植物保護香菇回交改良畢業(yè)論文

1、 本科畢業(yè)論文 題 目 香菇秋7菌株回交改良初步研究A preliminary study on improved backcross strains of Qiu 7 Lentinula edodes姓 名 學 號專 業(yè) 植物保護指導教師 職 稱 中國·武漢二一四年六月 分類號 密級 香菇秋7菌株回交改良初步研究A preliminary study on improved backcross strains of Qiu 7 Lentinula edodes學生姓名：學生學號：學生專業(yè)：指導教師： 植物科學技術(shù)學院 二一四年六月目 錄 摘要IIAbstractIII1前言11.1

2、 香菇的概述11121.2 食用菌育種技術(shù)3334441.3 香菇菌株鑒定方法和回交后代的篩選556661.4 研究的目的與意義72材料與方法72.1 試驗材料772.2 試驗步驟與方法88889993結(jié)果與分析113.1 單雙配對結(jié)果分析113.2 拮抗試驗結(jié)果分析113.3 菌絲長速測定結(jié)果分析113.4 秋栽品種農(nóng)藝性狀分析1212144討論19參考文獻20致 謝23 摘 要 本實驗是以香菇秋7菌株和它的孢子單核體進行回交，對香菇菌種進行改良。先是選擇性狀優(yōu)良的香菇秋7菌株子實體收集孢子單核體。秋7共獲得孢子單核體216個，把收集來的孢子單核體與親本的菌絲進行回交配對，形成回交子，單雙配

3、對獲得雙核體79個，通過拮抗試驗，生長速度測定最后獲得22個。對22個菌株進行了栽培試驗。運用灰色關(guān)聯(lián)度分析法對回交菌株的菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長度、菌柄直徑、平均單菇鮮重、單袋平均鮮菇產(chǎn)量、單袋平均菇數(shù)、出菇期等8個性狀進行綜合比較。結(jié)果表明，綜合性狀優(yōu)良的回交菌株有QBC1-125、QBC1-212、QBC1-211、QBC1-194。本試驗結(jié)果表明，對主栽香菇菌株進行回交改良，是一種獲得優(yōu)良菌株的有效方法。關(guān)鍵詞：香菇； 孢子單核體； 回交； 拮抗試驗； 菌絲生長速度 Abstract The experiment is based on the backcross of Q7 and

4、 its spores monokaryons, in order to make improvements of mushroom spawn. First o all,we select the Q7's fruit body with good traits to collect spores monokaryons,which we get 216 finally.And then we make a pair and backcross with the collected spores monokaryons and the parental hyphae to get b

5、ackcoss child. We obtain 79 dual-core paired body by mono-paired , and finally we get 22 through antagonism test,and by measuring the mycelium growth rate . Against 22 strains of the cultivation experiment. Use gray correlation analysis method to comprehensive compare the cap diameter, cap thickness

6、, stipe length, stipe diameter, the average weight of a lentinula edode, the average yield and quantity of a bag,the time of fruit body growing, etc. 8 traits of backcross strains . The results show that backcross strains like QBC1-125, QBC1-212, QBC1-211 and QBC1-194 have excellent comprehensive pr

7、operties . The results show to backcross and imprve the strains of mushrooms , is an effective method to obtain excellent strains.Keyword：Lentinula edodes； Spores monokaryons； Backcross； Antagonism test ； Mycelium growth rate 1前言1.1 香菇的概述 香菇(Lentinulaedodes)是真菌中的皇后，又名香蕈在王禎農(nóng)書、本草綱目、日用本草中提到，在本草求原中叫香信，在

8、仙居縣志中叫香椹，在赤城志中叫合蕈，在陳仁玉菌譜中叫臺蕈，還有椎茸，厚菇，花菇，冬菇等。它是一種生長在木材上的真菌類，味道較香， 香氣宜人，營養(yǎng)豐富，位列草菇、平菇、白蘑菇之上。香菇學名為Lentinula edodes(Berk.)Sing，1975年P(guān)egler提議應另外設(shè)小香菇屬Lentinula，將香菇的學名修改為Lentinula edodesMycota)，真核真菌亞界(Eukaryomycota)，真菌門(Eumycota)，擔子菌亞門(Basidiomycotina)，真擔子菌綱(Eubasidiomycetes)，層菌亞綱(Hymenomycetiae)，傘菌目(Agarie

9、ales)，白蘑科(Ticholomataceae)，小香菇屬(Lentinula)。香菇是一種主要的食用菌，為四極性異宗連系的擔子菌，菌絲具備雙核（楊新美，1998）。世界上最先人工種植的處所是我國的浙江省龍泉市，景寧縣，慶元縣三市縣交壤地帶。其香菇人工栽培技術(shù)歷史上稱為砍花法。在人類香菇的種植史上，留下了可查證的文獻資料，最先、最完美的是公元1209年，即南宋嘉定二年何澹所編龍泉縣志上的185個字。此中，有中國香菇城之稱的是慶元。經(jīng)過歷代的不斷發(fā)展，香菇手藝已非常成熟，產(chǎn)業(yè)也日趨完善。 香菇有很高的營養(yǎng)價值，它體內(nèi)含有很高的蛋白質(zhì)和多糖含量，而且有多種人體所必須的氨基酸，脂肪含量極低，可以

