冬凌草甲素結構修飾和細胞毒活性評價

1、冬凌草甲素結構修飾和細胞毒活性評價    英文題名 Structural Modification and Cytotoxicity Evaluation of Oridonin  關鍵詞 冬凌草; 冬凌草甲素; 細胞毒; 磷酸化; 前體藥物; 英文關鍵詞 Rabdosia rubescens; Oridonin; cytotoxicity; phosphorylation; prodrug; 中文摘要 冬凌草甲素(Oridonin)是從中草藥冬凌草中提取的一種四環(huán)二萜類化合物,體內外實驗證明其有較強的抗腫瘤作用,臨床上曾用于食管癌和肝癌的治療

2、,取得了一定療效,是一種很有前景的抗癌新藥。目前國內外對冬凌草甲素抗腫瘤作用的機制研究比較廣泛。研究認為,冬凌草甲素能通過降低Bcl-2蛋白表達和上調Bax蛋白表達誘導細胞發(fā)生凋亡,抑制腫瘤細胞的生長。冬凌草甲素作為抗腫瘤的先導化合物,由于在水相和油相中溶解度均較差,因此限制了其臨床應用。為解決以上問題,我們對冬凌草甲素進行結構修飾,以其結構中羥基的反應為基礎,合成一系列衍生物,以期尋找具有臨床應用價值的后選藥物。 本論文以冬凌草甲素為先導化合物,通過乙酰化、縮酮化、磷酸化等反應一共合成了11個冬凌草甲素的衍生物,其結構式如下(圖1)。合成的衍生物均采用硅膠柱層析純化,衍生物結構均經質譜和核磁

3、共振譜確證,其中6個為首次合成的新化合物(化合物4,5,8,9,10,11)。 為考察冬凌草甲素1位羥基對抗腫瘤活性的影響,合成了化合物19,并采用MTT法考察了9種衍生物對三種人源腫瘤細胞(Hela、HT-1080、MCF-7)的細胞毒活性。研究結果顯示部分衍生. 英文摘要 Oridonin is a diterpenoid isolated from Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara. Experiments in vitro and in vivo proved that oridonin have strong anti-tumor activity,a

4、nd it had been used to treat esophageal cancer and liver cancer with specific curative effect.Many research showed that oridonin can inhibit cell growth by down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax expression. Therefore, Oridonin is a new promising anticancer drug. As a lead compound, its so

5、lubility is poor both in the water and 摘要 5-7 Abstract 7-8 1 前言 12-24     1.1 冬凌草甲素的藥理活性研究 12-16         1.1.1 冬凌草甲素的抗腫瘤作用 12-15             1.1.1.1 對人肝癌細胞株 BEL-7402 的殺傷作用 13    &#

6、160;        1.1.1.2 對人宮頸癌細胞株 HeLa 的殺傷作用 13-14             1.1.1.3 對人乳腺癌細胞株 MCF-7 的殺傷作用 14             1.1.1.4 對小鼠成纖維細胞株 L929 的殺傷作用 14    

7、60;        1.1.1.5 對人急性早幼粒細胞白血病細胞株NB4的殺傷作用 14             1.1.1.6 對人急性粒細胞白血病細胞株 HL-60 的殺傷作用 14-15             1.1.1.7 對其他腫瘤細胞株的殺傷作用 15    &#

8、160;    1.1.2 抗突變作用 15         1.1.3 _2受體阻斷作用 15-16         1.1.4 抗氧化作用 16     1.2 臨床應用 16-17         1.2.1 治療原發(fā)性肝癌 16         1.2

9、.2 治療食管癌、賁門癌 16-17     1.3 冬凌草甲素的衍生物研究 17-21         1.3.1 冬凌草甲素14 位羥基?；难苌?17-18         1.3.2 冬凌草甲素1 位羥基?；难苌?18-19         1.3.3 冬凌草甲素7,14-縮醛(酮)類衍生物 19     

10、;    1.3.4 冬凌草甲素芳胺類衍生物 19-20         1.3.5 冬凌草甲素糖苷類衍生物 20-21     1.4 冬凌草甲素的構效關系研究 21-22         1.4.1 -亞甲基環(huán)戊酮結構，即 A 環(huán) 21         1.4.2 C-1,C-6,C-7,C-14 位的四個羥基 21-22

11、    1.5 選題目的與依據 22     1.6 課題設計 22-24         1.6.1 冬凌草甲素1 位氧化衍生物的合成 22-23         1.6.2 冬凌草甲素磷酸酯的合成 23-24 2 實驗部分 24-46     2.1 冬凌草甲素的提取分離 24-26     2.2 冬凌草甲素結構鑒定 26 

12、0;   2.3 冬凌草甲素的純度鑒定 26-28     2.4 冬凌草甲素衍生物的合成 28-41         2.4.1 14-乙?；璨菁姿?化合物1)的制備 28-29         2.4.2 2,14-二乙?；璨菁姿?化合物2)的制備 29-30         2.4.3 7,14-丙酮叉冬凌草甲素(化合物3)

13、的制備 30-31         2.4.4 7,14-(3,4-二甲氧基)苯亞甲叉冬凌草甲素(化合物4)的制備 31-32         2.4.5 14-對甲苯磺?；璨菁姿?5)的制備 32-33         2.4.6 1-氧化冬凌草甲素(6)的制備 33-34         2.4.7 7,14-

