丹參酮IIA的研究進展

1、丹參酮IIA的研究進展         11-04-28 10:34:00     編輯：studa20          作者：李玉萍，顧兵，劉建濤，熊向源，周春麗，吳光杰【摘要】  丹參是一種中國傳統(tǒng)草藥，丹參酮IIA是丹參的主要活性成分之一，是發(fā)揮藥理活性的基礎。該文章就近5年來國內(nèi)外有關丹參酮IIA的提取、含量測定和生物活性的研究成果進行綜述，為全面開發(fā)利用丹參提供參考

2、。 【關鍵詞】  丹參酮IIA; 提取; 測定; 藥理作用丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，主產(chǎn)于河北、安徽、江蘇、四川等地。其化學成分分為脂溶性和水溶性兩部分，前者以丹參酮型的二萜類化合物為主，主要有丹參酮I、丹參酮IIA(tanshinone IIA )、丹參酮IIB、隱丹參酮、羥基丹參酮、丹參羥甲酯、二氫丹參酮I，以及異丹參酮I、異丹參酮II、異隱丹參酮、二氫異丹參酮I;后者主要為酚酸類化合物，包括丹參素(丹參酸甲)，原兒茶醛，丹參酸乙、丹參酸丙、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等1。其中丹參酮IIA是脂溶性成分的代表，集中分布在丹

3、參根的皮部，木質部的分布甚微或沒有，通過韌皮部縱向運輸，不能橫向運輸?shù)侥举|部中去2,3。本文就近年來國內(nèi)外對丹參酮IIA的研究現(xiàn)狀作一綜述，為丹參的進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。1 丹參酮IIA的理化性質丹參酮IIA又稱丹參醌II, 丹參醌IIA，為一種櫻紅色針狀結晶，mp 209210;不溶或微溶于水，易溶于二甲基亞砜 (25 mg/ml)、乙醇 (5 mg/ml) 、丙酮、乙醚和苯等有機溶劑;丹參酮IIA乙醇溶液和水溶液隨溫度升高穩(wěn)定性下降，其標準品穩(wěn)定易得4;丹參酮IIA含有醌型結構，電子行為活躍，易被氧化還原，可參與機體的多種生化反應而有多種生物活性。其結構式見圖1。圖1 丹參酮IIA化

4、學結構2 丹參酮IIA的提取丹參酮IIA的充分浸出提取是含量準確測定的前提，因此提取方法的研究對于丹參酮IIA的含量測定非常重要，但是有關提取方法的系統(tǒng)研究報道尚不多見?，F(xiàn)將主要的提取方法概括如下。2.1 醇提法由于丹參酮IIA不溶于水，多用乙醇提取，包括乙醇滲濾法和回流法。滲濾法：黃琳等5采用正交實驗考察了4因素(乙醇濃度、浸泡時間、提取時間和溫度)對丹參酮IIA提取率的影響，提取溫度、浸泡時間、提取時間、醇濃度(70%90%)和乙醇用量對提取率均有影響。使用高濃度(90%)的醇溶劑、加溫(8087)、浸泡時間延長(6 h)可相應縮短提取時間(2 h)，可獲得丹參酮IIA 4.451 0 m

5、g/g。但因丹參脂溶性成分對熱不穩(wěn)定，醇提后處理工序(貯放、回收乙醇、濃縮、干燥)是丹參酮IIA熱降解損失的主要工序，因此加熱時間范圍內(nèi)應控制在24 h6?；亓鞣ǎ河诩冺档?采用乙醇加熱回流法，通過單因素實驗和正交實驗獲得提取丹參酮的最佳提取條件為：丹參粉碎后過4號篩，乙醇濃度為75%，提取溫度為65，提取時間為2.5 h，料液比為124。楊廣德等8通過正交實驗確定了最佳提取溶劑倍量、回流時間和回流次數(shù)?？疾煸囼炛?，由于溶劑用量超過7倍后，丹參酮IIA提取量無顯著差異，考慮到大規(guī)模生產(chǎn)時的成本與資源利用等因素，選擇用7倍量溶劑進行提取較為合適。2.2 超聲提取法超聲能產(chǎn)生空化效應，具有粉碎、攪

