了管狀通道，使水蒸氣阻力大大減小，升華速率顯著提高，節(jié)省了時間和能耗。3二次干燥二次干燥（解吸干燥）是在較高的溫度下對制品加熱，使制品中被吸附的部分“束縛水”解吸變成“自由”的液態(tài)水再吸熱蒸發(fā)成水蒸氣的過程，加熱量主要用于被束縛水的解吸作用和蒸發(fā)。由于升華干燥之后，在干燥制品的多孔結構表面和極性集團上結合水的吸附能量很大，因此必須提供較高的溫度和足夠的熱量才能實現(xiàn)結合水的解吸過程。該過程中，制品

12、的含水量不斷減少，其玻璃化轉變溫度是不斷提高的，制品溫度也可以逐漸提高。在二次干燥過程中，板層溫度至少每小時增加5C-10C。成品溫度應該迅速升至板層溫度或以上，否則制品水分增多且易倒塌。二次干燥目的雖然是使殘存在多孔疏松狀固體中的水被去除，但適當?shù)乃郑ㄍǔ?-1.5%）對于保持疫苗結構完整性和活性也是必要的。制品水分過低，菌體表面親水基團失去保護，會直接與氧接觸， 影響菌體的存活率。最終板層溫度是成品水分含量的一個主要決定因素，其數(shù)值不能超過制品的最高允許溫度，對于蛋白質藥物其最高允許溫度一般應低于40 C,對于絕大多數(shù)動物用疫苗，最終板層溫度應該在25 C-35 c之間。一般細菌性產品最

13、終板層溫度為30C-35C,病毒性產品為 25 C。4密封保存凍干結束后，通過板層液壓升降系統(tǒng)，將半加塞的疫苗瓶在真空狀態(tài)下密封。使用的管狀玻璃瓶和 膠塞應配套，將其密封后置 45c水浴24小時，觀察疫苗瓶中是否有水被吸入。真空密封的完整性應在 溫度壓力下評估，簡單的試驗是將成品在45c水浴24小時，觀察疫苗瓶中是否有水被吸入。膠塞應該在135c干燥4小時，高壓滅菌膠塞可使疫苗的水分提高2-5%。二、叔丁醇在凍干制劑中的應用研究冷凍干燥工藝已經(jīng)被廣泛地應用于藥物制劑的制備過程中。通常情況下，水是惟一的溶劑，但有 時候藥物在萃取和結晶過程中殘留的有機溶劑，也可能會被帶入到最后的凍干溶液中，這樣會

14、導致一些新的變化，含少量有機溶劑的溶液的凍干工藝引起人們的關注，并被深入研究。叔丁醇-水共溶劑就是其中最常見的，以它為溶劑進行冷凍干燥的工藝可以用于多種制劑的制備，具有多方面優(yōu)勢。由于叔丁醇作為凍干劑具有多重優(yōu)勢，已被廣泛用于制劑中， 純的叔丁醇可以單獨作為溶劑，溶解水不溶性藥物或水中穩(wěn)定性不好的藥物，進行凍干。國內外研究較多是叔丁醇與水形成共溶劑體系進行冷凍干燥，其在藥劑領域中應用有多方面。制備固體制劑具明顯優(yōu)勢難溶于水的藥物溶于叔丁醇中， 水溶性物質溶解于水中， 兩者以適當?shù)谋壤旌希?得到可以共同溶 解水溶性與脂溶性物質的澄明共溶劑， 此溶液經(jīng)進一步凍干可以得到固體分散體。 采用這種工藝

15、制備藥 劑具有多種好處。加快藥物的升華速度 研究發(fā)現(xiàn)，將溶解慶大霉素的叔丁醇溶液與乳糖水溶液以合適的比例混合形 成共溶劑后凍干，其凍干周期可由39小時縮短為28小時，同時所得凍干產品仍保持多孔性。提高藥物的穩(wěn)定性 前列腺素E為穩(wěn)定性很差的藥物，采用體積分數(shù)為20%的叔丁醇-水共溶劑將藥 物和乳糖共同溶解，凍干后得到穩(wěn)定凍干粉針。目前，采用此凍干工藝生產的前列腺素E無菌粉末制劑已在國外上市。增溶難溶性藥物 Aldipine是一種從海洋生物中提取的抗癌活性物質，其相對分子質量為1109,在水中幾乎不溶。研究人員探索到一種新的增溶方法：將藥物先溶于叔丁醇中，再與乳糖水溶液按體積比4： 6的比例形成澄

16、明共溶劑，進行凍干，得到穩(wěn)定的凍干物， 使用前采用聚氧乙烯蔗麻油 -乙醇-水共溶劑系統(tǒng)來復溶，生理鹽水稀釋后注射給藥。簡化制備固體分散體工藝 最近，研究人員將脂溶性藥物連同水溶性寡糖共溶于叔丁醇-水共溶劑體系，凍干后制成固體分散體。采用此方法可以將脂溶性藥物分散在一些玻璃化溫度較高的無定型輔料中， 使藥物保持在無定型狀態(tài)，可顯著提高藥物的溶解速度和藥物的溶解度。這種工藝可以避免用熔融法制備固體分散體對熱穩(wěn)定性差的藥物的破壞，也能避免采用溶劑法制備固體分散體時使用氯仿、二氯甲烷 等毒性較大的溶劑。促進藥物結晶叔丁醇-水共溶劑體系制備固體分散體可以使藥物保持在無定型狀態(tài)。另一方面，叔丁醇也可用來促

