孕婦血清中膽固醇硫酸的變化及生理意義

1、孕婦血清中膽固醇硫酸的變化及生理意義【摘要】目的測定妊娠婦女血清及胎盤絨毛中膽固醇硫酸(cholesterol sulfate,CS)含量的變化，分析CS對凝血酶活性的影響，探討CS在妊娠過程中的生理意義。方法利用薄層層析法(thin layer chromatography,TLC)，測定30例妊娠婦女血清及21例胎盤絨毛組織中CS的含量，同時在體外測定CS對凝血酶活性的抑制作用。結果妊娠婦女血清中CS含量從妊娠早期開始出現(xiàn)上升趨勢，且隨孕周增加而升高，與孕周呈正相關關系(r=0.69，P0.01)。CS含量在妊娠晚期達到最高值，為非妊娠婦女血清中濃度的2.1倍(P0.01)。胎盤絨毛中CS

2、含量也呈相同變化趨勢。CS具有抑制凝血酶活性作用。結論胎盤絨毛中CS脫落至血中可能是妊娠婦女血中CS增高的原因之一，妊娠婦女血中CS增加對調解妊娠血液凝固狀態(tài)具有生理意義?！娟P鍵詞】膽固醇硫酸妊娠胎盤絨毛薄層層析法凝血酶膽固醇硫酸(CS)存在于多種組織及體液中，如皮膚、毛發(fā)、子宮內膜、血液等，其生理作用被認為與受精、縮短血液凝固時間、調解蛋白激酶C活性等有關。本實驗首次分析妊娠婦女血清及胎盤絨毛組織中CS含量的變化，以探討CS在妊娠中的生理作用。1資料與方法1.1研究對象隨機選擇在我院正常妊娠者30例為研究組，其中妊娠早期(12周)、妊娠中期(1328周)、妊娠晚期(3642周)各10例，均無

3、妊娠合并癥，無口服避孕藥史及煙酒史。平均年齡(30.22.5)歲，平均產次(1.160.27)次。另選條件相似未孕健康婦女10例作為對照組。1.2方法1.2.1血清及胎盤絨毛中CS測定(1)標本采集兩組病例于晨起空腹，自肘正中靜脈采血5ml，立即分離血清，于-80保存，集中待檢。妊娠早期及中期胎盤絨毛組織來自人工流產及中期引產患者；妊娠晚期胎盤絨毛組織來自正常分娩及剖宮產產婦。妊娠中期及晚期胎盤絨毛取自胎盤中央處。胎盤絨毛組織取材后，用PBS洗凈，冷凍干燥，稱重，-80保存，集中待檢。(2)提取血清及胎盤絨毛中的酸性脂質利用改良的巖森正男方法1提取血清中酸性脂質。首先利用不同體積比例的氯仿和甲

4、醇(41、11和11，V/V)，連續(xù)在40下提取血清中總脂質，然后利用柱狀層析法(DEAE-Sephadex A-25,Pharmacia公司)將其分離成中性和酸性兩部分。再將酸性部分通過堿性處理、透析、蒸餾等方法處理后，將其溶于氯仿及甲醇混合液中(11，V/V)，于4保存，集中檢測。胎盤絨毛組織酸性脂質部分利用巖森正男方法抽出1。(3)利用TLC法測定血清及胎盤絨毛中CS將一定量(0.3ml血清或0.5mg凍干胎盤絨毛組織相當量)上述酸性脂質層析于HP TLC板(Merck公司)。展開溶劑為氯仿、甲醇、丙酮、酢酸及水(82421，V/V)的混合液。利用酢酸酮法進行發(fā)色。發(fā)色后HPTLC板利用

5、TLC密度測定儀(CS-9000，Shimadzn公司)進行定量測定。標準品CS利用化學方法合成2。1.2.2分析酸性脂質對凝血酶活性的影響在37將凝血酶分別與各種酸性糖脂質包括CS、膽固醇、腦硫脂(sulfatide)、半乳糖苷神經酰胺(galactosyl ceramide,GalCer)、神經節(jié)苷脂(GM3 ganglioside)予先反應10分鐘，然后再使其與凝血酶的底物反應3。1.2.3統(tǒng)計學處理采用t檢驗、直線相關分析法。2結果2.1各組血清中CS含量比較各組血清中CS含量測定結果見表1。表1各組血清CS含量比較(s)組別例數(shù)CS(mol/L)非孕組10早期妊娠10中期妊娠101)

