生理實(shí)驗(yàn)部分

1、植物組織水勢(shì)的測(cè)定小液流法實(shí)驗(yàn)原理植物組織的水分狀況可用水勢(shì)來(lái)表示。植物體細(xì)胞之間、組織之間以及植物體與環(huán)境之間的水分移動(dòng)方向都由水勢(shì)差決定。將植物組織放在已知水勢(shì)的一系列溶液中，如果植物組織的水勢(shì)小于某一溶液的水勢(shì)，則組織吸水，反之組織失水。若兩者相等，水分交換保持動(dòng)態(tài)平衡。組織的吸水或失水會(huì)使溶液的濃度、密度、電導(dǎo)率以及組織本身的體積與質(zhì)量發(fā)生變化。根據(jù)這些參數(shù)的變化情況可確定與植物組織等水勢(shì)的溶液。植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mol/L）各 10 mL，分別注入編好號(hào)的 7

2、支對(duì)照組試管中。另取 7 個(gè)青霉素小瓶對(duì)應(yīng)試管編號(hào)，從對(duì)照管中分別吸 2 mL 溶液入相同編號(hào)的試驗(yàn)組小瓶中。用打孔器在葉片中部靠近主脈附近打取葉圓片，隨機(jī)取樣，每試驗(yàn)組小瓶中放入 30 片葉圓片，加塞，放置 30 min，其間搖動(dòng)數(shù)次。到時(shí)間后，用解剖針沾取少許甲烯藍(lán)粉末加入小瓶中，并震蕩，此時(shí)溶液呈藍(lán)色。用 7 支毛細(xì)滴管從試驗(yàn)組小瓶中依次吸取著色的液體少許，伸入同號(hào)對(duì)照組溶液的中部，緩慢放出藍(lán)色溶液，輕輕取出滴管，觀察藍(lán)色液滴的移動(dòng)方向。根據(jù)公式計(jì)算葉片細(xì)胞的水勢(shì)w = - icRTi 為解離系數(shù)，蔗糖為 1；c 為小液滴在其中基本不動(dòng)的溶液的濃度，單位為 mol/L；R 為摩爾氣體常數(shù)

3、，R = 0.0083 L·MPa/mol·K；T 為熱力學(xué)溫度，單位 K實(shí)驗(yàn)結(jié)果外液濃度mol/L小液滴移動(dòng)方向組織水勢(shì)與外液水勢(shì)比較組織水勢(shì)計(jì)算               植物的元素缺乏癥元素缺乏癥檢索1、 老葉受影響1） 影響遍及全株，下部葉子干枯并死亡A、植株淡綠色，下部葉子發(fā)黃，葉柄短而纖弱缺NB、植株深綠色，并出現(xiàn)紅或紫色，下部葉子發(fā)黃，葉柄短而纖弱缺P2） 影響限于局部，有缺綠斑，下部葉子不干枯，葉子邊緣卷曲呈

4、凹凸不平A、 葉子缺綠斑有時(shí)變紅，有壞死斑，葉柄纖弱缺MgB、 葉子缺綠斑，在葉邊緣和近葉尖或葉脈間出現(xiàn)小壞死斑，葉柄纖弱缺KC、 葉子缺綠斑，葉子包括葉脈產(chǎn)生大的壞死斑，葉子變厚，葉柄變短缺Zn2、 幼葉受影響1） 頂芽死亡，葉子變形和壞死A、 幼葉變鉤狀，從葉尖和邊緣開始死亡缺CaB、 葉基部淡綠色，從基部開始死亡，葉子扭曲缺B2） 頂芽仍活著，缺綠或萎蔫而無(wú)壞死斑A、 幼葉萎蔫，不缺綠，莖尖弱缺CuB、 幼葉不發(fā)生萎蔫，缺綠a、 有小壞死斑，葉脈仍綠色缺Mnb、 無(wú)壞死斑，葉脈仍綠色缺Fec、 無(wú)壞死斑，葉脈壞死缺S葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理葉綠體色素是植物吸收太陽(yáng)光能

5、進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。根據(jù)它們?cè)谟袡C(jī)溶劑中的溶解特性，可用丙酮將它們從葉片中提取出來(lái)。并可根據(jù)它們?cè)诓煌袡C(jī)溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的吸附能力不同，將它們彼此分離開。葉綠素是一種雙羧酸的酯，可與堿發(fā)生皂化反應(yīng)，產(chǎn)生的鹽能溶于水，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。葉綠素在光照下可產(chǎn)生暗紅色的熒光。葉綠素中的鎂可被 H+ 取代而生成褐色的去鎂葉綠素；加入銅鹽作用，后者則成為綠色的銅代葉綠素。銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作綠色植物的浸漬標(biāo)本。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離稱取新鮮葉片 2 g