10、作為減肥佳品。香菇缺少維生素C和維生素A，但含有許多的維生素D原。香菇中一些核酸是鮮味的構(gòu)成成分，香菇精是香味的主要來源。香菇有很高的藥用價值，對腫瘤的防治也有很好的效果，起主要作用的是香菇多糖，而在降低血脂的過程中起主要作用的是香菇太生。香菇中還含有雙鏈核糖核酸，是不可多得的保健品之一。香菇中還含大量的不飽和脂肪酸和可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D的物質(zhì)，能起到預防感冒的作用。而且對嬰兒也是很有好處的，特別是鞥預防佝僂病的發(fā)生。香菇還可預防血管硬化，還有降血脂和降壓的作用，總之，有很高的藥用價值。 香菇的價值逐漸被人們所喜愛和熟知，這是由于科技的發(fā)展人們的生活水平在不斷的進步，信息在很廣泛的傳播，香菇的產(chǎn)業(yè)

11、化是一種時代的傾勢。香菇的第一次和第二次飛躍使香菇產(chǎn)業(yè)得到很大的發(fā)展，隨著栽培技術(shù)的不斷跟進，尤其是代料栽培技術(shù)的使用，香菇的產(chǎn)量得到不斷的提高和發(fā)展。經(jīng)過幾十年的不斷努力，食用菌產(chǎn)業(yè)已成為優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，帶動我國的農(nóng)民走上富裕之路。而且現(xiàn)在的香菇產(chǎn)業(yè)不僅追求產(chǎn)量，更重要的是質(zhì)量在不斷的提升。給我國帶來了很大的經(jīng)濟效益。我國的食用菌產(chǎn)業(yè)有三大優(yōu)勢，一是此產(chǎn)業(yè)在農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中占有很大的地位；二是我國是一個世界大國，有豐富的自然資源；三是科技在不斷的進步，技術(shù)在不斷的提高。但也存在著許多的問題，香菇的研究工作相對滯后。小家小戶的生產(chǎn)方式制約著發(fā)展，而且流通體系很不規(guī)范，產(chǎn)量低、競爭力低的問題沒有得以解決

12、，產(chǎn)供銷一體化不完善（潘迎捷，2011）。不管是在香菇的生產(chǎn)還是在香菇的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展中，菌種一直是一個非常重要的因素，也是一個制約因素，在香菇產(chǎn)業(yè)中的地位是非常重要的。隨著香菇生產(chǎn)的迅速發(fā)展，從事香菇基礎(chǔ)研究，尤其是從事香菇遺傳育種研究的專業(yè)科技人員數(shù)量極其少，現(xiàn)有的香菇菌種無法滿足如此大的需求，一些不具備資格選育和保藏技術(shù)的單位和個人違規(guī)去選育和出售菌種，造成菌種混亂而且質(zhì)量差、增加了農(nóng)民的風險，甚至會出現(xiàn)絕收的現(xiàn)象。因此我們現(xiàn)在必須該做的就是規(guī)范香菇的市場，保護菌農(nóng)的利益。食用菌在栽培方面有許多的優(yōu)勢，它占地面積少，優(yōu)勢僅僅幾個菇棚就可以進行生產(chǎn)，時間相對較短，不用花費大量的人力物力，節(jié)約了

13、不少成本，而且原料來源方面也很廣泛，在貧困山區(qū)尤為適合栽種，可以使農(nóng)民脫貧致富（吳迪，2006）。香菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，對國家消滅貧困實現(xiàn)目標具有很深遠的意義。近年來，在全國范圍內(nèi)的廣大農(nóng)戶開始了大規(guī)模的種植，很多地區(qū)的農(nóng)民利用自身的有力自然條件開始廣泛的種植香菇，逐漸形成了一種規(guī)劃化的生產(chǎn)。在全國最大的香菇種植和生產(chǎn)的地方是河南的西峽和盧氏，西峽是我國最大的香菇種植基地，而全國香菇品質(zhì)最好的種植地是盧氏，盧氏得天獨厚的自然條件使它不僅孕育了盧氏黑木耳，而且香菇的高品質(zhì)也逐漸得到市場的廣泛認可并朝海外出口，這生產(chǎn)的香菇產(chǎn)品已經(jīng)出口韓國、日本等國家。1.2 食用菌育種技術(shù) 香菇的育種有許多的方法，比如

14、說比較常規(guī)的育種方法有雜交育種、誘變育種、人工選擇育種和野生食用菌馴化育種；新型的育種方法有基因工程技術(shù)、原生質(zhì)體技術(shù)等。 大麥農(nóng)藝性狀，也用于食用菌的育種中。 典型的回交育種是將某一二個有利性狀缺失的優(yōu)良品種重復用作親本，稱輪回親本。又因為是有利性狀的接受者，也稱作受體。輪回親本應該是綜合性狀比較好，有發(fā)展前途的品種。用另一個具有正缺少的這一二個有利性狀的品種作親本，只在開始回交時用1次，稱作非輪回親本。因其是有利性狀的提供者，故稱供體。它所提供的有利性狀最好是顯性單基因所控制的?；亟挥N法主要應用于：常規(guī)育種中有利性狀的轉(zhuǎn)育。選育近等基因系。即除了一個性狀的基因型不同外，其他所有基因型都相

