PET線無菌驗(yàn)證方案(WORD版)

1、PET包裝 生產(chǎn)線無菌驗(yàn)證方案批準(zhǔn)： 審核： 編制：1.目的及要求1.1 本方案規(guī)定了 PET 設(shè)備無菌驗(yàn)證的必備程序。1.2 本方案用于以下幾種情況：1.2.1 新安裝 PET 線無菌驗(yàn)證時(shí)；1.2.2 PET 線大修后無菌驗(yàn)證時(shí)；1.2.3 PET 線與無菌環(huán)境相關(guān)聯(lián)部位進(jìn)行改造、更換時(shí)；1.2.4 PET 線出現(xiàn)嚴(yán)重質(zhì)量問題需要重新驗(yàn)證時(shí)。1.3 本方案包括 S1S7 過程，只有在新 PET 線安裝后

2、無菌驗(yàn)證時(shí)需要全部完成，其余情況適用時(shí)可根據(jù)設(shè)備維修情況減少過程。1.4 所有過程及結(jié)果必須記錄，報(bào)告品控經(jīng)理，并存檔備查。2.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備2.1 無菌驗(yàn)證執(zhí)行之前，需制定驗(yàn)證流程及時(shí)間進(jìn)度表，并告知所有相關(guān)方。必要時(shí)需與外方工程師確認(rèn)合同中規(guī)定的驗(yàn)證內(nèi)容。驗(yàn)證前需對(duì)以下情況進(jìn)行確認(rèn)：2.1.1 了解機(jī)器安裝進(jìn)度a.確認(rèn)微生物方面內(nèi)容b.微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部確認(rèn)c.微生物儀器確認(rèn)（液體取樣器，氣體取樣器，超凈臺(tái)，移液槍，振蕩器等）2.1.2 確認(rèn)水處理參數(shù)，保證供水質(zhì)量穩(wěn)定（主要為硬度，微生物，電導(dǎo)率，pH 等）2.1.3 設(shè)備安裝、大修完

3、畢后,關(guān)注 CIP/SIP/COP/SOP 的運(yùn)作，主要為化學(xué)品濃度（CIP，COP，SOP 實(shí)驗(yàn)，連續(xù)三次化學(xué)品濃度穩(wěn)定在范圍之內(nèi)），SIP 溫度參數(shù)確認(rèn)，取樣時(shí)間，順序以及取樣點(diǎn)要與生產(chǎn)、設(shè)備部門、外方共同確認(rèn)。3.實(shí)驗(yàn)程序S1 著色測(cè)試（如設(shè)備存在自動(dòng)COP系統(tǒng)功能時(shí)）目的：驗(yàn)證灌裝機(jī)內(nèi)部清洗是否無死角共 18 頁第 2 頁進(jìn)行著色測(cè)試前，運(yùn)行 COP/SOP，記錄下噴頭類型以及位置。a. 對(duì)比以往 SOP 噴頭與現(xiàn)時(shí)噴頭位置b. 通過圖紙對(duì)比，來確

4、認(rèn)可能噴不到的點(diǎn)，以及關(guān)鍵區(qū)域的點(diǎn)，加以關(guān)注c. 準(zhǔn)備染色溶液，進(jìn)行著色實(shí)驗(yàn)，并且準(zhǔn)備電筒，紙巾，對(duì)可能著色不到的地方進(jìn)行確認(rèn)。染色溶液準(zhǔn)備：52g 可溶性淀粉（可用其它增稠劑替代），2g 胭脂紅（可用其它色素替代，數(shù)量可調(diào)整，以清晰著色為準(zhǔn)），2L 純凈水溶解，煮沸后待用。對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室中的殺菌鍋，灌注系統(tǒng)，UHT 系統(tǒng)（如有）的 SIP 溫度，以及 UHT 保持管末端溫度使用溫度測(cè)試條進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)過程：用背負(fù)式噴霧器將灌裝機(jī)內(nèi)裝有自動(dòng) COP 噴頭的所有區(qū)域進(jìn)行均勻噴霧著色，操作

5、不方便的部位采用噴壺手動(dòng)噴霧，確保所有區(qū)域均勻著色。之后啟動(dòng)設(shè)備自動(dòng) COP 過程，待設(shè)備自動(dòng) COP 結(jié)束后觀察有顏色殘留的地方。檢查噴頭位置，調(diào)整到最佳狀態(tài)，再次進(jìn)行著色試驗(yàn)。新線無菌驗(yàn)收時(shí)，請(qǐng)外方工程師將噴頭調(diào)整到無著色殘留為止。大修時(shí)，有顏色殘留點(diǎn)作為手動(dòng)泡沫清洗之重點(diǎn)，并以文件形式規(guī)定這些重點(diǎn)，專人驗(yàn)證。以上任務(wù)完成后，確認(rèn)鋼片位置，鋼片位置必須包括著色殘留點(diǎn)。S2 貼片測(cè)試（當(dāng)設(shè)備具備SOP功能設(shè)定時(shí)）目的：檢驗(yàn)灌裝機(jī) SOP 效果事先準(zhǔn)備材料：移液槍（如圖一）（1ml，0.1ml，0.01ml，推薦另配一把&#