6、晚期妊娠102)注：1)與非妊娠比較P0.05；2)與早期妊娠比較P0.01 由表1可見，CS隨孕周增加而升高，妊娠晚期增加最為明顯，達到非妊娠血清中CS濃度的2.1倍(P0.01)。血清中CS含量和孕周間呈正相關關系(r=0.69，P0.01)。2.2各組胎盤絨毛組織中CS含量比較結果見表2。表2各組胎盤絨毛CS含量測定值(s)組別例數(shù)每毫克干燥質量含CS的pmol數(shù)早期妊娠7中期妊娠71)晚期妊娠72)注：1)與早期妊娠比較P0.01；2)與早期妊娠比較P0.001由表2可見，胎盤絨毛組織中CS含量隨孕周增加而增高，妊娠中期較妊娠早期高4.7倍(P0.01)，而妊娠晚期胎盤絨毛組織中CS含

7、量更高，是妊娠早期的6.2倍，差異非常顯著(P0.001)。胎盤絨毛中CS含量與孕周呈正相關關系(r=7.9，P0.01)。2.3酸性脂質對凝血酶活性的影響為探討妊娠婦女血清及胎盤絨毛中CS增高生理機制，本研究測定了各種酸性脂質在體外對凝血酶活性的抑制作用。結果見表3。 表3酸性脂質對凝血酶的抑制作用酸性脂質相對凝血酶活性(%)對照CS膽固醇SulfatideGalCerGM3由表3可見，在體外CS幾乎可以完全抑制凝血酶的活性，而其他酸性脂質除GM3對凝血酶活性稍有抑制外，其余對凝血酶活性無抑制作用。3討論如本文結果所示，妊娠婦女血清中CS含量隨孕周增加而顯著升高，其原因可能為妊娠期間類固醇類

8、激素水平增高有關。因為報道證明與硫酸類固醇類的同化和異化作用相關的酶受類固醇類激素的調解46。各組織(如胎盤絨毛)中CS合成增加是由于妊娠激素水平增加所致。胎盤絨毛中CS含量隨孕周增加而顯著性增高(P0.01)，妊娠晚期含量為早期的6.2倍，所以胎盤絨毛中CS可能為血中CS的來源之一。血液中CS增加還可能由于其他各種病理性原因所致，如魚鱗癬、肝硬化、高膽固醇血癥、甲亢等。CS在組織中蓄集的原因是由于類固醇硫酸脂酶(steroid sulfatase)的缺乏，或是由于CS合成的增加所致7，8。血液中的CS還與血液凝固有關9，10。CS作用于第凝血因子和前激肽釋放酶而縮短凝血時間。CS還能促進血小

9、板合成血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)。妊娠期間，特別是妊娠晚期，血液處于高凝狀態(tài)。妊娠期間血液的高凝狀態(tài)是一種生理過程，對維持妊娠具有一定的生理意義。CS可能是導致妊娠期間血液高凝狀態(tài)的原因之一。血栓素A2(thromboxane A2，TXA2)使血小板內cAMP減少，因而有很強的聚集血小板、收縮血管的作用。TXB2為TXA2代謝產物，無活性。CS促進TXB2的形成增加，從而降低TXA2的作用，這對抑制血管收縮，降低血小板聚集，減少微血栓形成有著重要意義，特別是胎盤絨毛局部CS高度蓄積對維持胎盤局部微循環(huán)的通暢將發(fā)揮重要作用。本實驗還證明，在體外CS可以幾乎完全抑制凝血

10、酶活性，而血中其他的酸性脂質如GM3、sulfatide等則無此作用。這說明CS具有促進和抑制凝血的雙重作用。血凝是一種動態(tài)平衡。CS在調解其平衡過程中如何發(fā)揮作用還尚不清楚，將有待于進一步研究解決。作者單位：林蓓(中國醫(yī)科大學第二臨床學院婦產科沈陽，110003)歐陽玲(中國醫(yī)科大學第二臨床學院婦產科沈陽，110003)張淑蘭(中國醫(yī)科大學第二臨床學院婦產科沈陽，110003)參考文獻1，Iwamori M,Sawada K,Hara Y,et al.Neutral glycophingolipids and ganlioside of bovine thyroid.J Biochem,19

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