15、同的一類品系。利用近等基因系可在同一遺傳背景下比較某些基因的作用，并可把抵抗不同病菌生理小種的近等基因系混合成多系品種，以控制某些病害的流行。單體、缺體、三體的轉(zhuǎn)育。細胞質(zhì)雄性不育系及核不育系的轉(zhuǎn)育?？朔h緣雜種不育性。本實驗采用的是回交育種的方法，是用親本的孢子單核體與親本進行回交獲得回交子的過程。在育種工作中，常利用回交的方法來改良基因，用回交方法所產(chǎn)生的后代稱為回交子。因此回交與其他方式相比也是有重要意義的。 雜交育種是香菇育種中常用的方式，它是用一個親本的優(yōu)點去克服另一個親本的缺點，這是一個互補的原則，它有很強的目的性和方向性（陳世通等，2012），大大減少了后期的工作。雜交育種的原理

16、是基因發(fā)生重組，在子一代中可能出現(xiàn)個方面性狀都優(yōu)于雙親的個體，達到育種改良的最終目的。 雜交育種有兩種方式，單單交配和單雙交配（譚琦等，2000）。一般程序為選擇優(yōu)良的菌株作為親本進行單孢分離、雜交配對、轉(zhuǎn)管繁殖、初篩、復篩、試驗和示范、推廣。誘變育種是用射線等物理因子處理目標細胞使其遺傳物質(zhì)發(fā)生突變而選擇出我們需要的優(yōu)良品種，用于誘變的物質(zhì)還可以是化學因子。目前來看對食用菌育種較為有效的誘變方法包括60Co（夏志蘭等，2004；張卉等，2003）、紫外線（張淵等，2003；李德舜等，2002）、衛(wèi)星搭載利用自然射線進行物理誘變(賈建航等，1998；邊銀丙等，1999)、激光(陳五嶺等，199

17、7)、離子束、X射線、超聲波、快中子、亞硝酸、亞硝酸胍、氮芥、硫酸二乙酯等。 最后突變而成的類型是多種多樣的。誘變育種在食用菌的育種中也是一種常用的方法，但在選出的菌株中，只有少數(shù)發(fā)生了突變，高品質(zhì)的菌株更是少，便給育種工作帶來了不便。 原生質(zhì)體最初是用來表示植物細胞壁內(nèi)的原生質(zhì)（Hanstein,1980），后來也包括微生物細胞去除細胞壁后的一種細胞結(jié)構(gòu)。原生質(zhì)體融合技術(shù)是先將兩個親本菌株的細胞壁通過酶解剝除，使它在高滲環(huán)境中釋放出原生質(zhì)體，后再將兩個親本菌株的原生質(zhì)體在高滲的環(huán)境下混合，有聚乙二醇或者電融合儀幫助融合，在再生培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使其生出細胞壁，最后篩選出需要的融合子。 此技術(shù)有五

18、方面的特點，重組率較高、受結(jié)合型的限制較小、遺傳物質(zhì)傳遞更為完整、重組種類多和有助于外援基因的轉(zhuǎn)化。 在遺傳上，把用原生質(zhì)體融合技術(shù)得到的單核體稱為單核原生質(zhì)體，而這一現(xiàn)象被稱為原生質(zhì)體單核化。 原生質(zhì)體技術(shù)是食用菌的育種中的一種重要手段，但在香菇育種中的運用還存在不少問題，如原生質(zhì)體難以獲得，融合子不穩(wěn)定等。 基因工程是人為的在供試生物體中截取一段目的基因，在離體的條件下用適當?shù)南拗菩院怂醿?nèi)切酶進行切割，然后將它與載體DNA分子連接起來，一同導入受體細胞中，選育新品種。最早的擔子菌的遺傳轉(zhuǎn)化是1986年Mufioz-Rivas等利用PEG法把同源的trpC基因?qū)肓疡蘧彼釥I養(yǎng)缺陷型突變株

19、中，獲得正常的裂褶菌菌株，為后來的食用菌轉(zhuǎn)化育種奠定了基礎(chǔ)。Chen et al.(2000)在前人的基礎(chǔ)上對農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化作了改進，子實體菌褶組織與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)在同源啟動子的作用下實現(xiàn)了雙孢蘑菇的高效轉(zhuǎn)化。除了雙孢蘑菇之外，目前僅有少數(shù)食用菌包括側(cè)耳、香菇、金針菇(Kuo et al., 2004)進行過類似的遺傳操作，但還沒有建立起相對穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)?；蚬こ碳夹g(shù)在香菇育種方面的研究也沒有太多的進展。但基因工程技術(shù)給微生物育種帶來了新的革命，它創(chuàng)造的新物種是自然演化中不可能出現(xiàn)的，作為一種可控的育種手段，它必將在食用菌定向育種中發(fā)揮越來越重要的作用。1.3 香菇菌株鑒定方法和回交后代的篩