6、160;1-9ml）以及槍頭各 100個(gè)，細(xì)菌懸濁液（除特殊說明，本方案中所提到的細(xì)菌懸濁液全部使用枯草芽孢桿菌），鋼片 50片（如圖二），鋼片可以購買也可以自制，自制規(guī)格為長(zhǎng)×寬×厚50×20×(12)mm，一端帶孔，孔徑為 6mm。100ml 塑料圓盒(洗脫液盒)50 個(gè)，不銹鋼托盤 3 個(gè)，錫箔紙 5 卷，平皿（塑料/玻璃均可），TSA 培養(yǎng)基（胰酪胨大豆瓊脂，枯草芽孢桿菌檢測(cè)專用瓊脂），3M 膠帶，扎帶，針筒（1ml，10ml 

7、各一個(gè)），振蕩器（如圖三）（可選），搖床（可選），三角瓶以制備培養(yǎng)基以及無菌水，以及其他微生物實(shí)驗(yàn)室儀器耗材等。接種環(huán)境：確定一間遠(yuǎn)離生產(chǎn)區(qū)域和實(shí)驗(yàn)室的房間作為接種室，內(nèi)部有恒溫設(shè)施，溫度計(jì)，濕度計(jì)，生石灰（作為干燥劑），桌、椅各一張。出入此房間人員必須嚴(yán)格控制。鋼片接種、空瓶、空蓋接共 18 頁第 3 頁種全部要求在接種室進(jìn)行。污染控制:凡是使接觸或可能接觸過菌種的地方都要進(jìn)行消毒，尤其是生產(chǎn)車間內(nèi)的灌裝間，凡是接觸過菌種的設(shè)備，工具，儀器表面必須進(jìn)行高溫滅菌或者相對(duì)應(yīng)的處理。驗(yàn)證衣著：S2-S5 驗(yàn)證都應(yīng)當(dāng)穿著無菌服，手套，進(jìn)行全身殺菌的條

8、件下進(jìn)行。轉(zhuǎn)移：移入生產(chǎn)車間前，樣品需要事先用消毒過的鋁箔或塑料袋密封保存，不能污染其他生產(chǎn)區(qū)域。試驗(yàn)相關(guān)要求：將樣品按照驗(yàn)證程序要求，進(jìn)行相應(yīng)的處理，完畢后采用無菌取樣的方式移出，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。操作前，按照要求進(jìn)行洗手、更衣、消毒等人員衛(wèi)生程序。不相關(guān)的人員嚴(yán)禁進(jìn)入凈化間，避免人為污染的存在。所用工具事先完成消毒處理。操作過程中產(chǎn)生的廢棄包裝物、廢棄樣品和防護(hù)用品等物品及時(shí)銷毀，并對(duì)相關(guān)操作區(qū)域和接觸過的區(qū)域進(jìn)行徹底消毒處理。圖一、移液槍圖二、鋼片圖三、振蕩器共 18 頁第 4 頁鋼片接種：將菌種原液稀釋進(jìn)行梯度稀釋（假設(shè)菌種濃度已給定，為 

9、;1*10  菌懸液），首先用無菌然后取稀釋液A0.1ml至滅菌鋼片上（此時(shí)菌種濃度為 1*10）   ，具體數(shù)量參照驗(yàn)證協(xié)議，室溫干燥 6-10 小時(shí)（可以事先備好生石灰做干燥劑），（此時(shí)鋼片上的菌種估計(jì)為 1*10 ，干燥期間細(xì)菌材料處理：鋼片用錫紙包裹，與培養(yǎng)基，無菌瓶一起殺菌，待用。接種前，先用振蕩器，把菌種的懸濁液混勻。用無菌水制成規(guī)定濃度的細(xì)菌溶液備用。接種完畢之后， 用不銹鋼托盤，墊一層錫箔紙，把鋼片接種面向上，整齊排列在錫箔紙覆蓋的托盤之上，放置完畢之后，再用一層錫箔紙覆蓋在托盤

10、之上。98針筒，取 1ml菌液，至 9ml無菌水試管中，用振蕩器混勻（   此時(shí)菌種濃度為 1*10 ），成 為 稀 釋 液 A，76數(shù)量可能減少一個(gè)數(shù)量級(jí)，請(qǐng)依照預(yù)實(shí)驗(yàn)情況，以及接種環(huán)境條件進(jìn)行接種）。接種鋼片 50 個(gè)，預(yù)留 10 片作對(duì)照，不放入灌裝機(jī)，用于初始接菌量的檢驗(yàn)。干燥后，用不銹鋼托盤，用鋁箔紙托底，將鋼片接種面向上放置。鋼片安置（如圖四）：菌液干燥后，就可進(jìn)行 S2。接種后鋼片使用塑料扎帶或者雙面膠，懸掛或黏貼在之前通過著色實(shí)驗(yàn)確認(rèn)的點(diǎn)上，貼片點(diǎn) 