17、進難結晶藥物的結晶。這是因為，叔丁醇的加入會改變水的結晶狀態(tài)，進而也會使溶在水中的藥物結晶狀態(tài)發(fā)生改變。對抗生素頭抱暖吩鈉的研究發(fā)現(xiàn)，加入少量的叔丁醇可以使很難結晶的藥物得到針狀的結晶。磷霉素鈉屬難凍結的物質，因為藥物和水的結合力很強，形成水合物的凝固點急 劇下降到零下50c左右，普通的凍干機很難將其凍結，同時很低的溫度也使藥物的凍干周期大大延長。而加入叔丁醇后，由于叔丁醇與水的結合力較強，使得共溶劑系統(tǒng)的凝固點升高，同時大大地提高了升華速度。制備多種分散體系制備脂質體 以叔丁醇作為溶劑溶解磷脂，經(jīng)凍干后得到結構疏松的磷脂固體，加入水可以迅速水 化制成脂質體。這種方法類似薄膜分散法，可以制得粒

18、徑較大的微米級多室脂質體，這種脂質體制備工藝已經(jīng)應用于試驗和規(guī)模生產。最近，沈陽藥科大學的科研人員發(fā)明了一種新的脂質體制備工藝，即將相變溫度低的大豆磷脂溶于叔丁醇，進一步與蔗糖水溶液按適當比例混合，得到澄明溶液，凍干得到固體分散體，加水水化，即可 得到粒徑均勻的小單室脂質體。該工藝解決了脂質體穩(wěn)定性不好的問題，建立了一個形成小單室脂質體的模型。在凍干過程中， 磷脂的叔丁醇溶液先析出結晶，這種結晶的形成被黏度較大的糖溶液限制，只能形成較小的粒徑。同時，在析出結晶這個相分離的過程中，磷脂作為一種表面活性劑，吸附在兩相的界面上，降低表面張力， 即磷脂包裹的叔丁醇分散在糖基質中，最終形成一種類似乳劑的

19、狀態(tài)。吸附在兩相界面的磷脂在凍干過程中隨叔丁醇升華，形成定向排列磷脂雙分子層片斷，由于雙分子片斷足夠小，水化后形成了小單室的脂質體。研究人員針對相變溫度高的飽和磷脂，設計了另一種工藝，即將其溶于叔丁醇，在實驗溫度大于相變溫度時注入到水中，形成脂質體，再進行凍干得到凍干脂質體。此方法可縮短凍干周期。研究證明，將飽和磷脂 DMPC-DMPG（摩爾比為7： 3）與慈環(huán)類抗癌藥 Annamycin以質量比50 ： 1 的比例溶于叔丁醇-二甲基亞碉-水共溶劑體系，并加入表面活性劑吐溫-80,冷凍干燥制成凍干粉末， 水 化后也可得到亞微米級的脂質體。制備非離子表面活性劑囊泡磷脂以外的一些非離子表面活性劑，

20、也可以與水溶性介質共溶于叔丁酉I-水體系，冷凍干燥得到凍干分散體，水化后得到非離子表面活性劑囊泡。制備高聚物膠團 一些高分子共聚物可以與脂溶性藥物形成膠團，增加藥物在水中的溶解度。通常 的做法是，將高分子共聚物和藥物共溶于水中，此法對于很多水溶性差的藥物來說，會造成載藥量減少，并且由于高分子材料自身的水溶性較差，很多時候需要將兩者共同溶于有機溶劑中，然后用水透析出去。還有一種方法是形成水包油的乳劑再除去有機溶劑。這些方法都比較復雜且不經(jīng)濟。最近，有人將叔丁酉I-水的系統(tǒng)引入到高聚物膠團的制備過程中，制備了紫杉醇和多烯紫杉醇的高分子膠團，取得較好效 果。其方法是將藥物與高分子共溶制備澄明溶液，凍

21、干后的固體分散物加水水化后即得到小于100納米的膠團。此工藝簡單、方便，效果好，并且，叔丁醇-水共溶劑還可以回收利用，增加了大量生產的可行性。改進制劑工藝路線由于叔丁醇-水共溶劑體系可以將水溶性和脂溶性的物質共同溶解在一起，溶劑可以在凍干后除去。因此，可以采用此方法對很多制劑的制備工藝進行改進。蛋白質肽類的口服給藥一直是當前研究的熱點與難點。叔丁醇-水共溶劑系統(tǒng)為水溶性的蛋白質 -多肽溶于油溶液提供了一種新的藥物傳遞辦法。研究人員采用叔丁醇-水共溶劑體系，冷凍干燥制備含有蛋白質-多肽的磷脂分散體，將這種凍干分散體溶于油溶液中，制成包裹水溶性蛋白質-多肽的反膠團油溶液。為了解決難溶性藥物在水中的