20、選香菇菌株育種后，并不是每一個菌株都是我們所需要的，這時我們就需要進行挑選，選出成功育種、改良、性狀優(yōu)良的菌株。目前用于香菇菌種鑒定的方法主要有6種：形態(tài)學鑒定、拮抗反應、交配型因子分析、同工酶技術(shù)、分子生物學技術(shù)、熒光染色分析。這幾種鑒定方法都有好處和壞處，但是他們結(jié)合起來運用缺失非常的準確（徐夙俠，2006）。形態(tài)學鑒定一般來說，形態(tài)標記(observation of morphology)指的是肉眼可見的外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，是遺傳學研究的基礎(chǔ)。目前為止，人類已描述過的70000多個真菌物種中，絕大多數(shù)是通過形態(tài)學鑒定的（張瑞穎，2004）。日本實行的香菇品種登記中也把形態(tài)特征作為重要的鑒

21、定指標，形態(tài)學鑒定(observation of morphology)的宏觀方面指外部形態(tài)，其中主要包括A、菌蓋形態(tài)(成熟的子實體)：菌蓋直徑，菌蓋上表面顏色，菌蓋厚度，菌蓋肉質(zhì)，菌蓋的平面形態(tài)，側(cè)面形態(tài)，菌蓋縱切面形狀：B、鱗片形態(tài)：鱗片的分布、顏色和大小；C、子實層形態(tài)：形狀，寬度，密度，排列，顏色；D、菌柄形態(tài)：形狀，長度，菌蓋直徑與菌柄長度的比例，菌柄表面的顏色，菌柄是否有毛，菌柄的肉質(zhì)，菌柄粗細，菌蓋直徑與菌柄直徑的比例。另外，細胞學性狀等也可以作為分類的依據(jù)。該方法簡便直觀，容易操作，在食用菌品種鑒定中是一個重要的指標。目前，形態(tài)學特征雖然是種以上分類單元分類鑒定的重要依據(jù)，但在

22、種以下分類鑒別(品種鑒定)中可能不穩(wěn)定或引起分歧。一般認為形態(tài)特征在食用菌品種鑒定中可以作為一個輔助指標，但不能作為唯一的鑒定方法。主要原因如下（張瑞穎，2004）：一、鑒定耗時長。二、食用菌形態(tài)特征變化大。三、目前以形態(tài)學為依據(jù)的形態(tài)學種(morphological species)，經(jīng)交配試驗和分子系統(tǒng)學分析表明，每個形態(tài)學種里面可能包含幾個生物學種(biological species)或系統(tǒng)學種(phylogenetic species)，形態(tài)學對種的分辨力不及生物學或系統(tǒng)學。一般來講，拮抗作用是指一類微生物抑制或殺死其它類微生物的作用。拮抗作用是微生物界普遍存在的現(xiàn)象。然而本實驗中所

23、說的拮抗有所不同，是指一種真菌的不同個體之間的一種相互識別，相互排斥的現(xiàn)象。因為它所表現(xiàn)的外部形狀與拮抗比較相似，所以也稱作拮抗，其實確切來說可以叫做體細胞不親和性(somatic incompatibility)，也可以叫做營養(yǎng)不親和性(vegetative incompatibility)。 拮抗反應時用來鑒別菌株的一個重要標志，但卻用肉眼無法準確的鑒別，因為這存在主觀性。有拮抗反應的菌株可以斷定是不同菌株，然而無拮抗反應的菌株卻不能判定為相同菌株（石紅霞等,2002)。并且無拮抗反應的菌株栽種后菇體形狀大小也存在明顯的差異(趙斌清等,2007）。因為通常異棕結(jié)合的菌株間拮抗線才明顯，而同

24、宗結(jié)合的菌株間拮抗線卻不明顯。但是雖然如此，拮抗反應仍然是鑒定菌株的一種重要方法，便于我們區(qū)別出不同的菌株。將回交后代定量接種于適宜的培養(yǎng)基上，最適溫度下培養(yǎng)，實時觀察測量，最后計算出菌絲的生長速度。同時觀察菌絲的顏色，菌落形態(tài)，濃密程度等特征，選擇生長速度快并且長勢好的菌株進行吃料能力測定。通常吃料能力強，長速快的菌株，在栽培試驗中，其菌絲滿袋期、原基形成期、出菇期較短。但是否生長速度快的菌株，其性狀就一定好，目前尚有許多爭論。 在菌絲生長速度測量的基礎(chǔ)上，要進一步比較出菇性能。根據(jù)實際情況采用適當?shù)脑耘喾椒?，如瓶栽、袋栽、段木栽培。通常試驗按照生物統(tǒng)計的原理進行設(shè)計，各菌株的產(chǎn)量單收單計，