14、丙酮叉-1-氧化冬凌草甲素(7)的制備 34-35         2.4.8 7,14-(3,4-二甲氧基)苯亞甲叉-1 氧化冬凌草甲素(化合物8)的制備 35-36         2.4.9 14-對甲苯磺?；?1-氧化冬凌草甲素(9)的制備 36-37         2.4.10 14-亞磷酸二芐基冬凌草甲素(10)的制備 37-38    

15、60;    2.4.11 14-冬凌草甲素磷酸酯(11)的制備 38-39         2.4.12 結果與討論 39-41     2.5 冬凌草甲素衍生物細胞毒活性測定 41-46         2.5.1 實驗原理 41         2.5.2 實驗儀器與材料 41-42    &

16、#160;    2.5.3 細胞培養(yǎng) 42         2.5.4 藥物處理 42-43         2.5.5 活性測定 43-44         2.5.6 結果與討論 44-46 3 結論與展望 46-48     3.1 結論 46     3.2 主要創(chuàng)新點 46-47

17、60;   3.3 展望 47-48 參考文獻 48-52 致謝 52-53 附圖 54-68         1.3.2 冬凌草甲素1 位羥基?；难苌?18-19         1.3.3 冬凌草甲素7,14-縮醛(酮)類衍生物 19         1.3.4 冬凌草甲素芳胺類衍生物 19-20      &

18、#160;  1.3.5 冬凌草甲素糖苷類衍生物 20-21     1.4 冬凌草甲素的構效關系研究 21-22         1.4.1 -亞甲基環(huán)戊酮結構，即 A 環(huán) 21         1.4.2 C-1,C-6,C-7,C-14 位的四個羥基 21-22     1.5 選題目的與依據 22     1.6 課題設計 22-24  &

19、#160;      1.6.1 冬凌草甲素1 位氧化衍生物的合成 22-23         1.6.2 冬凌草甲素磷酸酯的合成 23-24 2 實驗部分 24-46     2.1 冬凌草甲素的提取分離 24-26     2.2 冬凌草甲素結構鑒定 26     2.3 冬凌草甲素的純度鑒定 26-28     2.4 冬凌草甲素衍生物的合成 28-4

20、1         2.4.1 14-乙?；璨菁姿?化合物1)的制備 28-29         2.4.2 2,14-二乙?；璨菁姿?化合物2)的制備 29-30         2.4.3 7,14-丙酮叉冬凌草甲素(化合物3)的制備 30-31         2.4.4 7,14-(3,4-二甲氧基)苯

21、亞甲叉冬凌草甲素(化合物4)的制備 31-32         2.4.5 14-對甲苯磺?；璨菁姿?5)的制備 32-33         2.4.6 1-氧化冬凌草甲素(6)的制備 33-34         2.4.7 7,14-丙酮叉-1-氧化冬凌草甲素(7)的制備 34-35         2.4.8

22、7,14-(3,4-二甲氧基)苯亞甲叉-1 氧化冬凌草甲素(化合物8)的制備 35-36         2.4.9 14-對甲苯磺?；?1-氧化冬凌草甲素(9)的制備 36-37         2.4.10 14-亞磷酸二芐基冬凌草甲素(10)的制備 37-38         2.4.11 14-冬凌草甲素磷酸酯(11)的制備 38-39    

23、60;    2.4.12 結果與討論 39-41     2.5 冬凌草甲素衍生物細胞毒活性測定 41-46         2.5.1 實驗原理 41         2.5.2 實驗儀器與材料 41-42         2.5.3 細胞培養(yǎng) 42       &

24、#160; 2.5.4 藥物處理 42-43         2.5.5 活性測定 43-44         2.5.6 結果與討論 44-46 3 結論與展望 46-48     3.1 結論 46     3.2 主要創(chuàng)新點 46-47     3.3 展望 47-48 參考文獻 48-52 致謝 52-53 附圖 54-68    

25、;     1.3.2 冬凌草甲素1 位羥基?；难苌?18-19         1.3.3 冬凌草甲素7,14-縮醛(酮)類衍生物 19         1.3.4 冬凌草甲素芳胺類衍生物 19-20         1.3.5 冬凌草甲素糖苷類衍生物 20-21     1.4 冬凌草甲素的構效關系研究 21-

26、22         1.4.1 -亞甲基環(huán)戊酮結構，即 A 環(huán) 21         1.4.2 C-1,C-6,C-7,C-14 位的四個羥基 21-22     1.5 選題目的與依據 22     1.6 課題設計 22-24         1.6.1 冬凌草甲素1 位氧化衍生物的合成 22-23  

27、0;      1.6.2 冬凌草甲素磷酸酯的合成 23-24 2 實驗部分 24-46     2.1 冬凌草甲素的提取分離 24-26     2.2 冬凌草甲素結構鑒定 26     2.3 冬凌草甲素的純度鑒定 26-28     2.4 冬凌草甲素衍生物的合成 28-41         2.4.1 14-乙?；璨菁姿?化合物1)的制備 28-

28、29         2.4.2 2,14-二乙?；璨菁姿?化合物2)的制備 29-30         2.4.3 7,14-丙酮叉冬凌草甲素(化合物3)的制備 30-31         2.4.4 7,14-(3,4-二甲氧基)苯亞甲叉冬凌草甲素(化合物4)的制備 31-32         2.4.5 14-對甲苯磺?；璨菁姿?5)的制備 32-33         2.4.6 1-氧化冬凌草甲素(6)的制備 33-34         2.4.7 7,14-丙酮叉-1-氧