6、拌等特殊作用，使丹參根植物組織在溶劑中瞬時產(chǎn)生的空化泡崩潰，而使組織中的細胞破裂，有利于溶劑滲透進植物細胞內(nèi)部，使細胞中的有效成分進入溶劑中，加速相互滲透、溶解，提高溶解度。于純淼等7超聲提取丹參酮，稱取6份5 g丹參粉，加入75%乙醇溶液120 ml，稱重，分別用40 KHz超聲波提取10，20，30，40，50和60 min。實驗結果表明，利用超聲波法(1次，30 min)從丹參中提取丹參酮IIA的提取率比加熱回流法(1次，150 min)的提取率高約ll%，且無需加熱。黃喜茹等9用甲醇為提取液，超聲提取40 min，平均回收率為99.3%，RSD=1.2%。王猛等10用正交實驗法分別考察

7、3種提取方法(冷浸法、熱回流法、超聲法)對丹參藥材提取液中丹參酮IIA含量的影響，優(yōu)選出丹參酮IIA的最佳提取工藝：4倍量95%乙醇超聲2次，30 min/次，丹參酮IIA在25.2126 g/ml范圍內(nèi)良好線性關系。本法具有實驗設備簡單，操作方便，提取無需加熱、時間短，提取率高、污染少等特點，優(yōu)于傳統(tǒng)的醇提法，可增加藥材的利用率。2.3 索氏提取法徐義等11將丹參粉末用濾紙包好放進索式提取器里，再將一定量的苯放入圓底燒杯中，在水浴加熱下將苯蒸出，通過索式提取器冷凝后，熱的苯溶液流入索式提取器中，浸泡裝有藥品的濾紙包，重復操作，直至索式提取器里的熱苯溶液為無色。用旋轉蒸發(fā)器將溶液中的苯蒸出，殘

8、留物為丹參酮IIA。2.4 微波提取法微波提取是一項新興的技術，加熱升溫快、能耗低、選擇性好，應用于中藥提取具有穿透力強、選擇性高等顯著特點。焦士龍等12稱取已粉碎的丹參藥材10 g, 加入6倍量95%乙醇微波提取30 min，微波功率320 W進行微波回流提取然后按照藥典法醇提。2.5 超臨界CO2萃取(SFECO2萃取)超臨界CO2流體萃取技術是近20年來發(fā)展起來的在分離領域出現(xiàn)的一種新技術，它與常規(guī)溶劑萃取的區(qū)別是選用一種稱為超臨界流體(SF)的物質代替有機溶劑作為萃取劑。它是利用在臨界點四周，體系溫度和壓力的微小變化可導致物質溶解度發(fā)生幾個數(shù)量級的突變的特性實現(xiàn)物質的分離。該法具有無毒

9、、快速、廉價、低溫操作等優(yōu)點。宋啟煌等13采用超臨界CO2萃取法提取了丹參酮IIA，討論了壓力、溫度、時間、乙醇流量對丹參酮IIA提取收率的影響。優(yōu)化最佳條件為：萃取壓力25 MPa，萃取溫度40，萃取時間2 h，乙醇流量1.0 ml/min，并得出超臨界CO2萃取法優(yōu)于乙醇提取法的結論。3 含量檢測方法丹參酮IIA的測定方法大致包括3類：一是以前常用的薄層掃描法(定性檢測)、薄層-熒光法、薄層-紫外分光光度法、柱層析-紫外分光光度法、三波長分光光度法、超臨界流體萃取法聯(lián)用毛細管氣相色譜法，二是2005版中國藥典質控推薦的高效液相色譜法，三是最近才開始使用的反相高效液相色譜法。在各種檢測方法中

10、，報道最多的是高效液相色譜法。3.1 高效液相色譜法( high performance liquid chromatography , HPLC)HPLC法是2005年版中國藥典丹參中丹參酮IIA的含量測定方法。蘇連彩14、王懷明等15分別采用色譜柱Hypersil BDS C18 (4.6 mm×150 mm，5 m )，流動相為甲醇-水溶液(7525)，檢測波長270 nm，在0.08450.2535 g 內(nèi)呈良好線性關系，r=0.9983，平均回收率為98.15%，RSD為1.05%。鄧寒霜2、曾令杰等3用HPLC法測定丹參藥材中丹參酮IIA的含量及分布規(guī)律，結果顯示丹參根皮