25、同時對每個菌株的菇形、單菇鮮重、出菇期等都作了詳細的觀察和記錄。通常只會重點考察某一個或幾個性狀，如單菇重、產(chǎn)量等，但往往產(chǎn)量高的菌株不一定性狀都優(yōu)良，要對雜種后代進行更接近實際、更科學的評價，則灰色關(guān)聯(lián)度分析法顯得尤為重要。香菇的產(chǎn)量大并不代表性狀優(yōu)良，是高品質(zhì)的香菇。香菇只有兼顧個方面優(yōu)良的性狀才能說明是改良成功。所以這就需要用灰色關(guān)聯(lián)度分析法進行分析。灰色關(guān)聯(lián)度分析法是對新品種的一種綜合評價，它在對優(yōu)良品種的評價方面起到了指導意義，而且還有一定的應用價值，不僅在對各個新品種的評價中得到了廣泛的應用，而且在工農(nóng)業(yè)等各個領(lǐng)域也得到廣泛應用（劉思峰等，2005）。1.4 研究的目的與意義 香菇

26、不僅營養(yǎng)豐富，味道鮮美，而且還可以預防和治療疾病。栽培十分廣泛。但是主栽品種在商品性狀和產(chǎn)量上不能完全滿足市場的需要，而且由于多年長期使用，種性退化變異嚴重，產(chǎn)量低，抗性弱，不耐高溫，致使感染率高，甚至絕收，給菇農(nóng)造成很大的經(jīng)濟損失。為了解決這些問題，不斷提高栽培品種的品質(zhì)，本實驗就對香菇秋7菌珠種進行回交改良，通過單雙配對的方式實現(xiàn)基因重組，雜種優(yōu)勢互補，選育出適應性廣、抗逆性強、具有雜種優(yōu)勢的新品種，起到提升競爭力的作用。2材料與方法2.1 試驗材料香菇秋7栽培菌株：菇形好，易出菇，湖北品種，由華中農(nóng)業(yè)大學的菌株實驗中心提供。 供試培養(yǎng)基表2-1 實驗所用培養(yǎng)基 Table 2-1 med

27、ia used in this study培養(yǎng)基Media 主要成分 Component 用途 Use forPDA馬鈴薯potato: 200g、葡萄糖glucose:20g、瓊脂20g/1000ml蒸餾水菌絲保存CYM葡萄糖glucose:20g,酵母膏yeast extract:2g;蛋白胨peptone:2g; K2HPO4:1g,KH2PO4:0.46g,MgSO4:0.5g瓊脂20g/1000ml蒸餾水菌絲長速測定木屑sawdust78%木屑sawdust;20%麩皮bran;1%糖white sugar; 1%石膏l(xiāng)and plaster菌絲長速測定2.2 試驗步驟與方法 單孢分

28、離和孢子單核體的制備采集親本秋7菌株的子實體，要菇形完整、單生和開傘程度七八分的。先用75%的酒精進行表面消毒，用滅過菌的剪刀剪去菇柄，放在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)30個小時，等到無菌培養(yǎng)皿內(nèi)有白色孢子印后移走菌蓋。開始制作孢子懸浮液，挑取少量孢子于無菌水中進行梯度稀釋，選擇各濃度合適的孢子懸浮液200µl涂布在PDA培養(yǎng)基上，放入25恒溫箱中進行培養(yǎng)。把其他未稀釋的孢子放入4攝氏度冰箱中備用。等到孢子長成微小的白色星芒狀時移入PDA試管斜面培養(yǎng)基內(nèi)進行培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時間后待菌絲長到2-3cm后，在無菌條件下挑取菌絲制成玻片鏡檢，把沒有鎖狀聯(lián)合的單核菌株放進冰箱備用。 在PDA培養(yǎng)皿上接種一

29、小塊單核菌絲體，在距單核菌絲1cm處接種親本的菌絲體，在25下培養(yǎng)一段時間后，當單、雙核菌絲的菌落剛好交接時，挑取單核菌絲邊緣較遠離雙核菌絲的不同部位進行擴大培養(yǎng)，并且鏡檢是否有鎖狀聯(lián)合，若以雙核化，即可轉(zhuǎn)入試管斜面中進行繼續(xù)培養(yǎng)。 當供試菌體活化后，挑取適宜大小的回交菌塊，同時挑取同樣大小的兩個親本菌株一起放入90mm的培養(yǎng)基內(nèi)，品字形擺放，間隔30mm左右。在25培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，一段時間后取出觀察拮抗線是否明顯，淘汰一批拮抗線不明顯或沒有拮抗線的供試菌株。 木屑試管培養(yǎng)基培養(yǎng)把挑選出來的菌株取長8mm左右的菌塊放在試管中進行培養(yǎng)，到菌絲長到2cm后劃一條生長初始線，等到菌絲快長到滿管后劃

30、一條生長終止線，并記錄兩線之間距離和時間，兩者之間的比值便是菌絲長速。以此來挑選出長速快的菌株，進而淘汰一批長速慢的菌株，以保證留下來的菌株性狀優(yōu)良。CYM培養(yǎng)基培養(yǎng)在培養(yǎng)皿底部表面的中心畫一個十字，用直徑8mm的打孔器取菌塊放在十字的中心，放入25恒溫箱中進行培養(yǎng)，每天觀察生長情況，菌落大小，并作上標記，測量和記錄每天的生長距離。數(shù)天后，用每天記錄下來的距離除以平均值便是菌絲長速。 把挑選出來的菌株制成菌種袋。首先準備試管種，在準備過程中藥以防污染。再把試管種培養(yǎng)15天，開始制備原種，然后再把原種接種在栽培袋里，每個菌株15個栽培袋，待栽培袋轉(zhuǎn)色后移入菇房進行管理，等待出菇。出菇后每2-3d