22、溶解度，通常采用環(huán)糊精包合技術。常規(guī)冷凍干燥采用乙醇為溶劑溶解難溶性藥物，由于乙醇的溶解能力有限，通常需要使用較多的溶劑，并且含乙醇的共溶劑體系不易 凍結，冷凍干燥效果不好。于是，研究人員將藥物與環(huán)糊精溶于叔丁醇-水共溶劑系統(tǒng)，冷凍干燥一步制備形成包合物。由于叔丁醇溶解難溶性藥物的能力強于乙醇，且凍結完全，干燥迅速，此方法提供了 一種方便的制備環(huán)糊精包合物的新工藝。相關鏈接：叔丁醇作為凍干劑的特點目前，在室溫條件下可以凍結的有機溶劑主要有4種：叔丁醇、冰醋酸、環(huán)己烷和二甲基亞碉。其中，叔丁醇被認為是最適合制劑的凍干溶劑。其特點如下：1、凝固點高。純的叔丁醇在室溫下（25C）就可以凍結，與水混合

23、后也可以在零下幾度凍結，在現(xiàn)有的凍干機中都可以完全凍結。2、叔丁醇的蒸汽壓較高。蒸汽壓高有利于升華，節(jié)省凍干時間。3、叔丁醇與水可以任意比例混合。這一點極為重要，可以增大一些脂溶性藥物在水中的溶解度， 同時對一些水溶液中不穩(wěn)定的藥物，加入適量的叔丁醇可以抑制藥物的分解，增強藥物的穩(wěn)定性。4、叔丁醇毒性低。在凍干過程中，大部分叔丁醇可在一次干燥階段升華，在制劑中殘留量很低。5、叔丁醇自身在凍結中形成針狀結晶，能改變溶質的結晶方式，利于升華。而當少量的叔丁醇加 入到水中形成叔丁醇-水共溶劑后，可以改變水的結晶狀態(tài)，在凍結過程中形成針狀結晶，具有大的表 面積，同時冰晶升華后，留下了管狀通道，使水蒸氣

24、流動阻力大大減小，升華速率顯著提高，因此可用 叔丁醇來加快冷凍干燥過程中的傳質過程。6、叔丁醇作為凍干溶劑的優(yōu)點很多，但叔丁醇的純度以及叔丁醇作為有機溶劑的生產安全性和回 收利用問題均需引起生產者注意。三、蛋白質藥品冷凍干燥技術研究1引言由于凍干藥品呈多孔狀、能長時間穩(wěn)定貯存、并易重新復水而恢復活性，因此冷凍干燥技術廣泛應用于制備固體蛋白質藥物、口服速溶藥物及藥物包埋劑脂質體等藥品。從國家藥品監(jiān)督管理局數(shù)據(jù)庫得知，目前國內已有注射用重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子、注射用重組人干擾素a 2b、凍干鼠表皮生長因子、外用凍干重組人表皮生長因子、注射用重組鏈激酶、注射用重組人白介素-2、注射用重組人

25、生長激素、注射用 A群鏈球菌、注射用重組人干擾素a2b、凍干人凝血因子 VID、凍干人纖維蛋白原、間苯三酚口服凍干片等凍干藥品獲準上市。截止2000年2月，美國FDA已批準的生物技術藥共計 76個。2藥品凍干損傷和保護機理藥品冷凍干燥是一個多步驟過程，會產生多種應力使藥品變性，如低溫應力、凍結應力和干燥應力。其中凍結應力又可分為枝狀冰晶的形成，離子濃度的增加，PH值的改變和相分離等情況。因此，為了保護藥品的活性，通常在藥品配方中添加活性物質的保護劑。它需要具備四個特性：玻璃化轉變溫度高、吸水性差、結晶率低和不含還原基。常用的保護劑有如下幾類物質：a）糖類/多元醇：蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡

26、萄糖、麥芽糖等；b）聚合物:HES、PVP、PEG、葡聚糖、白蛋白等；c）無水溶劑：乙烯乙二醇、甘油、 DMSO、DMF等；d）表面活性劑：Tween 80等；e）氨基酸：L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、肌氨酸等；f）鹽和胺：磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽等；由于冷凍干燥過程存在多種應力損傷，因此保護劑保護藥品活性的機理也是不同的，可以分為低溫保護和凍干保護。對于低溫保護，目前被廣為接受的液體狀態(tài)下蛋白質穩(wěn)定的機理之一是優(yōu)先作用原理。優(yōu)先作用 是指蛋白質優(yōu)先與水或水溶液中的保護劑作用。在有起穩(wěn)定作用的保護劑存在的條件下，蛋白質優(yōu)先與水作用（優(yōu)先水合），而保護劑優(yōu)先被排斥在蛋白質區(qū)域外（優(yōu)先排斥

27、）。在這種情況下，蛋白質表面就比其內部有較多的水分子和較少的保護劑分子。優(yōu)先作用原理同樣適用于冷凍-融解過程。蛋白質保護劑，在溶液中被從蛋白質表面排斥，在凍結過程中能夠穩(wěn)定蛋白質。但是優(yōu)先作用機理不能完全解釋用聚合物或蛋白質自身在高濃度時保護蛋白質的現(xiàn)象。在凍干過程中，由于蛋白質的水合層被除去， 優(yōu)先作用機理不再適用。 對于凍干保護機理， 仍在研 究探討之中，目前主要有兩種：a）水替代假說。許多研究者認為由于蛋白質分子中存在大量氫鍵，結合水通過氫鍵與蛋白質分子聯(lián)結。當?shù)鞍踪|在冷凍干燥過程中失去水分后，保護劑的羥基能替代蛋白質表面的水的羥基，使蛋白質表面形成一層假定的水化膜，這樣可保護氫鍵的聯(lián)結