11、部丹參酮IIA含量為0.34%;木質部丹參酮IIA含量為0.056%，皮部中丹參酮IIA的含量高出木質部507%。應用高效液相色譜法對中藥制劑中丹參酮IIA的含量測定，樣品不用事先進行分離，操作簡便，分離效率高，抗干擾能力強，測量準確，重現(xiàn)性好，可作為多種丹參制劑中丹參酮IIA含量測定的常用方法和質量控制，是目前丹參酮IIA定量分析方法中較為優(yōu)越的的方法。3.2 反相高效液相色譜法(RP-HPLC)反相高效液相色譜(Reversed-phase high performance liquid chromatograph，RP-HPLC)是迄今為止HPLC中使用最廣泛的技術，因為它能應用于大部分

12、的非極性化合物、許多可電離的及離子化合物的分析。黃喜茹等16用RP-HPLC方法，DiamonsilTM C18色譜柱(5 m, 250 mm× 4.6 mm)，流動相為水-甲醇(2575，V/V)，流速為0.8 ml/min，檢測波長270 nm。在3.15222.06 g/ml的范圍內(nèi)呈良好線性關系，平均回收率為99.87%(RSD=0.63%)。4 藥理作用及作用機制藥理學研究報道丹參酮IIA具有廣泛的生理活性，包括抗炎抑菌作用17，清除自由基與抗氧化作用18，保肝及改善肝功能18，19，保護脊髓背角神經(jīng)元作用20，保護腎小管的正常結構和延緩腎間質纖維化21、抗癌22、改善血循

13、環(huán)2330等，其中對心腦血管作用的研究在醫(yī)藥領域尤其在中藥領域受到國內(nèi)外學者的高度重視，并得到廣泛應用，主要概括如下。     11-04-28 10:34:00     編輯：studa204.1 改善冠狀動脈血循環(huán)作用許濤等23用結扎狗冠狀動脈前降支的心肌梗塞模型觀察丹參酮IIA的作用，結果發(fā)現(xiàn)靜脈注射丹參酮IIA后心肌梗塞范圍明顯縮小，冠狀動脈內(nèi)給藥后同樣顯著縮小狗心肌梗塞面積，其療效與潘生丁相當。阻斷狗冠狀動脈血流后，靜脈注射生理鹽水導致左心室肝舒張壓升高，而靜脈滴注丹參酮IIA導致左心室肝舒張壓明顯降低，

14、說明丹參IIA可能通過降低左心室壁張力和心肌體積而降低心肌耗氧量，改善缺氧后引起的心肌代謝紊亂。為此，目前丹參酮IIA經(jīng)磺化制得丹參酮IIA磺酸鈉，常用于治療冠心病，改善冠狀動脈循環(huán)。4.2 血管內(nèi)皮細胞修復作用丹參酮IIA對過氧化氫(H2O2)損傷的人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞株(CRL-1730)具有保護作用，它能抑制H2O2引起的血管內(nèi)皮細胞減少，其作用主要是使S期和G2M期細胞比率劑量依賴性增加，G0/G1期細胞比率劑量依賴性減少，還能抑制過氧化氫損傷的CRL-1730釋放MDA和LDH，減輕H2O2損傷，保護血管內(nèi)皮細胞的作用24。4.3 抗動脈粥樣硬化(AS)形成作用促血管生成因子白介素-

15、8(IL-8)和血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)參與了AS的形成過程。丹參酮IIA能顯著降低動脈粥樣硬化家兔血清IL-8濃度，減少動脈粥樣硬化家兔主動脈VCAM-1的表達25。崔廣智等26通過建立TNF-誘導的ECV-304細胞損傷模型，以抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽做為對照，觀測了丹參酮IIA對TNF-誘導的ECV304細胞NF-B、IB-表達及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表達的影響。結果顯示：低濃度的丹參酮IIA對TNF-引起的ECV304細胞NF-B的表達升高無明顯抑制作用,但可增加其IB-的表達;高濃度的丹參酮IIA可明顯抑制NF-B的表達,同時增加其抑制因子IB-

