南醫(yī)大醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報告總結(jié)優(yōu)化版

1、13膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測20xx級xx專業(yè) （x）班 學(xué)號XX 姓名xx 第x室 第x組 組員：xx 指導(dǎo)老師：xx摘要膿汁和糞便標(biāo)本中有不同的病原菌。本實(shí)驗(yàn)主要探究檢測其病原菌的類型并通過一系列的觀察與鑒定從而確定其病原菌的名稱和性質(zhì)。在實(shí)踐中學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的制備、消毒和滅菌，細(xì)菌的分離與培養(yǎng)，細(xì)菌群體和個體形態(tài)特征的觀察，細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定等技巧。從而掌握微生物實(shí)驗(yàn)的各種操作方法，培養(yǎng)對微生物實(shí)驗(yàn)的興趣。 引言 常見的化膿性病原菌有葡萄球菌、鏈球菌、淋球菌、腦膜炎球菌、肺炎鏈球菌、結(jié)核桿菌、假單胞菌、流感桿菌等。濃汁標(biāo)本在做細(xì)菌分離培養(yǎng)的同時，均須直接涂片檢查，觀察是否有典型形態(tài)的菌體，

2、芽孢有無，為臨床提供最初的診治依據(jù)。糞便標(biāo)本中常見的病原菌有志賀氏菌屬、致病性大腸桿菌屬、弧菌屬、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、艱難梭菌等。糞便標(biāo)本中常含有很多雜菌，應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康木牟煌x擇培養(yǎng)基（如SS、伊紅美藍(lán)平板、堿性蛋白胨水），盡可能抑制雜菌，以利于病原菌的檢出。本實(shí)驗(yàn)通過常規(guī)的病原菌檢測方法從膿汁標(biāo)本中分離出黃白兩種細(xì)菌，均為革蘭氏陽性球菌，其中黃色是致病菌金黃色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；從糞便標(biāo)本中分離到紫黑色和粉紅色的細(xì)菌，均為革蘭氏陰性桿菌，其中紫黑色的是大腸埃希菌，粉紅色的是痢疾志賀菌。1實(shí)驗(yàn)材料1.1器材 打火機(jī) 油性筆 酒精燈接種環(huán) 接種針污物盤 普通冰柜 隔水式電熱

3、恒溫培養(yǎng)箱 奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡 電爐 試管（帶棉塞） 稱量紙 藥勺 牛皮紙 硫酸紙 橡皮筋 尺子 錐形瓶 高壓蒸汽滅菌器 鑷子bo片 吸水紙 拭鏡紙1.2 試劑藥品 普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 蒸餾水 膿汁標(biāo)本 糞便標(biāo)本 石蠟油 生理鹽水 結(jié)晶紫 盧戈碘液 95%乙醇 稀釋復(fù)紅 葡萄糖微量發(fā)酵管（2支） 乳糖微量發(fā)酵管（2支） 青霉素抗菌素紙片 鏈霉素抗菌素紙片 慶大霉素抗菌素紙片 血漿 福氏志賀菌診斷血清2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟實(shí)驗(yàn)的總流程培養(yǎng)基制備 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 細(xì)菌純培養(yǎng) 細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查 細(xì)菌的生化試驗(yàn) 細(xì)菌的血清學(xué)試驗(yàn)、結(jié)果分析2.1培養(yǎng)基制備干粉培養(yǎng)基蒸餾水加熱溶化分裝集中放在試