28、位置不直接暴露在周圍環(huán)境中，穩(wěn)定蛋白質的高級結構，防止蛋白質因凍干而變性，使其即使在低溫冷凍和干燥失水的情況下，仍保持蛋白質結構與功能的完整性。b）玻璃態(tài)假說。研究者認為在含保護劑溶液的干燥過程中，當濃度足夠大且保護劑的結晶不會發(fā) 生時，保護劑-水混合物就會玻璃化。研究發(fā)現(xiàn)在玻璃態(tài)下，物質兼有固體和流體的行為，粘度極高， 不容易形成結晶，且分子擴散系數(shù)很低， 因而具有粘性的保護劑包圍在蛋白質分子的周圍，形成一種在結構上與玻璃狀的冰相似的碳水化合物玻璃體，使大分子物質的鏈段運動受阻，阻止蛋白質的伸展和沉淀，維持蛋白質分子三維結構的穩(wěn)定，從而起到保護作用。目前大部分學者贊同水替代假說,因為可以通過

29、實驗檢測到蛋白質和保護劑之間的氫鍵，為理論提供證據(jù)。事實上，無論是 水替代假說還是玻璃態(tài)假說,它們的基礎都是基于藥液實現(xiàn)了部分或全 部玻璃化凍結。4凍干工藝及優(yōu)化由于藥品冷凍干燥過程會產生多種應力，對凍干藥品的藥性有很大的影響，因此對藥品冷凍干燥過程進行合理設計，對于減少凍干損傷和提高凍干藥品的質量有重大的意義。4.1 凍結研究冷凍干燥過程中的凍結過程非常重要，因為在凍結中形成的冰晶形態(tài)和大小以及玻璃化程度不僅影響后繼的干燥速率，而且影響凍干藥品的質量。因此在凍結過程中必須考慮配方、凍結速率、凍結方式、以及是否退火等問題。4.1.1 配方的影響配方中的固體含量會影響凍結和干燥過程。如果固體含量

30、少于2%,那么凍干藥品結構的機械性能就會不穩(wěn)定。尤其在干燥過程中，藥品微粒不能粘在基質上， 逸出的水蒸氣會把這些微粒帶到小瓶的塞 子上，有時甚至會帶到真空室當中。此外，為了獲得均勻一致、表面光滑、穩(wěn)定的蛋白質藥品，配方中必須含有填充劑、賦形劑、穩(wěn)定 劑等保護劑，這些保護劑對實現(xiàn)藥品的玻璃化凍結有重大的影響。很多糖類或多元醇經(jīng)常被用于溶液凍融和凍干過程中非特定蛋白質的穩(wěn)定劑，它們既是有效的低溫保護劑又是很好的凍干保護劑，它們對凍結的影響取決于種類和濃度。文獻對不同的保護劑進行了詳盡的研究，探討了它們的凍結特性。文獻還研究了其它保護劑的凍結特性。但是蛋白質種類很多，而且物理化學性質各異，因此不同的

31、蛋白質需要不同的保護劑配方，因此它們的凍結特性就不同，一般需要實驗。4.1.2 凍結方式凍結方式不同，產生的冰晶的形態(tài)和大小就不同，而且會影響后繼的干燥速率和凍干藥品質量。根據(jù)凍結機理，可以把凍結分為全域過冷結晶和定向結晶兩類。全域過冷結晶是指全部藥液處于相同或相近的過冷度下進行凍結的方式。在全域過冷結晶中， 凍結速率和冰晶成核溫度是重要的參數(shù)。全域過冷結晶按凍結速率的快慢可分為慢速凍結和快速凍結。快速凍結的冰晶細小，而且沒有凍結濃縮現(xiàn)象，但是存在不完全凍結現(xiàn)象。相反，慢速冷卻產生較大的冰晶，并且存在凍結濃縮的現(xiàn)象。Thomas W Patapoff等人發(fā)現(xiàn)如果把藥品直接浸入液氮或干冰-乙醇溶

32、液槽中（快速凍結），那么晶核首先在瓶壁產生，然后冰晶向中心擴散，再垂直向上擴散。由于長成的冰晶細小， 而且有水平方向的結構，導致干燥階段的傳質阻力很大，升華速率降低。實驗證明，快速凍結導致升華速率低，解吸速率快，慢 速凍結導致升華速率快，解吸速率慢。James A Searles等人認為冰晶成核溫度是全域過冷結晶的重要因素，因為它是升華速率的主要決定因素。他們在研究中發(fā)現(xiàn)，冰晶成核溫度從本質上來說是隨機的、不穩(wěn)定的，不容易控制，但是受溶液 中的微粒含量和是否存在冰晶成核體等影響因素。正是冰晶成核溫度的隨機性導致升華干燥速率的不均勻性以及與形態(tài)相關的參數(shù)，如凍干藥品表面積和解吸干燥速率。定向結晶