11、3040 個(gè)。安置鋼片時(shí)，可由三人進(jìn)行操作，一人在無菌環(huán)境內(nèi)安置，其余兩人則協(xié)助鋼片安置，比如為其用酒精消毒，穿戴鞋套，遞送工具等。鋼片安置完畢之后，關(guān)閉灌裝機(jī)各個(gè)密封門，并且確認(rèn)。之后進(jìn)行 SOP，期間由相關(guān)人員對(duì)灌裝間 SOP 的實(shí)際時(shí)間進(jìn)行確認(rèn)。關(guān)于 SOP 參數(shù)，需事先取得，依照此數(shù)據(jù)試驗(yàn)。圖四、1、貼片點(diǎn)：灌裝機(jī)進(jìn)甁星輪2、貼片點(diǎn)：旋蓋頭表面共 18 頁第 5 頁20 分鐘后，置于超凈工作臺(tái)上取出，進(jìn)行梯度稀釋，如按照 0.5-0.9*10 個(gè)/ml 的初

12、始接種量來算，首先鋼片放入 100ml洗脫液時(shí)，此時(shí)濃度菌液為 0.5-1*10 個(gè)/ml ），再對(duì)菌液進(jìn)行兩 次 梯 度 稀 釋（每（次稀釋需要對(duì)放置稀釋液的試管進(jìn)行振蕩，使菌液混勻），制成稀釋液B（此時(shí)濃度菌液為 0.5-1*10再取 1ml稀釋液B進(jìn)行一次梯度稀釋，制成稀釋液C（此時(shí)濃度菌液為 0.5-1*10 個(gè)/ml），取 1ml稀再用 0.1ml移液槍，取稀釋液B此時(shí)濃度菌液為 0.5-1*10 個(gè)/ml）0.1ml加入 9ml無菌水中，對(duì)其進(jìn)即每個(gè)對(duì)照做

13、0;10  稀釋，10  稀釋，0.1*10  稀釋各一次。對(duì)照鋼片建議一共 10 組。通過試驗(yàn)得出3、貼片點(diǎn)：灌裝機(jī)出口星輪S2 實(shí)驗(yàn)無菌流體取樣點(diǎn)：從 S2 開始至結(jié)束，工廠品控人員需依據(jù)取樣頻率，進(jìn)行無菌水微生物取樣，要求現(xiàn)場(chǎng)微生物 QC 取樣，取樣后進(jìn)行膜過濾，以細(xì)菌總數(shù)以及霉菌/酵母溫度培養(yǎng)，S2過程中還要進(jìn)行百級(jí)區(qū)塵埃粒子檢測(cè)、百級(jí)區(qū)浮游菌或沉降菌檢測(cè)。（對(duì)照鋼片處理方法：S2 中，SOP結(jié)束后，先處理對(duì)照的鋼片，把鋼片放入滅菌后的洗脫液中，&

14、#160;注：洗脫液的制備：8.5gNaCL、0.1g吐溫 80 溶解于 1L純凈水中經(jīng) 121、30min滅菌后備用。）搖晃 6 4 2 個(gè)/ml），此 時(shí) 取 1ml稀釋液B進(jìn)行膜過濾，（使用 0.45 白色無菌膜，使用TSA培養(yǎng)基，90mm大平板），如產(chǎn)生泡沫，使用無菌水加入濾杯助濾。1 釋液C進(jìn)行膜過濾，（使用 0.45 白色無菌膜，使用TSA培養(yǎng)基，90mm大平板），如產(chǎn)生泡沫，使用無菌水加入濾杯助濾。2行膜過濾，（使用 0.45 白色無菌膜，使用TSA培養(yǎng)基，90mm大平板

15、），如產(chǎn)生泡沫，使用 9ml無菌水加入濾杯助濾。-4-5-4鋼片原始菌數(shù)量。鋼片卸載：卸載鋼片時(shí)，可由三人進(jìn)行操作，一人在無菌環(huán)境內(nèi)卸載，其余兩人則協(xié)助鋼片卸載人，比如為其用酒精消毒，穿戴鞋套，遞送工具等。鋼片背部以及邊緣，需使用酒精或者 PAA 稀共 18 頁第 6 頁接種：10  接種：從 2*10 吸 1mL到 9mL試管，稀釋成 2*10  的菌懸液，然后從 2*10  吸 2mL加入78

16、mL無菌水中，稀釋成  5*10 的菌懸液，用移液槍取  1ml至剛吹好的PET空瓶?jī)?nèi)，拍打空瓶，使釋等消毒液進(jìn)行消毒，但是消毒液絕對(duì)不允許接觸鋼片正面，消毒完畢后，用 9ml 無菌水沖洗，并立即放入 80ml 洗脫液的塑料盒中，上下?lián)u晃 20 分鐘待用。實(shí)驗(yàn)方法：取下鋼片后，把鋼片放入已滅菌的洗脫液中，搖晃 20 分鐘后，置于超凈工作臺(tái)上取出，直接對(duì)洗脫液進(jìn)行膜過濾，如產(chǎn)生泡沫，使用 100ml 無菌水加入濾杯助濾，取下濾膜，放入事先準(zhǔn)備好的培