31、采收一次，并對香菇的農(nóng)藝性狀進行觀察和記錄。最后用灰色關(guān)聯(lián)度對測量出的各組數(shù)據(jù)進行分析。 本實驗是用灰色關(guān)聯(lián)度分析法對實驗結(jié)果進行分析?；疑P(guān)聯(lián)度分析法主要用于新品種的綜合評價，能綜合各品種的不同性狀表現(xiàn)，對優(yōu)良品種的評價具有一定的指導意義和應用價值，在多種農(nóng)作物、經(jīng)濟作物和水果的新品種評價中已得到廣泛應用。王卓仁等（2010）報道了灰色關(guān)聯(lián)度在香菇優(yōu)良雜交子篩選中的應用，其試驗結(jié)果表明，灰色關(guān)聯(lián)度的綜合評估結(jié)果與試驗的客觀觀測結(jié)果是一致的，這對優(yōu)良雜種后代的篩選具有重要的參考價值。王秀萍等（2006）運用灰色關(guān)聯(lián)度分析法對11個水稻新品系從產(chǎn)量、生育期、株高等10個主要農(nóng)藝性狀指標進行了定量

32、分析與綜合評價。鄧穗生（2004）對選育的11個腰果品種從產(chǎn)量、品質(zhì)、花期和果實形態(tài)等16個性狀應用灰色關(guān)聯(lián)度分析法進行了綜合評估?；疑到y(tǒng)理論由鄧聚龍教授1982年提出并創(chuàng)立，在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、社會、經(jīng)濟等眾多科學領(lǐng)域得到廣泛應用，成功地解決了生產(chǎn)、生活及科研中的大量實際問題，是一門橫斷面大、滲透性強的新興邊緣學科，能夠?qū)⒆匀豢茖W與社會科學有機結(jié)合起來（劉思峰等，2005）?；疑到y(tǒng)理論將“部分已知，部分未知”的“小樣本”、“貧信息”不確定性系統(tǒng)作為研究對象，通過對“部分己知信息”的生成去認識現(xiàn)實世界，從而正確把握和描述系統(tǒng)運行行為和演化規(guī)律。根據(jù)灰色系統(tǒng)理論，將所有供試品種視為一個灰色系統(tǒng)，每

33、個供試品種看成系統(tǒng)內(nèi)的一個因素，具體計算步驟如下（李春生，2006）：第一步，設(shè)計一個“參考品種”X0作為理想品種，該品種的主要性狀都應優(yōu)于供試品種。以參考品種X0的n項性狀指標所構(gòu)成的數(shù)列作為參考數(shù)列X0(k)，即確定反映系統(tǒng)行為特征的參考數(shù)列：X0(k)=X0(l)、X0(2)X0(n)，再以供試品種的各項性狀指標值所構(gòu)成的數(shù)列為比較數(shù)列Xi (k)，即影響系統(tǒng)行為的比較數(shù)列：Xi(k)= Xi(1)、Xi(2)Xi(n)。參考數(shù)列X0(k)定量指標一般有正向指標、優(yōu)化指標和負向指標三類。正向指標是取值越大越好的指標；負向指標是取值越小越好的指標；優(yōu)化指標的取值有最優(yōu)范圍，太大或太小都不好

34、。第二步，將參考數(shù)列X0(k)和比較數(shù)列Xi(k)進行無量綱化的數(shù)據(jù)處理，原因是系統(tǒng)中各因素的物理意義不同，導致數(shù)據(jù)的量綱也不相同，不利于比較，或在比較時難以得出正確的結(jié)論。正向指標以參考數(shù)列為分母，比較數(shù)列為分子，進行無量綱化處理Xi (k)=Xi (k)/X0(k)；逆向指標則相反，Xi (k) = X0(k) /Xi(k)；中性指標計算以數(shù)列數(shù)值較大的為分母，較小的為分子，使無量綱化處理后各個性狀值在0,1之間，而參考數(shù)列處理結(jié)果X0(k)全為1。第三步，求比較數(shù)列與參考數(shù)列的灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)。關(guān)聯(lián)程度是指曲線間幾何形狀的差別程度，差值大小可作為關(guān)聯(lián)度的衡量尺度。先求出無量綱化處理后參考數(shù)列

35、標準化值X0(k)與比較數(shù)列的標準化值Xi(k)的差異絕對值i(k)=|X0(k)-Xi(k)|，找出整個系統(tǒng)中的兩級最小差mini(k)，兩級最大差maxi(k)，根據(jù)下列公式(1)計算關(guān)聯(lián)系數(shù) i (k)： i (k)=（mini(k)+maxi(k)）/(i(k)+ maxi(k)） （1） 其中為分辨系數(shù)，取值為0-1，常取0.5。第四步，計算等權(quán)關(guān)聯(lián)系數(shù)，這是視各性狀指標同等重要的條件下計算的，見公式（2）。Ri=(1/n)× i (k) （2） 第五步，求加權(quán)關(guān)聯(lián)系數(shù)。實際上各性狀指標在不同品種中的重要程度均不相同，應根據(jù)育種目標按性狀的輕重程度賦予不同的權(quán)重指數(shù) W(k