33、是指一小部分藥液處于過冷狀態(tài)下進行凍結的方式。Thomas W Patapoff介紹了一種垂直凍結方式。溶液用濕冰冷卻，在瓶子底部用干冰冷卻，形成晶核，然后放到-50 C的擱板上凍結。用這種方式凍結的樣品的冰晶在垂直方向呈現(xiàn)煙囪狀，在藥品表面沒有凍結濃縮層，而且整個藥品的結構均一性很好，因此在干燥時的傳質阻力很小，加快了凍干速率。Martin Kramer等人采用了另外一種方式實現(xiàn)了定向凍結。他們在真空室壓力為0.1kPa,擱板溫度為+10 C的條件下，讓溶液開始表面凍結，形成13mm左右的冰晶薄層。然后解除真空，降低擱板溫度到結晶溫度以下進行凍結。在這種條件下長成的冰晶粗大，也呈煙囪狀。同時

34、在干燥階段發(fā)現(xiàn)，升華干燥時間比采用一般凍結的時間節(jié)省了20%。分析凍干藥品時還發(fā)現(xiàn)，對甘露醇，采用這種方式凍結的凍干品的剩余含水量比采用一般凍結的要多； 但對蔗糖和甘氨酸，兩者差別不大。H Schoof等人在凍干膠原質時也采用了定向結晶的方式。凍結方式不同，產生的冰晶形態(tài)和大小就不同，后繼的干燥速率也不同。實驗證明，采用定向結晶 方式的凍結藥品的干燥速率比全域過冷結晶的快。但是無論采用哪種凍結方式，藥品溶液必須部分或全部實現(xiàn)玻璃化凍結，以保護藥品藥性。4.1.3 退火退火是指把凍結藥品溫度升到共熔溫度以下，保溫一段時間，然后再降低溫度到凍結溫度的過程。 在升華干燥之前增加退火步驟，至少有三個原

35、因：a）強化結晶。在凍結過程特別是快速凍結過程中，配方中結晶成分往往來不及完全結晶。但是如果該成分能為凍干藥品結構提供必要的支撐或者蛋白質在該成分完全結晶后會更穩(wěn)定，那么就有必要完全結晶。此外，凍結濃縮液中也會有一部分水來不及析出，使其達不到最大濃縮狀態(tài)。實驗證明，當退 火的溫度高于配方的最大濃縮液玻璃化轉變溫度Tg時，會促進再結晶的形成使結晶成分和未凍結水結晶完全。b）提高非晶相的最大濃縮液玻璃化轉變溫度Tg。從非晶相中除去 Tg較低的結晶成分，能夠提高非晶相的Tg。Barry J Aldous在研究非晶態(tài)碳水化合物的水合物結晶規(guī)律時發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過退火之后的海藻糖干燥溶液的玻璃化轉變溫度由31c

36、上升到79 C,大大提高了穩(wěn)定作用。c）改變冰晶形態(tài)和大小分布， 提高干燥效率。James A Searles等人研究認為不同的成核溫度產生不 同的冰晶形態(tài)和粒徑大小，繼而導致升華干燥的速率的不均勻。但是一個過程中的干燥速率是由最慢的干燥藥品確定的，因此不均勻的干燥速率會影響藥品的質量和生產的經(jīng)濟性。研究證實退火過程中的相行為和重結晶可以減小由于成核溫度差異造成的冰晶尺寸差異及干燥速率的不均勻性，提高干燥效率和藥品均勻性。為了達到退火目的，在退火操作中，必須考慮加熱速率、退火溫度、退火時間等參數(shù)。但是目前由 于實驗手段不夠先進和理論知識比較缺乏，退火機理尚有疑問，退火參數(shù)的選取仍然沒有依據(jù)。4

37、.2 干燥藥品冷凍干燥的干燥過程可以分為兩個階段，一次干燥和二次干燥。在一次干燥階段除去自由水， 在二次干燥階段除去部分結合水。干燥過程占據(jù)了藥品冷凍干燥過程的大部分能耗，因此采取有效措施提高干燥速率顯得非常有意義。目前，大都采取控制擱板和藥品溫度、冷阱溫度和真空度的做法來實現(xiàn)干燥速率的提高。藥品溫度的控制：包括凍結層和已干層的溫度控制?？刂苾鼋Y層溫度的原則是在保證凍結層不發(fā)生熔化（在低共熔點以下） 的前提下，溫度越高越好?？刂埔迅蓪訙囟鹊脑瓌t是在不使物料變性或已干層 結構崩塌的前提下、盡量采用較高的干燥溫度。而擱板溫度的控制是以滿足藥品溫度控制為標準。冷阱溫度：凍干過程中水升華的驅動力是藥品

38、和冷阱間的溫差。由于藥品溫度受加熱方式的限制， 同時不能高于共熔溫度，因此冷阱溫度越低越好。為了提高經(jīng)濟性，在升華干燥過程中應至少低于藥品 溫度20C；在解吸干燥過程中，對于那些要求很低殘余水分的配方，冷阱溫度要求更低。真空度：一般認為，壓力對凍干過程有正反兩方面的影響：a）在藥品共熔點溫度和崩塌溫度以下，升華界面溫度越高，升華水汽越多，所需熱量越大。壓力 越高，相應提高了已干層導熱系數(shù)，表面對流作用也越大，因此升華水汽也越快，即凍干速率越大。b）升華界面通過已干層到外部的水汽逸出速度與界面和表面之間的壓力差，即界面溫度所對應的 飽和壓力與干燥室的真空度之差相關。這個壓差大，有助于水汽逸出。這