4、管筐里罩上硫酸紙、牛皮紙 用橡皮筋扎好 放入講臺邊的滅菌桶或滅菌筐內(nèi)送到高壓蒸汽滅菌室（洗刷室）滅菌（1）平板培養(yǎng)基：傾注平板10ml瓊脂完全凝固后，平板倒放4冰箱保存?zhèn)溆谩＃?）斜面培養(yǎng)基：培養(yǎng)基趁熱斜放瓊脂凝固以后，4冰箱保存?zhèn)溆?。貼上標(biāo)簽后滅菌使用。2.2空氣與人體體表細(xì)菌學(xué)檢查2.2.1空氣的細(xì)菌學(xué)檢查 2.2.1.1實(shí)驗(yàn)方法自然沉降法:根據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)以后，計數(shù)菌落形成單位（ colony forming unit ，CFU），可了解空氣的污染情況。2.2.11實(shí)驗(yàn)步驟：每組1個營養(yǎng)瓊脂平板，選擇采樣地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室、衛(wèi)

5、生間或任選地點(diǎn)）將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁邊平板暴露于空氣中15分鐘平板倒扣蓋上作標(biāo)記37溫箱培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果。2.2.2人體體表的細(xì)菌學(xué)檢查 甲乙常規(guī)洗手，丙丁標(biāo)準(zhǔn)洗手。甲和乙、丙和丁共用1個平板按下圖在普通平板上接種手指上的細(xì)菌。第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。 圖12.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)2.3.1實(shí)驗(yàn)方法平板劃線法：借助于劃線，將混雜的多種細(xì)菌，在平板表面分散成單個細(xì)菌，并固定在某一點(diǎn)上。培養(yǎng)以后細(xì)菌各自分裂繁殖，形成肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)（單菌落）。2.3.2實(shí)驗(yàn)步驟接種環(huán)燒灼滅菌分別取膿汁標(biāo)本與糞便標(biāo)本點(diǎn)在普通平板和依紅美藍(lán)平板上，各做兩份，燒掉

6、接種環(huán)上多余的標(biāo)本冷卻后，應(yīng)用分區(qū)劃線分離法，將膿汁標(biāo)本接種于營養(yǎng)瓊脂平板（2份），糞便標(biāo)本接種于伊紅美藍(lán)平板（2份）接種環(huán)燒灼滅菌將平板倒置37培養(yǎng)1824h觀察結(jié)果 。 圖22.4細(xì)菌的群體生長特性觀察和純化培養(yǎng)2.4.1實(shí)驗(yàn)方法斜面接種法：是一種從已經(jīng)生長好的菌種中挑取少量菌種移植到另一個斜面培養(yǎng)基的飯方法。該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。用滅菌的接種環(huán)取單個菌落或少許細(xì)菌，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線，一直劃到斜面頂端。2.4.2實(shí)驗(yàn)步驟接種環(huán)燒灼滅菌挑選平板上典型的四種單菌落（白色、黃色、紫黑色、粉紅色）進(jìn)行斜面接種純培養(yǎng)做

7、好標(biāo)記接種環(huán)燒灼滅菌斜面培養(yǎng)基置于37培養(yǎng)過夜保存?zhèn)溆?.5細(xì)菌的個體形態(tài)特征的觀察2.5.1實(shí)驗(yàn)方法:革蘭氏染色, 肉湯接種法2.5.2實(shí)驗(yàn)步驟革蘭氏染色：取潔凈載玻片用滅菌操作后的接種環(huán)取生理鹽水1-2環(huán)于玻片上挑取細(xì)菌培養(yǎng)物少許與鹽水輕輕抹勻待涂片干燥后在酒精燈火焰外側(cè)快速來回2-3回合結(jié)晶紫 初染1分鐘水洗盧戈碘液媒染1分鐘水洗95乙醇脫色約20秒鐘水洗稀釋品紅復(fù)染1分鐘水洗吸干,鏡檢。2.5.3肉湯接種法:接種環(huán)燒灼滅菌分別在斜面培養(yǎng)物中挑取菌苔少許立即移入肉湯培養(yǎng)基管中在接近液面的管壁上輕輕研磨沾取少量肉湯調(diào)和混勻試管口通過火焰2-3次滅菌塞好棉塞35培養(yǎng)46小時2.6 藥敏試驗(yàn)2