16、的表達，并抑制TNF-誘導的ECV304細胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表達。其抗動脈粥樣硬化的作用機制是通過抑制轉錄因子NF-B的激活及其相關粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表達。呂炳強等27報道丹參酮IIA能增加動脈粥樣硬化家兔血清NO濃度，降低血清甘油三酯(TG)濃度，從而達到抗動脈粥樣硬化的作用。4.4 抗心肌肥厚作用丹參酮IIA對血管緊張素II誘導產(chǎn)生的心肌肥大有明顯的抑制作用，其機制之一是丹參酮IIA通過抑制血管緊張素II所致心肌細胞Ca2+ i 變化， 阻斷了心肌肥厚信號向核內(nèi)傳導，抑制原癌基因C-fos的表達28。馮俊等29報道丹參酮IIA可以抑制由于血管緊張索

17、II誘導的心肌細胞直徑、心肌蛋白質合成速率及凋亡率的增加，降低凋亡基因 Fas mRNA的表達。長期應用丹參酮IIA治療可預防自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚的形成， 其機制可能與丹參酮IIA上調心肌細胞凋亡蛋白Bcl-2、下調Bax蛋白及抑制 p53蛋白的表達有關30。4.5 防治糖尿病的并發(fā)癥近年來有學者研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者，特別是中老年糖尿病患者最突出、最主要的病理改變?yōu)槿硇詮浬⑿匝艿牟∽?，表現(xiàn)為微循環(huán)障礙，微血管瘤形成和微血管基底膜增厚。藥理學研究和臨床觀察表明：丹參酮IIA有效地清除氧自由基22，并能降低血液中甘油三酯和膽固醇的含量27，可預防和治療糖尿病以及高血糖導致的大血管、微血管和

18、周圍神經(jīng)病變等嚴重并發(fā)癥。5 結語從藥用植物中篩選藥物是新藥開發(fā)的主要手段之一。丹參酮IIA是丹參的有效成分之一，具有多種藥理作用，除具有傳統(tǒng)的活血調經(jīng)、祛瘀止痛、養(yǎng)心安神之功效外，近年來對其抗氧化，抗菌，抗炎，降低血液粘度、抑制凝血、促進纖溶、抑制血小板聚集、延長血栓形成及促進血栓溶解作用，保肝護肝，抗腫瘤，調節(jié)機體免疫功能，改善抗糖尿病微血管并發(fā)癥等藥理作用的研究日趨深入，使其擁有非常廣闊的臨床應用前景。但值得引起注意的是：隨著丹參酮IIA的新藥理作用、作用機制和藥代動力學研究的不斷深入，從丹參中提取的活性成分大量用于制藥工業(yè)，將對丹參藥材的需求不斷增加。因此必須重視對野生資源保護和合理開

19、發(fā)利用，同時應加強合理應用高新技術開發(fā)中藥制劑、丹參的人工種植技術和培育方法的研究，使之在治療疾病方面得到充分利用，促進祖國醫(yī)藥與國際接軌，推動中藥現(xiàn)代化的發(fā)展?！緟⒖嘉墨I】  1 國家藥典委員會. 中國藥典，部S .北京: 化學工業(yè)出版社, 2005:52.2 鄧寒霜, 李筱玲. 丹參根中丹參酮IIA及丹參素分布規(guī)律研究J 商洛師范?？茖W校學報, 2005, 19(4): 45.3 曾令杰, 梁 暉, 陳 悅, 等. 丹參酮IIA與丹酚酸B在丹參藥材中的分布研究J 現(xiàn)代中藥研究與實踐, 2006, 20(2): 7.4 林恒標, 林恒寬. 丹參酮IIA的穩(wěn)定性研究J .中醫(yī)研究, 2005, 18(8): 16.5 黃 琳, 肖曉麗, 羅 杰, 等. 丹參醇提工藝條件的優(yōu)化研究J .中成藥, 2006, 28(9): 1385.6 陳占立, 孫愛平, 張卉朱, 等. 提取、濃縮及干燥工藝對復方丹參片中丹參酮IIA含量的影響J. 中國藥業(yè), 2006, 15(5): 59.7 于純淼, 于棟華, 于國萍. 丹參酮的提取工藝研究J .中國中醫(yī)藥科技, 2006, 13(3): 194.8 楊廣德, 張繼業(yè), 張 莉, 等. 丹參中丹參酮IIA和隱丹參酮的提取方法研究J .藥物分析雜志, 2006, 26(12): 1807.9