17、養(yǎng)基平板（90mm 或者更大平皿，事先傾倒好無菌培養(yǎng)基）。實(shí)驗(yàn)后，平皿放入35±2培養(yǎng)箱，72 小時(shí)后計(jì)數(shù)。S3 瓶?jī)?nèi)接種試驗(yàn)?zāi)康模簷z驗(yàn)灌裝機(jī)對(duì) PET 瓶的殺菌效率事先準(zhǔn)備材料：移液槍（1ml，0.1ml，0.01ml，推薦另配一把 1-9ml）以及槍頭，細(xì)菌懸濁液， 100ml塑料圓盒（洗脫液盒）150 個(gè)，不銹鋼托盤，錫箔紙，平皿（塑料/玻璃均可），TSA 培養(yǎng)基（胰酪胨大豆瓊脂，枯草芽孢桿菌檢測(cè)專用瓊脂），3M 膠帶，扎帶，針筒（1ml，10ml 各一個(gè)），振蕩器（可

18、選），搖床（可選），三角瓶制備培養(yǎng)基以及無菌水，以及其他微生物實(shí)驗(yàn)室儀器耗材等。96菌懸液呈小水珠附著于瓶?jī)?nèi)壁/分布于空蓋底部（如圖五）。共接種 200 個(gè)空瓶，其中 40 個(gè)備用，空瓶室溫干燥 12-24 小時(shí)（可以事先備好生石灰做干燥劑）。接種 PET 瓶安置：菌液干燥后，就可進(jìn)行 S3。接種后 PET 瓶（注：不能旋蓋），使用塑料袋（或紙箱），將 200 個(gè)已接種的 PET 瓶，從接種室轉(zhuǎn)移到注入間，掛上風(fēng)道。按照規(guī)定最大灌裝速度（例360

19、00bph），進(jìn)行驗(yàn)證。殺菌后 PET 瓶中注入 100ml 無菌水后封蓋，從注入機(jī)出口運(yùn)輸帶取出，轉(zhuǎn)移至指定區(qū)域，劇烈晃動(dòng) 20 分鐘，然后做膜過濾試驗(yàn)，濾膜放入放入事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基平板（90mm 或者更大平皿，事先傾倒好無菌培養(yǎng)基）。實(shí)驗(yàn)后，平皿放入 35±2培養(yǎng)箱，72 小時(shí)后計(jì)數(shù)。S3 實(shí)驗(yàn)無菌流體取樣點(diǎn)：從 S3 開始至結(jié)束，工廠品控人員需依據(jù)取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣，包括沖瓶/沖蓋無菌水，沖瓶口無菌水的取樣，要求現(xiàn)場(chǎng)微生物 QC 取

20、樣，取樣后進(jìn)行膜過濾，分別選用 PCA（plate count agar 平板計(jì)數(shù)瓊脂，GB/T4789.2-2008 中菌落總數(shù)檢測(cè)專用瓊脂）/虎共 18 頁第 7 頁接種：10  接種：將稀釋至 10 菌懸液，用移液槍取 1ml至空蓋內(nèi)，使菌懸液呈小水珠附著分布于紅培養(yǎng)基，以總菌以及霉菌/酵母溫度培養(yǎng)，如采用臭氧方式進(jìn)行水殺菌，建議使用抗臭氧型培養(yǎng)基。S4 蓋子接種試驗(yàn)?zāi)康模簷z驗(yàn)蓋殺菌機(jī)的殺菌效率事先準(zhǔn)備材料：移液槍（1ml，0.1ml，0.

21、01ml，推薦另配一把 1-9ml）以及槍頭，細(xì)菌懸濁液， 100ml塑料圓盒（洗脫液盒）150 個(gè)，不銹鋼托盤，錫箔紙，平皿（塑料/玻璃均可），TSA 培養(yǎng)基，3M膠帶，扎帶，針筒（1ml，10ml 各一個(gè)），振蕩器，搖床，三角瓶制備培養(yǎng)基以及無菌水，以及其他微生物實(shí)驗(yàn)室儀器耗材等。6空蓋底部，水珠越小越好（如圖六）。蓋子接種數(shù)量為 80 個(gè)，其中 20 個(gè)備用，空蓋室溫干燥 2-4 小時(shí)（可以事先備好生石灰做干燥劑），水珠完全揮發(fā)后使用?？丈w安置：使用托盤鋁箔紙，將接種好空蓋覆蓋好