39、個壓差越小，逸出越慢，干燥 速率也越小。如果冷凍干燥是傳熱控制過程，則干燥速率隨著干燥室壓力升高而提高；如果冷凍干燥是傳質控制過程，干燥速率隨著干燥室壓力升高而降低。經(jīng)驗證明升華階段的真空度在1030Pa時，既有利于熱量的傳遞，又利于升華的進行。若壓強過低，則對傳熱不利，藥品不易獲得熱量，升華速率反而降低，而且對設備的要求也更高，增加了成本。而當壓強過高時，藥品內冰的升華速度減慢，藥品吸收熱量將減少，于是藥品自身的溫度上升，當高于共熔點溫度時，藥品將發(fā)生熔化導致凍干失敗。根據(jù)真空度對凍干速率的影響，文獻采用了循環(huán)壓力法，得到了不錯的效果。藥品冷凍干燥過程是一個連續(xù)的操作，不同的藥品配方，有不同

40、的凍結特性，而且凍干曲線也不同，因此應在基礎研究的基礎上廣泛開展個體研究，優(yōu)化凍干曲線，提高干燥速率，降低能耗。耐熱凍干保護劑在疫苗生產中的應用研究凍干保護劑可影響生物制品的質量、效價和穩(wěn)定性，改變生物制品的生產工藝，提高產品干燥能 力并增大產品批次間的穩(wěn)定性。 耐熱凍干保護劑有免疫活性但無藥理活性，可在凍干和保存時維持疫苗的穩(wěn)定性，初次干燥時在適宜的溫度下疫苗不倒塌，企業(yè)低成本即可獲取。一、分類（一）按相對分子量分按相對分子量分可分為低分子化合物和高分子化合物。1 .低分子化合物低分子化合物可提高微生物存活率，形成均一懸液，起到水分緩解作用。如：酸性物質：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸；中性物質：葡

41、萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇；堿性物質：精氨酸、組氨酸。2 .高分子化合物高分子化合物對微生物有保護作用，可促進其升華形成耐熱骨架阻斷熱傳導和熱輻射。如：白蛋白、明膠、蛋白月東、脫脂奶粉。水解明膠水解明膠可去掉雜質蛋白、無抗原性、無過敏反應、無熱源，并且分子量小、均質、易溶于水，可過濾除菌，共熔點為 -12C。對微生物的保護作用高出普通明膠10%以上。脫脂奶粉 可促進升華、加熱滅菌，易取得均質產品，并擴大細胞相互間的距離。（二）按功能和性質分1 .耐熱凍干保護劑耐熱凍干保護劑在凍結和干燥過程中，可防止活性組分變性，如海藻糖、蔗糖、聚維酮（PVP）等。2 .填充劑 可防止有效組分隨水蒸氣一起

42、升華逸散，如：甘露醇、明膠等。3 .抗氧化劑 產品的自身氧化可消耗凍干樣品內部和環(huán)境中的氧；放入電子或氫離子， 可阻斷凍干樣品中氧化鏈式反應，抑制氧化酶活性，防止樣品在冷凍干燥及儲藏過程中氧化變質。如硫代硫酸鈉、 維生素E、維生素C等。4 .酸堿調整劑 在冷凍干燥、儲藏過程中，將生物制品PH值調整到活性物質最穩(wěn)定區(qū)域。常用的有：磷酸二氫鉀、磷酸氫鈉。（三）按物質的種類分1 .糖/多元醇類單糖（葡萄糖、半乳糖）：糖與生物制品活性組分的分子形成氫鍵而代替了原有 水的位置，起保護作用；低聚糖（蔗糖、海藻糖）：低聚糖能起到低溫保護功能和脫水保護作用；海藻糖則具有相對較高的 玻璃化轉變溫度。海藻糖一蛋白

43、質一水微冰晶的形成，有效防止了水對玻璃化態(tài)的增塑作用。并且其內 部氫鍵較少，有利于蛋白質分子間形成氫鍵。多元醇（甘露醇、山梨醇、丙三醇）：多元醇具有和糖一樣的作用。甘露醇無菌濾液穩(wěn)定，不易被氧化，可提供支持結構， 并且不與活性組分發(fā)生反應；山梨醇是甘露醇的同分異構體，但其溶解度比甘露醇大，在常溫下呈粘稠的透明狀液體，有旋光性，略有甜味，具有吸濕性，高溫下不穩(wěn)定，在冷凍干 燥配方中，山梨醇常用作填充劑。2 .表面活性劑類 表面活性劑是降低界面的張力，親水、親油基組成的化合物。表面活性劑可分為 離子型、非離子型。 凡是溶于水能電離成離子的，稱為離子型表面活性劑， 否則稱為非離子型表面活性劑。表面活