8、.6.1實(shí)驗(yàn)方法紙片擴(kuò)散法: 將含有定量抗菌素的紙片，平貼在已經(jīng)接種了試驗(yàn)細(xì)菌的平板上。紙片中的抗菌素吸收培養(yǎng)基的水分，溶解后不斷向周圍擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。敏感細(xì)菌在紙片周圍的生長受到抑制，而形成沒有細(xì)菌生長的抑菌圈2.6.2實(shí)驗(yàn)步驟接種環(huán)燒灼滅菌分別取之前實(shí)驗(yàn)中得到的四種菌液在普通平板密集涂布接種環(huán)燒灼滅菌 標(biāo)記:青、鏈、慶 鑷子火焰消毒貼青霉素、鏈霉素、慶大霉素紙片 按壓鑷子消毒倒置37培養(yǎng)1824小時 觀察結(jié)果2.7 血漿凝固酶試驗(yàn)2.7.1實(shí)驗(yàn)方法：玻片法2.7.2實(shí)驗(yàn)步驟取干凈bo片一張在左右兩邊分別滴加兔血漿1-2滴，生理鹽水1滴接種環(huán)燒灼滅菌冷卻分別用接種環(huán)取之前實(shí)驗(yàn)所得到

9、的白色和黃色菌苔(23個菌落的菌量)與血漿研磨混合邊混勻邊觀察結(jié)果接種環(huán)燒灼滅菌稍等片刻，觀察結(jié)果2.8 糖發(fā)酵試驗(yàn)接種針燒灼滅菌用滅菌接種針分別刮取實(shí)驗(yàn)所得到的紫黑色和粉紅色菌苔分別接種在葡萄糖發(fā)酵微量管中和乳糖發(fā)酵微量管內(nèi)接種環(huán)燒灼滅菌將微量管平放在平板內(nèi)37培養(yǎng)過夜后觀察結(jié)果。2.9 動力試驗(yàn)2.9.1實(shí)驗(yàn)方法：半固體接種法2.9.1實(shí)驗(yàn)步驟接種針燒灼滅菌分別用接種針在紫黑色和粉紅色的斜面取菌從半固體培養(yǎng)基中心垂直刺入，可刺達(dá)近底管處，但不要到達(dá)管底循原來的路線退出接種針試管口迅速通過火焰2-3次滅菌塞好棉塞燒灼滅菌接種針37培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果2.10血清學(xué)實(shí)驗(yàn)取潔凈的載玻片一張將磨面

10、近端設(shè)為對照區(qū)滴加生理鹽水15ul遠(yuǎn)端設(shè)為試驗(yàn)區(qū)滴加福氏志賀菌診斷血清15ul接種環(huán)燒灼滅菌用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻接種環(huán)燒灼滅菌載玻片來回傾側(cè)觀察結(jié)果3結(jié)果3.1細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果糞便標(biāo)本平板膿汁標(biāo)本平板 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果表標(biāo)本膿汁糞便菌落顏色黃色白色紫黑色淡粉紅色形態(tài)特征圓形、隆起、表面光滑、邊緣整齊、不透明，菌落直徑2mm左右具有金屬光澤、大而隆起、不透明，菌落直徑23mm半透明，直徑12mm結(jié)果典型的葡萄球菌；結(jié)合菌落顏色，黃色的是金黃色葡萄球菌，白色的是白色葡萄球菌從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌3.2細(xì)菌的個體形態(tài)特征的觀察 G-桿菌 G+球菌 細(xì)菌的個體形態(tài)特