22、，轉(zhuǎn)移至注入間。從下蓋槽整齊排列。建議接種蓋與洗蓋槽中其他蓋，以顏色區(qū)別或做標(biāo)記。按照規(guī)定最大灌裝速度（36000bph）進(jìn)行驗(yàn)證。殺菌后瓶蓋，旋蓋于灌裝 100mL 無菌水的瓶子上，從注入機(jī)出口運(yùn)輸帶取出，轉(zhuǎn)移至指定區(qū)域，劇烈晃動(dòng) 20 分鐘，然后做膜過濾試驗(yàn)，濾膜放入放入事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基平板（90mm 或者更大平皿，事先傾倒好無菌培養(yǎng)基）。實(shí)驗(yàn)后，平皿放入 35±2培養(yǎng)箱，72 小時(shí)后計(jì)數(shù)。S4 實(shí)驗(yàn)無菌流體取樣點(diǎn)：從 S4 開始至結(jié)束，工廠品控人員需依據(jù)取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣

23、，包括沖瓶/沖蓋無菌水，沖瓶口無菌水的取樣，要求現(xiàn)場(chǎng)微生物 QC 取樣，取樣后進(jìn)行膜過濾，分別選用 PCA（plate count agar 平板計(jì)數(shù)瓊脂，GB/T4789.2-2008 中菌落總數(shù)檢測(cè)專用瓊脂）/虎紅培養(yǎng)基，以總菌以及霉菌/酵母溫度培養(yǎng)，與此同時(shí)做涂抹試驗(yàn)、空暴實(shí)驗(yàn)。共 18 頁第 8 頁N°位置編號(hào)代碼1灌裝機(jī)出口星輪下部平臺(tái)FS2A圖五、瓶?jī)?nèi)接種實(shí)驗(yàn)圖六、蓋子接種試驗(yàn)S5 涂抹、空暴實(shí)驗(yàn)及浮游菌（需專用采集器）、塵埃粒子檢測(cè)目的：檢驗(yàn)潔凈室的潔

24、凈程度事先準(zhǔn)備材料：已倒入虎紅/PCA（plate count agar 平板計(jì)數(shù)瓊脂，GB/T4789.2-2008 中菌落總數(shù)檢測(cè)專用瓊脂）無菌平皿（塑料/玻璃均可）各 9 個(gè)（2 對(duì)備用），無菌棉簽，三角瓶以制備培養(yǎng)基以及無菌水，以及其他微生物實(shí)驗(yàn)室儀器耗材等。實(shí)驗(yàn)方法： 在灌裝機(jī)進(jìn)行 COP 后將無菌平皿，無菌棉簽，以及空氣采樣器放入潔凈室內(nèi)，空氣采樣器外部需噴灑酒精后用錫箔紙包扎，然后開始 SOP,SOP 結(jié)束后，將無菌平皿在指定位置打開放置 30min，

25、無菌棉簽涂抹灌裝機(jī)指定部位，檢測(cè)無菌區(qū)和潔凈室的空氣質(zhì)量，在 1 立方米的空氣里取 3-5 個(gè)樣品分析總菌數(shù)，再取 3-5 個(gè)樣品分析酵母菌和霉菌的總數(shù)。取樣器可以選用 MerckMAS 公司生產(chǎn)的壓縮空氣取樣器。選用虎紅培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌和霉菌；PCA 培養(yǎng)基培養(yǎng)總菌。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行涂抹取樣分析。取樣位置如下表。其中的一半用于分析總菌，另一半用于分析霉菌和酵母菌。記錄取樣點(diǎn)及各取樣點(diǎn)選取的原因。在系統(tǒng)不運(yùn)行時(shí)，用粒子計(jì)數(shù)器記錄無菌區(qū)/潔凈室中大于 0.5µm 粒子的數(shù)量。操作時(shí)

26、必須身著無菌服，口罩手套等。不同生產(chǎn)線的涂抹、空暴點(diǎn)不同，請(qǐng)依據(jù)相關(guān)設(shè)備供應(yīng)商提供的位置進(jìn)行試驗(yàn)。注意：S1S5 所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果合格后，才能進(jìn)行 S6 實(shí)驗(yàn)。實(shí)例：涂抹實(shí)驗(yàn)點(diǎn)（PROCMAC線為例）共 18 頁第 9 頁2灌裝機(jī)入口星輪FS3A5灌裝機(jī)出口星輪FS9A4取蓋器FS12A3灌裝閥（取相同的五個(gè)）FS5C6假瓶系統(tǒng)支架FS7C7旋蓋頭（取相同的五個(gè)）FS13D8沖瓶機(jī)入口區(qū)域RS2F9沖瓶機(jī)星輪支架RS3F10沖瓶機(jī)出口星輪RS4F11沖瓶機(jī)至灌裝機(jī)轉(zhuǎn)換星輪RS5F12蓋殺菌旋轉(zhuǎn)盤CS5H13蓋沖洗區(qū)CS6HN&#