36、)，計算加權(quán)關(guān)聯(lián)系數(shù)，見公式（3）。 Ri= × i (k) （3）第六步，排關(guān)聯(lián)序。供試品種與參考品種間的關(guān)聯(lián)程度，主要用關(guān)聯(lián)度的大小次序描述，關(guān)聯(lián)度越大說明供試品種與參考品種越接近，其綜合性狀表現(xiàn)越好。3.結(jié)果與分析3.1 單雙配對結(jié)果分析 對香菇 秋7菌株的單孢進行收集，總共獲得216個孢子單核體。每個孢子單核體均與相對應的親本雙核體進行單雙配對，單雙菌絲接觸后即可挑取單核菌落遠離交界處的菌塊，轉(zhuǎn)至試管培養(yǎng)，3-5天后鏡檢，淘汰單核菌絲，雙核的即是目標菌株。得到的回交一代菌株79個。3.2 拮抗試驗結(jié)果分析 拮抗試驗出現(xiàn)三種現(xiàn)象：有明顯拮抗線、拮抗線不明顯、無拮抗線。結(jié)果顯示，

37、雙核的有79個，拮抗明顯的有46個，拮抗線不明顯的有19個，無拮抗線的有14個。沒有出現(xiàn)拮抗線可能是因為在挑取菌塊的時候，菌塊太大，挑有親本的菌絲；單核菌株長速太慢。3.3 菌絲長速測定結(jié)果分析 以0.3cm/d為界限劃分，淘汰長速慢的菌株，則目標菌株秋7有23個。長速可作為一個性狀參與菌株農(nóng)藝性狀的品比。結(jié)果如下： 表3-1 菌絲長速測定結(jié)果（mm/d） Table 3-1 Hyphae grow fast measurement resultsCYM平板長速菌株平均長速菌株平均長速Q(mào)BC1-1520.559QBC1-940.173QBC1-1070.557QBC1-180.150秋70.5

38、37QBC1-1790.144QBC1-10.536QBC1-1490.143QBC1-1010.529QBC1-840.143QBC1-1460.525QBC1-2020.143QBC1-140.525QBC1-490.140QBC1-1120.523QBC1-410.133QBC1-1250.523QBC1-550.127QBC1-1190.519QBC1-580.123QBC1-1940.518QBC1-570.112QBC1-1750.516QBC1-1740.111QBC1-2120.514QBC1-1920.107QBC1-2110.511QBC1-1390.092QBC1-220

39、.511QBC1-390.090QBC1-510.510QBC1-1980.075QBC1-110.509QBC1-450.074QBC1-280.505QBC1-720.073QBC1-1950.504QBC1-690.073QBC1-1030.499QBC1-1810.068QBC1-850.497QBC1-20.064QBC1-1320.491QBC1-60.059QBC1-900.329QBC1-230.058QBC1-1840.0393.4 秋栽品種農(nóng)藝性狀分析農(nóng)藝性狀分析是評判香菇品種好壞的一項重要指標。用灰色關(guān)聯(lián)度分析法對其進行分析。表3-2 菇形較正常的回交菌株及其親本的農(nóng)藝性

40、狀Table 3-2 Agronomic characters of part hybrid and its parental strains菌株編號菌蓋直徑/mm菌蓋厚度/mm菌柄長度/mm菌柄直徑/mm單袋出菇數(shù)/個單袋產(chǎn)量 /g出菇期/d單菇重/g秋755.7615.2347.6314.527.44148.6908718.53QBC1-1160.0616.5651.9116.644.20124.5388723.86QBC1-1455.2612.3046.3814.4812.60208.25710014.06QBC1-2245.4515.3041.6312.278.10137.426912

41、2.58QBC1-2852.1915.2243.7915.3910.00202.2988723.40QBC1-8552.7210.5839.9812.885.8090.64310313.96QBC1-10354.3211.6244.7115.284.90137.6168920.61QBC1-10756.8917.2349.9513.5710.60216.76715019.63QBC1-11248.919.4541.0212.4513.00136.3081006.68QBC1-11963.1519.7053.7815.872.5085.3219630.58QBC1-12550.3913.2143

42、.9114.8713.30244.2559116.34QBC1-17554.3111.5945.1315.4110.60236.8608719.35QBC1-19451.9115.8446.7615.209.80175.5178720.16QBC1-19554.7518.2250.9417.698.20196.6298720.13QBC1-21149.2216.3243.3913.578.90141.0239120.97QBC1-21250.7113.6940.4411.978.80182.4418722.77 表3-3 香菇15個回交菌株農(nóng)藝性狀特征Table3-3 Agronomic ch