11、征表菌落來源膿汁標(biāo)本糞便標(biāo)本菌落顏色黃色白色紫黑色淡粉紅色油鏡下特征均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀。均為G-桿菌，散在排列 3.3藥敏試驗(yàn)結(jié)果粉紅色菌落 紫黑色菌落 白色菌落 黃色菌落 藥敏試驗(yàn)結(jié)果菌落黃色白色紫黑色粉紅色青霉素+-鏈霉素+慶大霉素+備注：“+”為敏感，“-”為耐藥分析討論：從種種的現(xiàn)象與結(jié)果可知，黃色的是G+金黃色葡萄球菌，白色的是白色葡萄球菌，紫黑色的是大腸埃希菌，粉紅色的是痢疾志賀菌。其中，四種菌對鏈霉素和慶大霉素都敏感，而金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌對青霉素敏感，大腸埃希菌和痢疾志賀菌對青霉素表現(xiàn)為耐藥。3.4血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果黃色（左）與白色（右）兩種細(xì)菌血漿凝

12、固酶實(shí)驗(yàn)圖 血漿凝固實(shí)驗(yàn)表格菌落黃色菌落白色菌落現(xiàn)象血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)不出現(xiàn)凝集反應(yīng)分析討論：觀察到黃色菌落的細(xì)菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)，說明其為凝固酶陽性，是致病菌；白色菌落細(xì)菌不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，說明其為凝固酶陰性，不是致病菌3.5糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和動力試驗(yàn)結(jié)果糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)圖 動力試驗(yàn)圖糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和動力試驗(yàn)表格菌落葡萄糖發(fā)酵現(xiàn)象乳糖發(fā)酵現(xiàn)象動力試驗(yàn)現(xiàn)象紫黑色黃色，分解糖，產(chǎn)酸又產(chǎn)氣黃色，分解糖，產(chǎn)酸又產(chǎn)氣擴(kuò)散生長，培養(yǎng)基呈擴(kuò)散云霧混沌狀態(tài)粉紅色黃色，分解糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣無明顯顏色變化，不分解糖沿穿刺線生長，穿刺線邊緣整齊，周圍培養(yǎng)基清澈透明分析討論：半固體動力試驗(yàn)表明紫黑色菌落菌種半固體動力試驗(yàn)結(jié)果陽性

13、，有鞭毛；粉紅色菌落菌種半固體動力試驗(yàn)結(jié)果陰性，無鞭毛。3.6血清學(xué)實(shí)驗(yàn) 粉紅色菌落血清學(xué)實(shí)驗(yàn)圖 實(shí)驗(yàn)記錄表玻片凝集實(shí)驗(yàn)福氏志賀菌診斷血清生理鹽水現(xiàn)象出現(xiàn)片狀凝集現(xiàn)象Bu 凝集分析討論：通過血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，粉紅色菌落菌種與福氏志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)，確定其為福氏志賀菌。4.綜合結(jié)果討論4.1對膿汁中細(xì)菌的分析討論用普通平板，從濃汁標(biāo)本中分離出黃色和白色兩種菌落；在顯微鏡下觀察時，這兩種細(xì)菌均為G球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌結(jié)合菌落的顏色，可以初步斷定，這是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌通過血漿凝固酶試驗(yàn)，觀察到金黃色葡萄球菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)，白色葡萄球菌則沒有反應(yīng)，說明了金黃色葡萄球菌是致病菌。最后進(jìn)行的是藥敏試驗(yàn)，從培養(yǎng)基上可以觀察到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同，其中青霉素對金黃色葡萄球菌最敏感。球菌是致病菌。4.2對糞便中細(xì)菌的分析討論用伊紅美藍(lán)平板分離菌落時，可以從糞便標(biāo)本中分離出紫黑色具有金屬光澤的菌落和粉紅色半透明菌落；在顯微鏡下觀察時，這兩種 菌均為G桿菌，排列不規(guī)則，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌；球菌是致病菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)，可以觀察到，紫黑色的細(xì)菌使能使葡萄糖和乳糖的試管變色和產(chǎn)生氣體，粉紅色的細(xì)菌只能使葡萄糖的試管變色而無氣體，對乳糖無反應(yīng)；球菌是致病菌。經(jīng)半固體動力