27、176;位置編號(hào)代碼1旋蓋機(jī)下部平臺(tái)FA1D2灌裝機(jī)進(jìn)口星輪下部平臺(tái)FA2A3沖瓶機(jī)至灌裝機(jī)轉(zhuǎn)換星輪下部平臺(tái)RA1F4沖瓶機(jī)進(jìn)口星輪下部平臺(tái)RA2F5蓋殺菌-沖洗區(qū)CA1H6蓋殺菌-旋轉(zhuǎn)盤區(qū)CA2H空暴實(shí)驗(yàn)點(diǎn)（PROCOMAC線為例） 共 18 頁第 10 頁圖七、涂抹實(shí)驗(yàn)點(diǎn) 1、旋蓋頭2、沖洗盤進(jìn)甁星輪圖八、空暴實(shí)驗(yàn)點(diǎn)1、蓋殺菌區(qū)2、沖洗灌裝轉(zhuǎn)換星輪底部平臺(tái)S6 LG 培養(yǎng)基驗(yàn)證目的：驗(yàn)證整線無菌達(dá)到規(guī)定的要求UHT 和大無菌罐的驗(yàn)證：灌裝機(jī)培養(yǎng)基驗(yàn)證前，應(yīng)首先完成 UHT 和大無菌

28、罐的驗(yàn)證狀況。此驗(yàn)證過程可與培養(yǎng)基驗(yàn)證同時(shí)進(jìn)行，也可單獨(dú)在之前進(jìn)行。培養(yǎng)基制備與滅菌要求與培養(yǎng)基驗(yàn)證相同，但要求培養(yǎng)基在大無菌罐中保持 7 天后取樣采用膜過濾法檢測(cè)微生物，取樣數(shù)量不少于 20份，每份數(shù)量不少于 100ml。共 18 頁第 11 頁 大修驗(yàn)證時(shí)此步驟可省略。事先準(zhǔn)備材料：培養(yǎng)基的原料準(zhǔn)備（詳情請(qǐng)見附表），對(duì)應(yīng)的瓶胚，蓋子等原輔料的準(zhǔn)備。建議，原輔材料按照計(jì)劃量的 120%準(zhǔn)備，以防止意外發(fā)生造成，培養(yǎng)基數(shù)量不足（例如：倒瓶，checkmat 擊打出過多產(chǎn)品，高、歪蓋過多等）并且再

29、根據(jù) UHT 排料的性能考慮。其他：必要對(duì)可能影響驗(yàn)證的因素進(jìn)行確認(rèn)以及改善，比如對(duì)吹瓶風(fēng)道空氣過濾器的維護(hù)，對(duì)風(fēng)道內(nèi)部的擦洗及酒精消毒，對(duì)整個(gè)生產(chǎn)空間進(jìn)行噴霧消毒（1%施特白溶液），鏈條及凡是能接觸到產(chǎn)品的設(shè)備進(jìn)行酒精擦洗，下水道（特別是灌裝間內(nèi)下水道）在清理完畢后要撒入二氧化氯進(jìn)行消毒，對(duì)即將用于測(cè)試的包裝材料，比如瓶蓋，空瓶進(jìn)行測(cè)試，對(duì)包裝設(shè)備進(jìn)行測(cè)試，確保實(shí)驗(yàn)過程順利。并且安排設(shè)備清洗消毒，供應(yīng)商對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行自查，比如灌裝機(jī)查漏，殺菌劑原液濃度等。如果剛完成枯草芽胞桿菌的挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)就要進(jìn)行培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)，則需要用 PAA 對(duì)灌裝區(qū)域進(jìn)行熏蒸殺菌。確認(rèn)

30、保溫室空間是否足夠容納所有培養(yǎng)基的放置與翻檢，燈光亮度是否足夠，以及確定保溫室有溫濕度計(jì)，來確認(rèn)保溫庫溫度濕度能否達(dá)標(biāo)，保溫期間每天安排專人負(fù)責(zé)記錄溫濕度。培養(yǎng)基調(diào)配：LG 培養(yǎng)基的配方（以 20000L 計(jì)，各組分比例可按照 LG 培養(yǎng)基總量等比增減）：1. 葡萄糖（食品級(jí)）400 kg2. 酵母提取物（粉狀分析級(jí)）70 kg3. 蛋白胨（食品級(jí)）40 kg4. 硫酸銨（化學(xué)純級(jí)）40 kg5. 磷酸二氫鉀（化學(xué)純級(jí)）20 kg6. 

31、硫酸鎂（化學(xué)純級(jí)）20 kgLG 培養(yǎng)基的配制方法（20000L）： 可直接購買 1. 向混合缸中注入 5000L 60的處理水。2. 將 40 kg 蛋白胨用 600L 60的處理水預(yù)混，通過濾網(wǎng)加入混合缸中。攪拌直至蛋白胨徹底溶解。3. 在攪拌器開啟的情況下將其余的組分按下列次序加入：共 18 頁第 12 頁酵母提取物70 kg葡萄糖400 kg磷酸二氫鉀20 kg硫酸銨40 kg硫酸鎂20&