44、性劑在凍結和脫水過程中既能降低冰、水界面張力所引起的凍結和脫水變形，又能在復水過程中對活性組分起到潤濕劑作用。但在凍干生物制品測定和長期儲藏中，表面活性劑并沒有保護作用。3 .氨基酸類氨基酸是蛋白質的基本構成單位，其中最主要的是a氨基酸。常用的氨基酸類保護劑有甘氨酸、谷氨酸、精氨酸和組氨酸，試驗表明氨基酸是最好的填充劑。低濃度甘氨酸可通過抑制 10或100mmol/L磷酸緩沖鹽名晶所致 PH值的改變而阻止蛋白質藥物變 性，并且能升高成品的塌陷（崩解）溫度，阻止因塌陷而引起的蛋白質藥物的破壞。4 .其它添加劑類 其它添加劑類保護劑包括抗氧化劑、緩沖劑和凍干加速劑?？寡趸瘎阂环N是抗氧化劑的自身氧

45、化，消耗凍干樣品內部和環(huán)境中的氧，使凍干樣品物料不被 氧化；另一種使抗氧化劑給出電子或氫離子，阻斷凍干樣品中的氧化鏈式反應；還有一種方式是抗氧化劑通過抑制氧化的活性而防止凍干樣品的氧化變質，如維生素E、維生素C、硫代硫酸鈉、硫月尿。緩沖劑：蛋白質具有兩性電解質，既能和酸作用又能和堿作用。在中性環(huán)境中，大多數(shù)蛋白質是穩(wěn)定的，由于蛋白質溶液在凍結過程中溶液的濃度是逐漸升高的，所以在高濃度時可改變溶液的PH值,PH值變化4個單位導致蛋白質變性， 使生物制品失活。因此在凍干保護劑配方中，需添加適量緩沖劑。如，磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉。凍干加速劑：冷凍干燥過程耗時長、耗能多，迫切需要對凍干循環(huán)進行優(yōu)化，降

46、低生產成本。叔 丁醇是一種小分子醇，與水完全互溶，具有低毒性、高蒸汽壓。在藥品水溶液中加入叔丁醇能起到以下 作用：可降低干燥層阻力，從而加速干燥過程，縮短干燥時間；對于難溶于水的藥品，可使產品具有較 高的比表面積、好的外觀，并易于復水，提高藥品溶液和凍干品的穩(wěn)定性，且有一定的抑菌作用。二、凍干保護劑的作用機理（一）凍結過程中低溫保護機理“優(yōu)先作用”機理認為，蛋白質溶液在達到最大凍結濃度之前，優(yōu)先與水作用（優(yōu)先水合），而保護劑優(yōu)先被排斥在蛋白質區(qū)域外（優(yōu)先排斥）。這是由于保護劑的加入，增大了水分子的表面張力，促使了蛋白質分子優(yōu)先與水分子相互作用。在這種情況下，蛋白質分子外表面比其體相中有相對較多

47、的水分子和相對較少的保護劑分子，從而也就保護了蛋白質的天然構象?！皟?yōu)先作用”機理并不能完全解釋用聚合物或蛋白質自身在高濃度時保護蛋白質的現(xiàn)象。因此，必然存在其他保護作用機理。 表面張力減小的機理可以用于解釋表面活性劑對蛋白質溶液凍結過程的保護。限制蛋白質分子擴散的機理認為，許多保護劑都能夠提高溶液的粘度，抑制活性分子的擴散。（二）干燥過程中的保護機理玻璃態(tài)假說 在含有保護劑溶液的干燥過程中，當濃度足夠大且保護劑不發(fā)生結晶時，保護劑與活性組分混合物就會形成玻璃態(tài)。玻璃態(tài)分為兩種即：強玻璃和弱玻璃。在玻璃化轉變溫度以下進行降溫，弱玻璃粘度的增加，比強玻璃來的快。因此，賦形劑形成弱玻璃要比形成強玻璃

48、的保護效果好得多。蔗糖和海藻糖就是因為能夠形成一種弱玻璃而具有很好的保護作用。水替代假說 由于蛋白質分子中存在大量的氫鍵，結合水通過氫鍵與蛋白質分子連接。當?shù)鞍踪|在冷凍干燥過程中推動水分后，保護劑的羥基能夠替代蛋白質表面上水的羥基，使蛋白質表面形成一層“水合層”，這樣就可以保護氫鍵的聯(lián)結位置不直接暴露在周圍環(huán)境中，從而保持了蛋白質天然結構和功能的完整性。當冷凍干燥時，保護劑可與生物大分子的失水部位形成氫鍵，替代保持生物大分子凍干損傷。（三）儲藏過程中的保護機理干燥過程中出現(xiàn)的引起蛋白質變質的時間尺度為小時，而對于儲藏而言，時間尺度為月或年。在正確的冷凍干燥工藝中， 要求產品溫度接近于其玻璃化轉