43、aracters of 20 hybrid strains of L.edodes菌株編號農(nóng)藝性狀描述QBC1-11 個體適中，出菇較少，產(chǎn)量不高QBC1-14個體適中，出菇較多，產(chǎn)量高QBC1-22 個體適中，產(chǎn)量較低QBC1-28個體較大，菌柄較粗，產(chǎn)量高QBC1-85菌肉較薄，產(chǎn)量低QBC1-103菌肉較薄，菌柄較粗QBC1-107菌肉較厚，產(chǎn)量高QBC1-112個體較小，產(chǎn)量較低QBC1-119個體大，菌柄粗，產(chǎn)量低QBC1-125個體適中，產(chǎn)量高QBC1-175菌肉較薄，產(chǎn)量高QBC1-194個體較大，產(chǎn)量較高，出菇較少Q(mào)BC1-195菌肉較厚，產(chǎn)量較高QBC1-211菌肉較厚，出菇

44、較少Q(mào)BC1-212個體適中，出菇較少構(gòu)造參考品種構(gòu)造一個參考品種X0，各方面的指標都優(yōu)于供試品種，作為理想中的品種。 表3-4 供試菌株與參考菌株主要性狀值 Table 3-4 Main characteristics of tested strains and ideal strain in L.edodes菌株編號菌蓋直徑/mm菌蓋厚度/mm菌柄長度/mm菌柄直徑/mm單袋出菇數(shù)/個單袋產(chǎn)量 /g出菇期/d單菇重/g秋755.7615.2347.6314.527.44148.6908718.53QBC1-1160.0616.5651.9116.644.20124.5388723.86QB

45、C1-1455.2612.3046.3814.4812.60208.25710014.06QBC1-2245.4515.3041.6312.278.10137.4269122.58QBC1-2852.1915.2243.7915.3910.00202.2988723.40QBC1-8552.7210.5839.9812.885.8090.64310313.96QBC1-10354.3211.6244.7115.284.90137.6168920.61QBC1-10756.8917.2349.9513.5710.60216.76715019.63QBC1-11248.919.4541.0212.

46、4513.00136.3081006.68QBC1-11963.1519.7053.7815.872.5085.3219630.58QBC1-12550.3913.2143.9114.8713.30244.2559116.34QBC1-17554.3111.5945.1315.4110.60236.8608719.35QBC1-19451.9115.8446.7615.209.80175.5178720.16QBC1-19554.7518.2250.9417.698.20196.6298720.13QBC1-21149.2216.3243.3913.578.90141.0239120.97QB

47、C1-21250.7113.6940.4411.978.80182.4418722.77參考品種50.0020.0025.0012.0014.00245.0075.0020.00Wk0.160.180.120.110.20.150.050.03無量綱化處理 由于系統(tǒng)中的各因素物理意義不相同，以至于數(shù)據(jù)的量綱也不相同，不利于我們進行比較或是難以得出正確結(jié)論。結(jié)果見表3-5表 3-5 無量綱化處理Table 3-5 Treatment of immeasurable outline of tested strains and ideal strain in L.edodes 菌株編號菌蓋直徑/mm

48、菌蓋厚度/mm菌柄長度/mm菌柄直徑/mm單袋出菇數(shù)/個單袋產(chǎn)量/g出菇期/d單菇重/g秋70.8967 0.7615 0.5249 0.8264 0.5314 0.6069 0.8621 0.9265 QBC1-110.8325 0.8280 0.4816 0.7212 0.3000 0.5083 0.8621 0.8382 QBC1-140.9048 0.6150 0.5390 0.8287 0.9000 0.8500 0.7500 0.7030 QBC1-220.9090 0.7650 0.6005 0.9780 0.5786 0.5609 0.8242 0.8857 QBC1-280.

49、9580 0.7610 0.5709 0.7797 0.7143 0.8257 0.8621 0.8547 QBC1-850.9484 0.5290 0.6253 0.9317 0.4143 0.3700 0.7282 0.6980 QBC1-1030.9205 0.5810 0.5592 0.7853 0.3500 0.5617 0.8427 0.9704 QBC1-1070.8789 0.8615 0.5005 0.8843 0.7571 0.8848 0.5000 0.9815 QBC1-1120.9782 0.4725 0.6095 0.9639 0.9286 0.5564 0.750

50、0 0.3340 QBC1-1190.7918 0.9850 0.4649 0.7561 0.1786 0.3482 0.7813 0.6540 QBC1-1250.9923 0.6605 0.5693 0.8070 0.9500 0.9970 0.8242 0.8170 QBC1-1750.9206 0.5795 0.5540 0.7787 0.7571 0.9668 0.8621 0.9675 QBC1-1940.9632 0.7920 0.5346 0.7895 0.7000 0.7164 0.8621 0.9921 QBC1-1950.9132 0.9110 0.4908 0.6783 0.5857 0.8026 0.8621 0.9935 QBC1-2110.9844 0.8160 0.5762 0.8843 0.6357 0.5756 0.8242 0.9537 QBC1-2120.9860 0.6845 0.6182 0.9975 0.6286 0.7447 0.8621 0.8783 參考品種1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 Wk0.160.180.120.110.20.150.050.03計算灰色