6、，放入研缽中加丙酮 5 mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加丙酮 10 mL，以漏斗過(guò)濾之，即為色素提取液。把展層用的濾紙剪成 2 cm × 20 cm 的紙條，將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約 1.5 cm，寬約 0.5 cm 的窄條。用毛細(xì)管吸取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條的上方，注意一次所點(diǎn)溶液不可過(guò)多，風(fēng)干后再點(diǎn)，重復(fù)多次。在大試管中加入四氯化碳 35 mL 及少許無(wú)水硫酸鈉。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，使窄條浸入溶劑中（色素點(diǎn)要略高于液面），蓋緊軟木塞，直立于陰暗處進(jìn)行層析。待四種色素帶清晰展開后，取出濾紙條，稍干后用鉛筆勾出色素帶邊緣。葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒

7、光現(xiàn)象 取上述色素提取液少許于試管中，分別在反射光和透射光一側(cè)觀察提取液的顏色。銅代反應(yīng) 取上述色素提取液少許于試管中，1 滴 1 滴加濃鹽酸，直至溶液出現(xiàn)褐綠色。然后加醋酸銅晶體少許，慢慢加熱溶液，則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。黃色素與綠色素的分離 取上述色素提取液 10 mL，加到盛有 20 mL 乙醚的分液漏斗中，搖動(dòng)分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入 30 mL 蒸餾水，輕輕搖動(dòng)分液漏斗，靜止片刻，溶液即分為兩層。色素已轉(zhuǎn)入上層乙醚中，棄去下層丙酮和水，再用蒸餾水沖洗乙醚溶液 12 次。然后加入 5 mL 30% KOH甲醇溶液，用力搖動(dòng)分液漏斗，靜置約 10 min，再加蒸餾水約 10 mL，搖動(dòng)后靜

8、置，則得到黃色素層和綠色素層。離體葉綠體光還原反應(yīng)（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟離體葉綠體的提取稱取 10 g 新鮮菠菜葉片（去除粗葉脈），剪碎，加10 mL 預(yù)冷的提取介質(zhì)（分兩次加入）和少許石英砂，冰浴中迅速研磨成勻漿，再加 10 mL 提取介質(zhì)，用 4 層紗布將勻漿過(guò)濾于一離心管中，2500 r / min 離心 3 min，棄沉淀，上清液 4000 r / min 離心 10 min，棄上清。所得沉淀即為完整葉綠體。用 15 mL 提取介質(zhì)使葉綠體懸浮，置冰浴中備用。葉綠體光還原反應(yīng)的測(cè)定取 3 支潔凈試管，分別編號(hào)，按下表加入試劑：管號(hào)提取介質(zhì)/mL葉綠體懸液/mL煮沸時(shí)間/min染料/mL1

9、121513注：2號(hào)管加熱煮沸，然后加染料，3號(hào)管為比色時(shí)的空白對(duì)照將試管置于離 100 W 燈光 60 cm 處照光，3 min 后于 620 nm 處測(cè)光密度。（注意：離心機(jī)和分光光度計(jì)的使用方法）植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定（小籃子法）實(shí)驗(yàn)原理利用 Ba(OH)2 溶液吸收呼吸過(guò)程中釋放的CO2，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留的Ba(OH)2，從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差，即可計(jì)算出呼吸過(guò)程中釋放 CO2 的量。實(shí)驗(yàn)步驟稱取萌發(fā)的小麥種子 15 g，包入紗布袋內(nèi)，將紗布袋掛在廣口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要掛得太低。在廣口瓶中加 0.05 mol/L Ba(OH)2 25 mL，塞上瓶塞，用熔化的

10、石蠟密封瓶口，防止漏氣。每 10 min 左右輕輕搖動(dòng)廣口瓶，破壞溶液表面的 BaCO3 薄膜，以利對(duì)CO2的吸收。1 h 后，打開瓶塞，迅速加 2 滴指示劑，用1/44 mol/L 草酸滴定，直到綠色變成紫色為止。記錄所耗用的草酸溶液的體積（mL）數(shù)。另取同樣重量的煮沸殺死的小麥種子，作同樣測(cè)定，以次作為對(duì)照。計(jì)算呼吸強(qiáng)度。種子活力的快速測(cè)定（1分）（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)原理凡有生命力的種子胚部，在呼吸作用過(guò)程中都有氧化還原反應(yīng)，而無(wú)生命活力的種胚則無(wú)此反應(yīng)。當(dāng) TTC 滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶（ NADH 或 NADPH ）上的氫還原時(shí)，便由無(wú)色 TTC 變?yōu)榧t色的 TTF。（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)原理凡活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力，而死的種子胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便