49、變溫度，而在正確的儲藏條件下， 環(huán)境溫度應當比其玻璃化轉變溫度低得多，以獲得很長的松馳時間。三、耐熱凍干保護劑配方需要注意的問題確定最優(yōu)的pH值生物制品中的活性成分（如蛋白質）只有在很小的PH值范圍內才是穩(wěn)定的，并且不同的PH環(huán)境會影響蛋白質的溶解性。最優(yōu)的PH環(huán)境有利于蛋白質的穩(wěn)定性和它在溶液中的溶解性，冷凍干燥配方的 PH對凍干生物制品長期儲藏的穩(wěn)定性也會帶來很大影響。另外，酸堿度會影響 固體狀態(tài)下蛋白質的物理和化學的穩(wěn)定性。緩沖劑的選擇許多緩沖劑能夠用于生物制品耐熱保護劑配方中，但是并非每一種緩沖劑都能夠用于任何溶液；對 PH值敏感的蛋白質溶液，就應當避免使用磷酸鈉緩沖液，這是由于在凍結

50、過程中， Na2HPO4易于優(yōu)先結晶，使得溶液的 PH降低，最終引起蛋白質變性；正確選擇緩沖劑的濃度也是很重 要的。填充劑的選擇填充劑有相當好的溶解性，與生物制品中活性組分相容，沒有或者只有很小的毒性，具有較高的共晶溫度。低溫、干燥保護劑的選擇糖類是生物制品冷凍干燥過程中使用最頻繁的保護劑，一般不選用還原性糖，因為它可能與蛋白質之間發(fā)生非酶褐變反應；某些鹽類也要用作生物制品在冷凍干燥過程中的保護劑；某些聚合物，因其能提高玻璃化轉變溫度，而常被用作保護劑。但是，聚合物與蛋白質分子形成氫鍵的能力遠遠低于糖類，所以常常采用聚合物和糖聯(lián)合使用，當然，這種方式并不是對每一種蛋白質都是有效的。超濾技術應用

51、于穿琥寧凍干粉針的研究【關鍵詞】超濾技術【摘要】目的 提高穿琥寧凍干粉針質量。方法采用“高純度穿琥寧生產工藝”專利超濾技術生產穿琥寧凍干粉針并與其它廠家同類產品進行動物急性毒性試驗比較。結果超濾技術生產的注射用穿琥寧 ld50明顯高于其它廠家生產的同規(guī)格產品，單次靜脈給藥的ld50達到910mg/kg ,而國家標準說明書中的 明。為675mg/kg ,文獻資料報道穿琥寧注射劑的單次靜脈給藥的ld50為580620mg/kg。結論超濾技術可以大大降低注射用穿琥寧產品的毒性，提高臨床安全性。注射用穿琥寧是采用爵床科植物穿心蓮提取物一穿心蓮內酯經(jīng)酯化、脫水、成鹽而制成的脫水穿 心蓮內酯琥珀酸半酯單鉀

52、鹽，加入ph調節(jié)劑、碳酸氫鈉等藥用輔料經(jīng)冷凍干燥而制成的供肌肉注射或靜脈滴注用的無菌凍干粉針。用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染等。穿心蓮性寒、味苦，能清熱解 毒，消炎止痛?？捎糜诩毙约毦粤〖病⒓毙晕改c炎、扁桃體炎、咽喉炎等。我國科研工作者于70年代初對穿心蓮提取物成分進行了深入研究，結果表明，有效成分為其二菇類內酯化合物。因二菇類內酯化合物均難溶于水，無法滿足臨床需要，通過在內酯結構中引入不同的親水基團，增加內酯的水溶性， 目前已制成了多種穿心蓮內酯針劑，穿琥寧即是抗炎解熱作用最強者，目前在臨床上已得到廣泛應用， 1992年被國家中醫(yī)藥管理局批準為全國中醫(yī)院急診科（室）首批必備中藥之一。我

53、們通過北京圖書館對近年在醫(yī)藥刊物發(fā)表的有關穿琥寧 86篇論文進行分析，在 24篇專題報道 不良反應的文章中，除 1篇只寫“使用穿琥寧”外，其余23篇所報道的全部是水針劑。專家認為：穿琥寧水針劑不穩(wěn)定，在室溫條件下有效期為30.5天，因穿琥寧為一個二菇類內酯化合物，而且分子中有一共軻雙鍵，因而化學活性高，易發(fā)生水解反應和氧化反應，生產中還要進行高溫滅菌，這又促進了分解反應。純凈穿琥寧水溶液微黃略顯綠色，但國內市場上穿琥寧水針劑的色澤深，有的甚至變成了黃色或棕黃色。穿琥寧水針劑的毒副反應主要為嬰幼兒泄瀉，發(fā)生率為22%;個別有白細胞銳減、過敏性休克、藥疹、抽搐、瘙癢、高熱、寒顫、呼吸困難、紫瘢等。為了提高穿琥寧凍干粉針劑的質量，本試驗 研究了 “高純度穿琥寧生產工藝”專利超濾技術，應用于該產品生產并與其它廠家同類產品進行的動物 急性毒性試驗情況。1生產工藝1.1 儀器88-2型切向流超濾器，cl-25蠕動泵（軍事醫(yī)學科學院） ；millipore超濾膜堆（截留分子量:5000） ;lgj5型冷凍干燥機；西林瓶洗、烘、灌聯(lián)動生產線。1.2 藥品與試劑穿琥寧（注射級，成都天臺山制藥有限公司）；碳酸氫鈉（注射級，上海虹光化工廠）；右旋糖酎40 （注射級，源河華穎藥業(yè)有限公