32、#160;kg注意：酵母提取物必須采用粉狀分析級(jí)。投料順序按照上述順序進(jìn)行，而且必須等待前一組分完全溶解后才能加入后一個(gè)組分。實(shí)驗(yàn)前對(duì)培養(yǎng)基原材料按以上比例進(jìn)行預(yù)調(diào)配小樣，并按照比例進(jìn)行添加酸堿，對(duì) pH 進(jìn)行測(cè)試。而且需要事先檢測(cè)培養(yǎng)基是否能夠被污染。如能將這些組分分別使用小料缸預(yù)溶解后通過 5u 濾網(wǎng)加入混合缸中更好。4. 攪拌直至所各組分徹底溶解。目測(cè)檢查。5. 用 20oC的處理水將混合缸定容至 20000L。6. 至少 30 分鐘攪拌，取樣測(cè)試 pH(pH 

33、;無需調(diào)節(jié))，濁度和白利度。7. 若為中性/低酸測(cè)試，則將 LG 培養(yǎng)基 pH 值調(diào)至 6.5-6.8（參考添加量：110-130g 化學(xué)純 NaOH加入 1 噸 LG 培養(yǎng)基），如果為高酸測(cè)試則將培養(yǎng)基 pH 值調(diào)至 4.3-4.4（參考添加量：250-330ml 12N HCl 加入 1 噸 LG 培養(yǎng)基 或加檸檬酸調(diào)整亦可），謹(jǐn)慎起見，酸堿第一步添加量參考添加量

34、下限的 80%，然后按照實(shí)際情況，逐漸加入余下量直至 pH 達(dá)標(biāo)為止。8. 在 2 小時(shí)內(nèi)將培養(yǎng)基（不論高酸/低酸，中性培養(yǎng)基）在 137，30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間滅菌。儲(chǔ)存于無菌缸中，否則可能會(huì)引起微生物過度繁殖，造成培養(yǎng)基內(nèi)部渾濁。實(shí)驗(yàn)取樣：從培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)灌裝開始至結(jié)束至少需要 72 小時(shí)，分多批灌裝，共灌裝 36000 瓶培養(yǎng)基，半數(shù)充氮，半數(shù)不充氮，（無充氮裝置時(shí)不需考慮）生產(chǎn)結(jié)束后進(jìn)行微生物取樣,包括沖瓶口無菌水的取樣，沖瓶無菌水，以及做涂抹試驗(yàn)、空暴實(shí)驗(yàn)，取樣后進(jìn)

35、行膜過濾，以總菌以及霉菌/酵母溫度培養(yǎng)。并且對(duì)調(diào)配完成的 LG 培養(yǎng)基料液，無菌蓋，無菌瓶進(jìn)行提前取樣并且進(jìn)行總菌，霉菌/酵母測(cè)試，以便對(duì)未來出現(xiàn)的問題進(jìn)行分析。噴碼：除了按照時(shí)間噴碼外，還要安排標(biāo)記來確認(rèn)特定產(chǎn)品，是否充氮，表格如下共 18 頁第 13 頁FBFNHBHN滿瓶不充氮滿瓶充氮半瓶不充氮半瓶充氮 現(xiàn)場(chǎng)人員安排：測(cè)試期間，除了每個(gè)崗位必須的人員之外，必須安排聯(lián)絡(luò)人員，對(duì)幾個(gè)關(guān)鍵崗位進(jìn)行協(xié)調(diào)，安排專人對(duì)最終數(shù)量進(jìn)行確認(rèn)，防止驗(yàn)證不能達(dá)到規(guī)定數(shù)量，以及安排產(chǎn)品入庫。余下所有人員，安排在生產(chǎn)線上，對(duì)高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。

36、所有挑揀人員必須在實(shí)驗(yàn)之前，對(duì)雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在線上對(duì)衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查，防止落下培養(yǎng)基被撿起放回生產(chǎn)線。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行：在灌注培養(yǎng)基前，按照供應(yīng)商的要求對(duì)生產(chǎn)線設(shè)備及無菌區(qū)進(jìn)行 CIP/SIP/COP/SOP；根據(jù)計(jì)劃準(zhǔn)備培養(yǎng)基的用量，并儲(chǔ)存于無菌缸內(nèi)；在小于 35°C 的條件下灌注培養(yǎng)基。如果檢測(cè)的是 72 小時(shí)，則在 24 小時(shí)的時(shí)候灌注三分之一；在 48 小時(shí)灌注三分之一；在 72 小時(shí)灌注剩下的三分之一。每天產(chǎn)品都要以半瓶充氮，半瓶不充氮的形式進(jìn)行。每次間隔都要

37、進(jìn)行正常的 SOP 處理過程。灌注需全速進(jìn)行。每批灌裝開始取 70 個(gè)無菌瓶，70 個(gè)無菌蓋，開機(jī)最初 3 瓶，每 5 分鐘 1 瓶，閉機(jī) 1瓶檢測(cè)瓶子中殘留消毒劑的量，根據(jù)操作說明確保無殘留。所有產(chǎn)品均倒置碼垛，暫存于 30-35°C條件下，保溫 7 天后翻檢，記錄結(jié)果，14 天后再次翻檢，小于萬分之一的帶菌率則視為通過。圖九、培養(yǎng)基 1、調(diào)配好的培養(yǎng)基2、灌裝出口的培養(yǎng)基S7 中性產(chǎn)品驗(yàn)證（此步只適用于

38、中性生產(chǎn)線無菌驗(yàn)收）共 18 頁第 14 頁事先準(zhǔn)備材料：奶茶的原料準(zhǔn)備（詳情請(qǐng)見附表），對(duì)應(yīng)的瓶胚，蓋子等原輔料的準(zhǔn)備。建議，原輔材料按照計(jì)劃量的 120%準(zhǔn)備，以防止意外發(fā)生造成，奶茶數(shù)量不足（例如：倒瓶，checkmat 擊打出過多產(chǎn)品，高、歪蓋過多等）同時(shí)考慮 UHT 排料數(shù)量。其他要求同培養(yǎng)基驗(yàn)證。奶茶調(diào)配：奶茶配方：（定容:960L）全脂奶粉（新西蘭）41kg白砂糖53kg紅茶粉（大閩）1.5kgkg穩(wěn)定劑 C90011.2kgVC0.15kg異 VC-Na0.15KG小蘇打0.17

39、kg牛奶香精（國際香料 101419）0.1kg紅茶香精（美醇 B4327-10）0.5kg折光：8.58.8PH：6.66.8蛋白質(zhì)含量（g/100ml）：1.0奶茶的配制方法（960L，按試驗(yàn)量等比放大所有數(shù)值）：一、輔料溶解1、白砂糖的溶解：化糖罐內(nèi)加入 1000L 的 60-80的純凈水后，將白砂糖加到化糖罐里溶化 30分鐘。2、膠體溶解：用 40-60，50-100 倍以上的純凈水，用乳化罐將膠體充分溶解后，保持 10 分鐘。3、乳粉溶解：用 40-50，50-100

40、0;倍的純凈水，用乳化罐將乳粉充分溶解，并保溫 20-30 分鐘。共 18 頁第 15 頁4、茶粉用 50-100 倍常溫水溶解備用二、調(diào)配1、在配料罐加入 500-1000kg 底水，打開攪拌器，按次序分別加入以下輔料。2、將溶解好的白砂糖經(jīng) 200 目過濾網(wǎng)過濾后加入。3、溶解好的膠體用 40-60 目過濾網(wǎng)過濾加入配料罐，乳粉經(jīng) 80 目過濾網(wǎng)過濾后加入。4、溶解好的茶粉用 80 目過濾網(wǎng)過濾后加入，其它輔料用

41、 40-50純凈水充分溶解，目視檢查后，加入配料罐中。5、定容至所要調(diào)配的噸數(shù)，加入香料，攪拌 10 分鐘。6、取樣檢查酸度、糖度、PH 值、蛋白質(zhì)含量，依測(cè)量值進(jìn)行調(diào)整，PH 值使用小蘇打或檸檬酸進(jìn)行調(diào)整。7、用 80 目過濾網(wǎng)過濾料液，在 2 小時(shí)內(nèi)將奶茶在 137，30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間滅菌。儲(chǔ)存于無菌罐中，否則可能會(huì)引起微生物過度繁殖。注：調(diào)配時(shí)，配料罐始終打開攪拌器。實(shí)驗(yàn)取樣：從中性產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)灌裝開始至結(jié)束至少需要 72 小時(shí)，分多批灌裝，共灌裝

42、0;34000 瓶，半數(shù)充氮，半數(shù)不充氮，（無充氮裝置時(shí)不需考慮）生產(chǎn)結(jié)束后進(jìn)行微生物取樣,包括沖瓶無菌水，以及做涂抹試驗(yàn)、空暴實(shí)驗(yàn)，取樣后進(jìn)行膜過濾，以總菌以及霉菌/酵母溫度培養(yǎng)。并且對(duì)調(diào)配完成的奶茶，無菌蓋，無菌瓶進(jìn)行提前取樣并且進(jìn)行總菌，霉菌/酵母測(cè)試，以便對(duì)未來出現(xiàn)的問題進(jìn)行分析。生產(chǎn)過程中取瓶口糖斑樣品 840 瓶，每次開機(jī)時(shí)取連續(xù)樣品 140 瓶進(jìn)行瓶口糖斑檢測(cè)，共取 6 次。無一瓶產(chǎn)品出現(xiàn)糖斑方可認(rèn)為試驗(yàn)通過。現(xiàn)場(chǎng)人員安排：測(cè)試期間，除了每個(gè)崗位必須的人員之外，必須安排聯(lián)絡(luò)人員，對(duì)幾個(gè)關(guān)鍵崗位進(jìn)行協(xié)調(diào)，安排專人對(duì)最終數(shù)量進(jìn)行確認(rèn)，防止驗(yàn)證不能達(dá)到規(guī)定數(shù)量，以及安排產(chǎn)品入庫。余下所有人員，安排在生產(chǎn)線上，對(duì)高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。所有挑揀人員必須在實(shí)驗(yàn)之前，對(duì)雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在線上對(duì)衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查，防止落下輸送帶產(chǎn)品被撿起放回生產(chǎn)線。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行：共